Histochemistry Foundation, spracovanie, farbenie

Ten Histochémia Je to veľmi užitočný nástroj pri štúdiu morfológie rôznych biologických tkanív (zelenina a zvieratá), a to okrem iného kvôli svojmu princípu reakcie tkanivových komponentov, ako sú uhľohydráty, lipidy a proteíny, s farbiacimi látkami sfarbenie látok.

Tento cenný nástroj umožňuje nielen identifikovať zloženie a štruktúru tkanív a buniek, ale aj rôzne reakcie, ktoré sa vyskytujú v týchto. Podobne možné poškodenie tkaniva spôsobené prítomnosťou mikroorganizmov alebo iných patológií.

Histochemické farbenie. Vírus Nile, gram pozitívne a gramne negatívne baktérie (gram), histoplazmatické kapsulatum (Grocott), mykobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Zdroj: pixinio.com/wikipedia.org/nefrón [CC By-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0)]/cdc/dr. George P. Kubica [verejná doména]

Histochémia, od minulých storočí poskytla dôležité príspevky, ako napríklad demonštrácia existencie bariéry krviniek Paula Ehrlicha. Bolo to možné vďaka skutočnosti, že mozog experimentovaného zvieraťa, ktoré používa Ehrlich.

To viedlo k použitiu rôznych farbív, ako je metylén a indofenolová modrá, s cieľom zafarbiť rôzne typy buniek. Toto zistenie viedlo k klasifikácii buniek v acidofilných, bazofilných a neutrofiloch podľa ich špecifického farbenia.

Nedávne štúdie použili túto techniku ​​na demonštráciu prítomnosti rôznych zlúčenín vrátane fenolov, ako aj uhľohydrátov a netrikturálnych lipidov u druhov druhov Litsea glaucescens, Najznámejší ako vavrín. Byť tieto, v plachte aj v dreve.

Podobne Colares a kol., 2016, identifikovali rastlinu liečivého záujmu Tarenaya Hassleriana, prostredníctvom histochemických techník. U tohto druhu bola preukázaná prítomnosť škrobu, mirosíny, ako aj fenolových a lipofilných zlúčenín.

[TOC]

Základ

Histochémia je založená na zafarbení bunkových štruktúr alebo molekúl prítomných v tkanivách, a to vďaka ich afinite so špecifickými farbivami. Farebná reakcia týchto štruktúr alebo molekúl v pôvodnom formáte je následne vizualizovaná v optickom mikroskope alebo elektronickom mikroskope.

Špecifickosť farbenia je spôsobená prítomnosťou skupín prijímajúcich iónov prítomné v bunkách alebo tkanivových molekulách.

Nakoniec, cieľom histochemických reakcií je byť schopný sfarbenie pomocou sfarbenia. Od najväčších biologických štruktúr po najmenšie tkanivá a bunky. To sa dá dosiahnuť vďaka skutočnosti, že farbivá reagujú chemicky s molekulami tkanív, buniek alebo organel.

Môže vám slúžiť: čo je gastration?

Stíhanie

Histochemická reakcia by mohla viesť k krokom pred realizáciou techniky, ako je fixácia, inklúzia a rezanie tkaniva. Preto by sa malo brať do úvahy, že v týchto krokoch môžete poškodiť štruktúru, ktorú chcete identifikovať, a hádzať falošné negatívne výsledky, aj keď je prítomný.

Napriek tomu je dôležitá predchádzajúca fixácia tkaniva vykonaného správneho, pretože zabraňuje autolýze alebo deštrukcii buniek. Pre to.

Zahrnutie tkaniva sa vykonáva tak, aby si udržala svoju pevnosť pri rezaní, a tak jej zabránila deformované. Nakoniec sa rezy vykonáva mikrotómom na štúdium vzoriek optickou mikroskopiou.

Okrem toho sa pred pokračovaním v histochemickom farbení odporúča začleniť externé alebo vnútorné pozitívne kontroly do každej šarže testov. Ako aj použitie špecifických farbív pre štruktúry na štúdium.

Histochemické farbenie

Od vzniku histochemických techník až po súčasnosť sa použilo široká škála farbív, medzi ktorými je najčastejšie použitie, ako napríklad: Schiff (PA), Grocott, Ziehl-Neelsen a Gram.

Podobne sa okrem iného používajú aj iné farbivá, ako napríklad čínsky atrament, Orcein alebo Masson's Trichromic Farbining.

Schiffova kyselina periódová (PAS)

S týmto sfarbením môžete vidieť molekuly s vysokým obsahom uhľohydrátov, ako napríklad: glykogén a mucín. Je však užitočný aj na identifikáciu mikroorganizmov, ako sú huby a parazity. Okrem určitých štruktúr (bazálna membrána) v koži a v iných tkanivách.

Základom tohto zafarbenia je, že sfarbenie oxidu sa uhlíkové väzby prítomné medzi dvoma blízkymi skupinami hydroxilov. To vytvára uvoľnenie skupiny aldehydov, a to je detekované činidlom Schiff, hádzanie fialovej farby.

