Máj grünwald-giemsa škvrna

Vzorka chronickej myeloidnej leukémie s farbením mája Grünwald-Giemsa. Zdroj: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Čo je májové farbenie Grünwald-Giemsa?

Ten Máj grünwald-giemsa škvrna, o Pappenheim, je technika diferenciálnej sfarbenia, ktorá mieša reagencie giemsa a máj grünwald. Používa sa na diferenciáciu normálnych a abnormálnych krviniek v periférnej krvi a kostnej dreni, ako aj na farbenie histologických rezu a cytologických vzoriek.

Obidve reagencie - Giemsa a máj grünwald - sú odvodené z Romanowského farbenia, techniky založenej na kombinácii kyslých a základných farbív.

Giemsa zlepšila techniku ​​stabilizáciou zmesi eozínu, metylénovej modrej a jej derivátov, glycerolom. Namiesto toho, máj Grünwald použil eozín a metylénovú modrú, pri použití metanolu ako rozpúšťadla. Táto strategická kombinácia poskytla vynikajúce výsledky.

Aj keď z hľadiska morfológie buniek pôsobí podobne ako sfarbenie Giemsa a Wright, táto technika zlepšuje vyššie uvedené vyfarbenie parazitov, ktoré spôsobujú maláriu, zlo Chagasu, leishmaniázy a trichomoniázy.

Okrem toho sa ukázalo, že je veľmi užitočný pre cytologickú štúdiu spermatickej kvapaliny. Nielenže sa zdôraznilo ukázaním morfologických charakteristík spermií, ale tiež umožňuje výrazne diferencovaný leukocyty, epitelové bunky a spermatogenézové bunky.

Základ

Táto technika sleduje základ Romanowského zafarbenia, v ktorom kyslé farbivá majú selektívnu afinitu k základným zložkám buniek a kyslých zložiek priťahujú základné farbivá.

Inými slovami, bunkové štruktúry aj farbivá majú kladné alebo záporné elektrické zaťaženie, rovnaké zaťaženie sa odpudzuje a priťahujú rôzne zaťaženia.

Napríklad základné farbivá, ako napríklad metylénová modrá, sú pozitívne načítané a priťahované negatívne zaťaženými štruktúrami. Preto toto farbivo farbije jadrá, ktoré sú bohaté na DNA a RNA, ktoré majú negatívne zaťažené fosfátové skupiny.

Granule bazofilného segmentu a cytoplazmy mononukleárnych bielych krviniek obsahujúcich ARN sú tiež zafarbené.

Môže vám slúžiť: Jalisco's Flora a Fauna: Reprezentatívne druhy

Kyslé farbivo má tiež negatívne zaťaženie, takže sa viaže na pozitívne zaťažené štruktúry, ako sú erytrocyty a granule segmentovaných eozinofilov. Pokiaľ ide o granule segmentovaných neutrofilov, obidve farbivá sú nastavené.

Rozmanitosť farbív

V tejto technike kombinácia reakcií medzi orthochromatickými a metakromatickými sfarbením koexistuje. Ortochromatický (eozín a metylénová modrá) sú fixované na bunkovú štruktúru, s ktorou súvisia a poskytujú stabilnú farbu, ktorá sa nemení.

Na druhej strane, metacromatická (tie odvodené od metylénovej modrej, Azure a Azure B), ich pôvodná farba sa líši, keď sa spojí so špecifickou štruktúrou, môže existovať aj rôzne nuansy.

Nakoniec, krok, ktorý podnikne roztok May Grünwald. Aby sa to stalo, farbivo sa musí stať polárnym alebo ionizujúcim, a tak byť schopný vyzrážať sa a pozrieť sa na súvisiace štruktúry.

Technika

Materiál

• Šmykľavky.
• Sfarbenie.
• May Grünwald Riešenie.
• Zafarbenie Giemsa.
• Destilovaná voda.

Koncentrované májové farbivo

0,25 GR metylénovej eozínovej modrej (farbivo podľa May Grünwald) a rozpustenie v 100 ml metanolu by sa malo vážiť. Potom je príprava zmiešaná na 1 hodinu a nechajte stáť 24 hodín. Po čase sa filtruje.

Aby sa táto technika uplatňovala, farbivo z mája Grünwald sa zriedka takto: pre 200 ml zriedeného farbiva sa merá 30 ml koncentrovaného roztoku, 20 ml roztoku pufra a 150 ml destilovanej vody upravenej na pH 7.2-7.3. Následne je zmiešaný a filtrovaný.

Koncentrované giemsa sfarbenie

0,5 GR azur-eozínového vrcholu metylénu (farbivo podľa GiemSA), rozpustí sa v 50 ml metanolu a pridáva 50 ml glycerínu.

Na vykonanie techniky je 1:10 zriedené roztokom vyrovnávacej pamäte a nechajte stáť 10 minút. V prípade potreby sa dá filtrovať.

