biológia

Zafarbenie Kinyoun

Zafarbenie Kinyoun
Cryptosporidium parvum zafarbené s farbením Kinyoun. Zdroj: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Čo je Kinyounovo zafarbenie?

Ten Zafarbenie Kinyoun Je to zafarbovacia technika, ktorá sa používa na farbenie baktérií a parazitov odolných voči kyseline -alkoholu. Narodil sa z úpravy sfarbenia Ziehl-Neelsena. Obe techniky sa interpretujú rovnakým spôsobom, ale líšia sa v dvoch prvkoch: pri príprave hlavného činidla a v ktorej technika Kinyoun nepoužíva teplo tepla.

Z tohto dôvodu je tiež známy ako Ziehl-Neelsen v chladnom modifikovanom alebo Kinyounovom za studenom farbení. Je označený pre farbu Tuberkulóza mycobacterium, Leprae mycobacterium, Atypické mykobaktérie, Nocardias SP, Cryptosporidium Parvum, Cryptosporidium MeleGridis, Cryptosporidium Felis, Cryptosporidium Muris a Cyklosporras cayetanensis.

Je potrebné poznamenať Nokardia S touto technikou sú slabo zafarbené, pretože sú čiastočne kyslým alkoholom, takže pre tento žáner dochádza k modifikácii metodiky.

Na druhej strane bola Kinyounova technika kombinovaná s trichromickou technikou modifikovanou Didierom na detekciu kokcidií (Kryptosporidium parvum a Isospora Belli) a mikrosporidárne spóry (Enterocytozoon bieneusi a Enchelitozoon Instinalis).

Základ

Hlavným činidlom zafarbenia je karbolfucsín alebo fenicada fuchsin, ktorý má vlastnosť spojenia existujúcich kyselín karbolových vo vnútri rytierskej bunkovej steny, bohatej na lipidy (mykolové kyseliny) mykobaktérie a určitých parazitov.

Tento zväz nie je pôsobený v kyslom odfarbení, a preto sú mikroorganizmy definované ako rezistentná alkoholová kyselina.

Na rozdiel od techniky Ziehl-Neelsen, ktorá fixuje farbivo cez teplo, v technike Kinyoun nie je potrebný, pretože roztok Fenicada Fuchsin, ktorý je pripravený, obsahuje vysokú koncentráciu fenolu.

Môže vám slúžiť: Salmonella-shigella agar

Fenol rozpustí lipidový materiál bunkovej steny, ktorý umožňuje vstup karbolfucsínu farbiva. Po preniknutí farbiva je fixované napriek umývaniu s alkoholom.

Týmto spôsobom sa mikroorganizmy rezistentných alkoholu berú charakteristickú červenú farbu, zatiaľ čo všetko, čo nie je kyslý alkohol, sa sfarbuje a zafarbuje modrá.

Technika

Materiál

  • Modifikovaný fechsin.
  • Alkoholový kyselina.
  • Metólska modrá.

Kinyoun fenikovaný prípravok Fuchsina

  • Základná fuchsina: 4 gr.
  • Fenol: 8 ml.
  • Alkohol (95%): 20 ml.
  • Destilovaná voda: 100 ml.

Základný fuchsín v alkoholu by sa mal pomaly rozpúšťať a neustále sa mieša. Následne sa kryštalizovaný fenol topí v kúpeľni pri 56 ° C. Po rozpustení sa do roztoku fuchsínu pridá 8 ml, predtým pripravený.

Prípravok

  • Koncentrovaná kyselina chlorovodíková: 3 ml.
  • Etanol (95%): 97 ml.

Musíte zmerať, pripojiť sa a miešať.

Príprava farbiva metylénového modrého kontrastu

  • Metylénová modrá: 0.3 g.
  • Destilovaná voda: 100 ml.

Váži a rozpúšťa sa.

