Charakteristiky farbenia hematoxylín-eozín, použitia, techniky

Ten Farbenie hematoxylínu - eozín Je to sfarbenie, ktorá používa kombináciu farbív hematoxylínu a eozínu. Tento pár farbív vytvára dokonalé duo, pretože hematoxylín pôsobí ako základné farbivo a eozín je kyslé farbivo.

Označenie základných alebo kyslých farbív sa netýka pH, ktoré získavajú v roztoku, ale skôr hovorí o podiele, ktorý prevláda z hľadiska aniónového alebo katiónového zaťaženia, ktoré majú alebo umiestnením chromoforu.

Valcový epitel zafarbený hematoxylínom - eozínom (HE) Zdroj: Todd Straus a Vladimir Osipov [CC BY 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/o/3.0)]

V tomto zmysle sa hematoxylín považuje za základné (katiónové) farbivo, a preto má afinitu k kyslým štruktúram, ako je napríklad jadro buniek. Zatiaľ čo eozín je kyslý (aniónový) farbivo, má afinitu k alkalickým alebo základným štruktúram, ako je bunková cytoplazma.

Z tohto dôvodu sa táto kombinácia farbív široko používa na farbenie. Jadrá sú zafarbené tmavo modrou alebo fialovou a ružovou cytoplazmou.

Farbenie hematoxylín-eozín je jednou z najpoužívanejších sfarbení v oblasti histológie a cytologie kvôli svojej ľahkej manipulácii a nízkym nákladom. Používa sa na vizualizáciu buniek, hrubých nervových vlákien a prítomnosti určitých tkanivových mikroorganizmov, ako sú: parazity, huby a baktérie.

[TOC]

Charakteristika

Hematoxylín

Hematoxylín je neutrálne farbivo. Komponent, ktorý poskytuje farbu (chromofor), sa však nachádza v katiónovom alebo základnom centre molekuly. Preto jej afinita k kyslým štruktúram. Jeho chemický vzorec je C₁₆H₁₄Ani₆ a jeho vedecké meno 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Chromén-3, 4,6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Udržujte centrá buniek hlavne, pretože sú veľmi bohaté na nukleové kyseliny. Môžete tiež zafarbiť cytoplazmatické inklúzie vírusového pôvodu.

Aby hematoxylín mohol farbiť. Ten bude slúžiť na pohľad na látku, to znamená, že bude pôsobiť ako mordant.

Keď sa hematoxylín oxiduje, nazýva sa hemateín. Oxidácia sa dosiahne vystavením kyslíku (starnutia) činidla alebo látok, ktoré pomáhajú jeho oxidácii (chemická oxidácia).

Môže vám slúžiť: metódy oddelenia heterogénnych zmesí

Eosina

Eosina je farbenie červenej alebo ružovej. Je nerozpustný vo vode, aj keď existuje hydrosolubná verzia. Všeobecne platí, že Eosina pripravuje rozpustenie alkoholu (etanol na 95).

Zafarbte cytoplazmy, svalové vlákna, cytoplazmatické organely a kolagén, ale nefarbujú bunkové centrá. Je to preto, že je negatívne nabitá, preto má afinitu k pozitívne načítaným štruktúram.

Existujú dva typy eosiny „Y“ a „B“. Eosina „Y“ je známa ako žltá eosina. Jeho vedecký názov je tetrabrómový oluresceín a jeho chemický vzorec je C_dvadsaťH₈Br₄Ani₅.

Na druhej strane sa eozín „B“ niekedy nazýva modrý erythrosín B. Jeho vedecký názov je dibromodinitro fl uoresceín a vzorec je C_dvadsaťH₈Br₂N₂Ani₉. Obe sú veľmi podobné a rozdiel v používaní jedného alebo druhého nie je v skutočnosti viditeľný. Najobľúbenejšou je však eosina „y“.

Eozín má vlastnosť rozlišovania medzi živou a mŕtvou bunkou, pretože je schopný prekročiť membránu, aby zafarbil svoju cytoplazmu, keď sú bunky mŕtve, a cytoplazma bezfarebnej bunky zostane nažive, ak zostane nažive.

Žiadosti

Zafarbenie nervového vlákna

S hematoxylínom-eozínom je možné zafarbiť a identifikovať hrubé nervové vlákna. Nie je však užitočné zafarbiť tenké nervové vlákna, pretože na vizualizáciu druhého je potrebné strieborné sfarbenie.

Trény histologických kožných rezov

V škvrnách rohovkovej vrstvy kože farbivo, ktoré pôsobí, je eozín, pretože na tejto úrovni bunky nemajú jadro.

V granulózovej vrstve kože sa hematoxylín silne zafarbí k keratohialínovým granulám, ktoré sa nachádzajú vo vnútri granulárnych buniek. Naopak, trnitá vrstva kože je slabo zafarbená hematoxylínom, zatiaľ čo bazálna alebo zárodočná vrstva, ak je dosť zafarbená.

Eozín zafarbí cytoplazmu všetkých buniek a intenzita farieb sa môže meniť medzi jednou vrstvou a druhou.

Farbenie farbenia hematoxylínom-eozínom

Gómez a spolupracovníci v roku 2005 preukázali, že farbenie hematoxylínom -eozínom bolo účinnejšie pri identifikácii prípadov amibiázy pomocou Entamoeba histolytica a EntaMoeba rôznorodý že metóda čerstvej vizualizácie (roztok soľného roztoku a Lugol) u pacientov s akútnou hnačkovou chorobou.