Môže vám slúžiť: Mesénquima

Príprava roztoku pufra pri pH 7.2

Mali by sa zvážiť:

• 40 mg di-hydrogénového fosforečnanu draselného (KH2PO4).
• 151 mg vodíkového di-syphotického fosfátu 12-hydrátu (Na2HPO4).

Obe zlúčeniny sa rozpustia v 100 ml vody.

Sanguínový alebo kostný medol srols tindion postup

Existujú dva modality: klasika a rýchly.

Klasická modalita

• Zakryte zápach 2 alebo 3 minúty s roztokom máj Grünwald zriedeným roztokom.
• Premyť pufrovanou destilovanou vodou, aby ste odstránili predchádzajúci roztok.
• Prikryte rovnakým pufrovaným roztokom pre umývanie a nechajte 1 minútu. Myšlienka je, že predné farbivo je pripevnené k štruktúram a že bunky sú zároveň hydratované.
• Pridajte 12 zriedených kvapiek tinktúry Giemsa na tlmivú vodu a vyhodte do zmiešania a homogenizácie. Nechajte stáť 15 alebo 20 minút.
• Pmeľbu umyte tlmivou destilovanou vodou a vložte ju do vyschnutia do vzduchu.
• Zamerajte a pozorujte v optickom mikroskope farbenie krviniek pomocou cieľa 40x. Ak je to potrebné, je možné použiť 100x.

Rýchly režim

• Zakryte rozmazanie májovým Grünwaldom farbivom zriedené 1 minútu.
• Umyť sa tlmivou destilovanou vodou.
• Prikryte tlmivou vodou a nechajte stáť 1 minútu.
• Umiestnite zriedené farbivo Giemsa a odídete 5 minút.
• Umyte sa tlmivou destilovanou vodou a nechajte na vzduchu vyschnúť.

Tu opísané techniky sú sprievodcom, ale treba sa zohľadniť, že postupy a časy sfarbenia sa líšia v závislosti od komerčného domu, ktorý predáva reagenty. Je vhodné postupovať podľa krokov prísne naznačených každým komerčným domom.

Rozšírená technika sfarbenia spermií

• Zakryte predĺženú jemnou vrstvou roztoku Grünwald na 4 minúty.
• Vyberte farbivo a premyjte destilovanou vodou.
• Vložte zriedenú vrstvu Giessa (1:10) do destilovanej vody na 15 minút.
• Vyberte farbivo a premyjte destilovanou vodou.
• Nechajte v mikroskope zaschnúť a pozorovať.

Môže vám slúžiť: butyrická fermentácia

Dôležité špecifikácie

Táto technika uvádza, že reagencie a roztoky pre umývanie majú pH upravené na 7.2-7.3, takže afinity farbív bunkovými štruktúrami nie sú skreslené a očakávaná konečná farba sa nemení.

Žiadosti

• Túto techniku ​​používajú klinické laboratóriá na farbenie periférnej krvi a kostnej drene, rezov tkanív a cytológií.
• V hematologickom poli má táto technika zásadný význam pri štúdiu abnormalít buniek z hľadiska formy, veľkosti a počtu. Je to veľmi cenný nástroj na diagnostiku určitých chorôb, ako je leukémia a anémia.
• Pri hľadaní parazitov v hematologickom poli predstavuje vynikajúcu užitočnosť (Plazmodium SP a Cruzi tripaosoma) alebo histologické (Leishmanias SP).
• Pokiaľ ide o vaginálnu cytologiu, táto technika je obzvlášť výhodná pre pozorovanie Trichomonas vaginalis. Toto je dôležité nálezy, pretože jeho prítomnosť simuluje obrazy karcinómu In situ to potom zmizne, keď je parazit eliminovaný.
• Bol ideálnym nástrojom na štúdium vzoriek spermií, pretože poskytuje cenné informácie o kvalite spermií. Údaje, ktoré ponúka, musia robiť hlavne s počtom a morfológiou, ako aj so sprievodnými bunkami, ktoré môžu byť prítomné a ktoré majú zásadný význam, ako sú zárodočné bunky, leukocyty a epitelové bunky. S touto analýzou je možné opísať abnormality pozorované v spermiách na hlave, krku, strednom kuse a hlavnom kuse. Okrem toho môžu tiež pomôcť ukázať prípady hosospermie (prítomnosť červených krviniek) a leukospermie alebo piospermie (zvýšenie počtu leukocytov v sperme).

Odkazy

1. Laboratórium Merck KGAA. Máj grünwald eosina modrá mikroskopia metylén.
2. May-Günwald-Giemsa zafarbenie. Zotavené z es.Wikipedia.orgán.
3. Sklenené chemikálie Panreac laboratórium. Reagencie histologických techník, hematológie a mikrobiológie. Obnovené z Glasschemicals.com.