Technika farbenia Kinyoun

  • Pripravte náter priamo zo vzorky, ktorá môže byť spúta, pľúcna tekutina, sediment moču, mozgovomiechový mostík alebo výkaly, alebo zo suspenzie mikroorganizmov získaných z čistých kolónií vyvinutých v mediálnom médiu.
  • Opraviť rozmazanie teplom.
  • Položte náter na sfarbenie mostu a zakryte sa Fenicada Fuchsin Reagent z Kinyoun pripraveného. Nechajte stáť 3 alebo 5 minút.
  • Umyť destilovanou vodou.
  • Ozdobte kyslým alkoholom po dobu 3 minút a znova umyte destilovanou vodou.
  • Ozdobte znova kyslým alkoholom 1 alebo 2 minúty, kým nie je viac sfarbenie.
  • Umyte sa destilovanou vodou a nechajte vypustiť, vložte skĺznutie do zvislej polohy.
  • Prikryte prípravku metylénovou modrou a nechajte 4 minúty.
  • Premyť destilovanou vodou a nechajte vzduch zaschnúť.
  • Preskúmajte 40x a potom 100x.
Môže vám slúžiť: Clear Field Microscope: Charakteristiky, diely, funkcie

Ak chcete vylepšiť a urýchliť zafarbenie mikroorganizmov rezistentných alkoholu, pridá sa 1 kvapka zvlhčujúceho činidla (napríklad žaba č. 7) do 30 alebo 40 ml fenicate fuchsinu z Kinyoun.

Niektoré laboratóriá menia farbivo na kontrast modrého metylénu v dôsledku jasne zelenej alebo kyseliny pikrovej. Prvý dáva pozadí zelenú farbu a druhá generuje žltú farbu.

Špeciálna technika Kinyoun pre Nokardia

Na zlepšenie farbenia rodových baktérií Nokardia Používa sa modifikácia Kinyounovo zafarbenia. Táto technika je nasledovná:

  • Zakryte rozmazanie Fenicada Fuchsinu z Kinyoun na 3 minúty.
  • Umyť destilovanou vodou.
  • Stručne sfarbte s 3% pripraveným alkoholom, kým nie je viac sfarbenie.
  • Znova umyte destilovanou vodou.
  • Zakryte prípravku metylénovou modrou a konajte 30 sekúnd.
  • Premyť destilovanou vodou a nechajte vzduch zaschnúť.

Kombinovaná technika fenikovanej a trichromickej fuchsiny modifikovanej Didierom

Táto technika sa odporúča na analýzu vzoriek stolice pri hľadaní kokcidií a spór MicroSporidium SP v rovnakom čase. Postup, ktorý treba dodržiavať, je nasledujúci:

  • Zakryte rozmazanie Fenicada Fuchsinu z Kinyoun na 10 minút.
  • Vyberte farbivo a premyjte destilovanou vodou.
  • Ozdobte po dobu 30 sekúnd alkoholom s kyselinou chlorovodíkovou.
  • Znova umyte destilovanou vodou.
  • Zakryte náter trrichromickým roztokom počas 30 minút pri 37 ° C.
  • Umyť destilovanou vodou.
  • Ozdobte 10 sekúnd alkoholom kyseliny octovej.
  • Umyte zápach po dobu 30 sekúnd pomocou 95% etanolu.

Qa

Ako pozitívna kontrola sa náter pripravuje s kmeňmi Tuberkulóza mycobacterium a sú farbené činidlami pripravenými na overenie, či baktérie majú správnu farbu (červená fucsia).

Môže vám slúžiť: gametoogenéza

Negatívne kontroly sa môžu použiť aj prípravou náter s akýmkoľvek kmeňom, ktorý nie je rezistentná alkoholová kyselina, čím skontrolujte, či celá vzorka má kontrastnú farbu.

Technika Kinyoun v porovnaní s technikou Ziehl-Neelsen

Kinyounova technika je jednoduchšia, pretože eliminuje prechod zahrievania, ale jeho hlavnou výhodou je, že sa vyhýba emisii výparov, vysoko toxických a spôsobujúcich dlhodobú rakovinu. Preto je Kinyounovo farbenie bezpečnejšie pre personál zodpovedný za vykonávanie farbenia.

Je dôležité vziať do úvahy, že musíte dávať pozor, aby sa reagencie neprichádzali do priameho kontaktu s pokožkou, pretože sú korozívne a sfarbenie je horľavý.

Pokiaľ ide o nevýhody, negatívny náter nevyhnutne naznačuje, že mikroorganizmus nie je prítomný. Okrem toho prítomnosť bunkového detritu môže spôsobiť falošné pozitíva, čo vytvára zmätok v diagnostike.

Referencia

  1. Aplikovaná klinická chémia. BK Kinyoun Sit. Cromakit sa zotavil.je.
  2. Orozco-kriko, m. Kinyoun farbenie a dva kokcidios v HIV. MD Medical Magazine. 
  3. Forbes, b., SAHM, D., Weissfeld, a. Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do.