Môže vám slúžiť: sekundárny alkohol: Čo je, štruktúra, vlastnosti, použitia

Ukázalo sa tiež, že má veľkú citlivosť na detekciu erytrofagocytózy (amébas, ktoré majú fagocytové erytrocyty).

Farbenie histologických rezov na diagnostiku infekcie

Walwyn a spolupracovníci v roku 2004 navrhli použitie histologického farbenia na detekciu mikroorganizmov spôsobujúcich infekcie.

Pomocou sfarbenia hematoxylínu-eozínu dokázal vizualizovať infekcie spôsobené pomocou Clostridium, Aktinomyces, Duchovný alebo Kandida. Podarilo sa im tiež pozorovať prítomnosť parazita Sarcoptes escabei V kožených rezoch a vírusových inklúziách cytomegalovírusom a herpesom v rezu rôznych tkanív.

Techniky

Pre histologické vzorky

Farbenie histologických rezov prechádza celým radom krokov. Prvým je získať histologické rezanie. Toto musí byť parafinované a potom získať rezy (ultra-fin) s mikrotómom. Táto technika pozostáva z nasledujúcich krokov:

1-Malmation of Prebytočný parafín: Xilol alebo hemmo -D je možné použiť, ponoriť sa na 3-5 minút.

2 reliéf vzorky: To sa dosiahne ponorením vzorky do rôznych koncentrácií alkoholov (etanol) v zostupnom poradí (100 °, 90 °, 70 °). Vo všetkých prípadoch 7 minút.

3-eliminácia prebytočného alkoholu: Za týmto účelom je ponorený do vody 7 minút.

4-kolekcia s hematoxylínom: Vzorka je ponorená 6-10 minút na podnos, ktorý obsahuje hematoxylín. Čas expozície závisí od veľkosti a hrúbky vzorky.

5-eliminácia nadbytku hematoxylínu: Voda sa premyla 5 minút a potom sa rýchly priechod (10-20 sekúnd) vyrobí kyslým alkoholom. Následne sa znova umyl vodou po dobu 5 minút. Potom ponorený do etanolu po 96 ° za 1 minútu.

6-zafarbenie s eosinou: Za týmto účelom je ponorená vzorka po dobu 5 minút v podnose Eosina.

7-posunka vzorky: Aby sme to dosiahli, podnosy z alkoholu (etanol) sa znova prenášajú, ale tentoraz vo stúpanej objednávke. (70 °, 90 °, 100 °). (Po dobu 5 sekúnd, 5 sekúnd, 1 minúta).

Objasnenie 8-vzorky: Toto je vystavené xylolu po dobu 5-10 minút a vyschne sa natrvalo utesniť balzamom Kanady alebo iným podobným materiálom.

Pre vzorky stolice pri hľadaní A. histolytica

V lamele predĺženej s výkalmi pacienta a je fixovaný 80% alkoholom po dobu 5 minút. List je ponorený do hematoxylínu 5 minút a okamžite sa premyje vodou.

Môže vám slúžiť: Príspevky z chémie do medicíny

Následne sa rýchlo ponorí do kyslého alkoholu a potom do amónnej vody. Umyť vodou. V Eosine je zafarbený 5 minút. Vzorka je dehydratovaná, ako je vysvetlené v predchádzajúcej technike a nakoniec sa objasní s Xilenom.

Príprava činidla

- Hematoxylín

V liter destilovanej vody rozpustite 50 gramov draslíka alebo síranu hliníka amónneho. Keď ste úplne rozpustení, pridajte 1 gram kryštalizovaného hematoxylínu. Pri rozpustení v celom rozsahu sa pridá 1 GR kyseliny citrónovej spolu s 50 GR hydrátu chlorálu a 0,2 g jódu sodného sodného.

Zmes sa varí 5 minút, potom sa nechá ochladiť a filtrovať, aby sa eliminovali tuhé častice, ktoré zostali. Takto pripravené činidlo sa môže použiť okamžite.

- Eosina

Môže sa pripraviť s alkoholom alebo vodnou základňou.

Alkoholický eozín

V 100 ml etanolu pri 95 ° rozpustite 0,5 gramu eosiny „y“. Potom pridajte niekoľko kvapiek ľadovcovej kyseliny octovej.

2% vodný eozín

V 1250 ml destilovanej vody rozpustite 25 gramov hydrosolubilného eozínu „y“. Potom pridajte niekoľko kvapiek ľadovcovej kyseliny octovej.

Kyslý alkohol

Zmerajte 0,5 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a dokončite 100 ml absolútnym alkoholom.

Amónna voda

Meranie 0.5 ml koncentrovaného amoniaku a dokončené 100 ml destilovanou vodou.

Odkazy

1. Navarrete, G. Histológia pokožky. Rev fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. K dispozícii na: MediGraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela alebo.
3. Identifikácia Entamoeba histolytica/e. odlišný Pre čerstvú techniku ​​Amiba v porovnaní s jej farbením hematoxyínom-eozínom v akútnej hnačke. Pediatr rev mex 2005; 72 (3); 109-112. K dispozícii na: MediGraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Užitočnosť histologických techník na diagnostiku infekcie v anatomických kúskoch. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). K dispozícii na: SCIELO.SLD
5. Panreac applichem itw reagnts. Farbenie hematoxylín-eozín. 2017, Španielsko. K dispozícii na: itwreagnts.com
6. "Eosina.„ Wikipedia, encyklopédia zadarmo. 7. novembra 2018, 08:18 UTC. 4. 2019, 22:13 je.Wikipedia.orgán
7. „Hematoxylín.„ Wikipedia, encyklopédia zadarmo. Máj 2019, 11:23 UTC. 4. 2019, 22:48 Wikipedia.orgán