Schiffovo činidlo sa skladá z základného fuchsínu, metabisulfitu sodného a kyseliny chlorovodíkovej, pričom tieto komponenty sú zodpovedné za fialové sfarbenie, keď sú prítomné skupiny aldehydu. Inak sa generuje bezfarebná kyselina.

Môže vám slúžiť: izomeráza: čo je, funkcie, nomenklatúra, typy

Intenzita sfarbenia bude závisieť od množstva hydroxilli skupín prítomných v monosacharidoch. Napríklad v húb, bazálnych membránach, mucinách a glykogénu môže farba prejsť z červenej na fialovú, zatiaľ čo jadrá sú farbené modrou farbou.

Obchod

Je to jedno z farbení, ktoré predstavuje najväčšiu citlivosť pri identifikácii húb v tkanivách zahrnutých v parafíne. To umožňuje identifikáciu rôznych plesňových štruktúr: Hýfy, spóry, endospory, okrem iného. Preto sa považuje za rutinné farbenie na diagnostiku mykózy.

Obzvlášť sa používa pri diagnostike pľúcnej mykózy, ako je pneumocystóza a aspergilóza spôsobená niektorými žánrovými hubami Pneumocystis a Aspergillus, respektíve.

Tento roztok obsahuje dusičnan striebro a kyselinu chromovú, pričom druhý je fixačný a farbivo. Základom je, že táto kyselina produkuje oxidáciu hydroxilov na aldehydos, slizmi prítomnými v vybraných štruktúrach, napríklad v bunkovej stene húb.

Nakoniec, striebro prítomné v roztoku je oxidované aldehydmi, čo spôsobuje čierne sfarbenie, ktoré sa nazýva argentafínová reakcia. Môžete tiež použiť kontrastné farbivá, ako je svetlozelená, a tak sa pozorujú húbové štruktúry v čiernej farbe s svetlo zeleným pozadím.

Ziehl-neelsen

Toto zafarbenie je založené na prítomnosti rezistencie na kyselinu alkohol, čiastočne alebo celkového, v niektorých mikroorganizmoch, ako sú žánre Nokardia, Legionla a mycobacterium.

Odporúča sa použitie tohto zafarbenia, pretože bunková stena predtým citovaných mikroorganizmov obsahuje komplexné lipidy, ktoré bránia penetrácii sfarbenia. Najmä vo vzorkách dýchacích ciest.

V ňom sa používajú silné farbivá, ako je Fenicada fuchsin (základné farbivo) a tepla sa aplikuje tak, aby mikroorganizmus udržal farbivo a nezmenil kyseliny a alkoholy. Nakoniec sa na zafarbenie štruktúr, ktoré boli sfarbené, nanáša roztok metylénovej modrej farby.

Prítomnosť rezistencie na alkohol kyseliny sa pozoruje v červených štruktúrach, zatiaľ čo štruktúry, ktoré neodolajú sfarbenie, sú farbené modrou farbou.

Gram a čínsky atrament

Gram je okrem iného veľmi užitočné sfarbenie pri diagnostike bakteriálnych a plesňových infekcií. Toto sfarbenie umožňuje rozlišovať medzi gramovými pozitívnymi mikroorganizmami negatívneho gramu, čo jasne dokazuje rozdiely, ktoré existujú v zložení bunkovej steny.

Môže vám slúžiť: odstupňovacie lipidy: charakteristiky, štruktúra, funkcie, príklady

Zatiaľ čo čínsky atrament je farbenie, ktoré sa používa na kontrast štruktúry obsahujúcich polysacharidy (kapsula). Je to preto, že v prostredí sa formuje krúžok, ktorý je možný v Cryptococcus neoformans.

Orceín

Pri tomto zafarbení sú elastické vlákna a chromozómy rôznych buniek zafarbené, čo umožňuje vyhodnotenie procesu dozrievania posledne uvedeného. Z tohto dôvodu to bolo veľmi užitočné v cytogenetických štúdiách.

Je to založené na zhromažďovaní farbiva negatívnym zaťažením molekúl, ako je DNA, prítomná v centrách širokej škály buniek. Takže tieto sú farbené modrá až tmavá fialová.

Masson's Trichromic

Toto zafarbenie sa používa pri identifikácii niektorých mikroorganizmov alebo materiálov, ktoré obsahujú mellatické pigmenty. Toto je prípad mykózy spôsobeného demaciálnymi hubami, ugohifomikózou a eumicetómom čierneho zrna.

Konečné úvahy

V posledných rokoch došlo k mnohým pokrokom pri vytváraní nových diagnostických techník, kde je zapojená histochémia, ale je spojená s inými základmi alebo zásadami. Tieto techniky sledujú iný účel, ako je to v prípade imunohistochémie alebo enzymohistochémie.

Odkazy

1. Acuña u, Elguero J. Histochémia. A. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. K dispozícii na: sú.Iqm.Csic.je
2. Mestanza r. Frekvencia histochemického zafarbenia PA, Grocott a Ziehl-Neelsen použitá na identifikáciu mikroorganizmov, vykonaných v patologickej anatómii v nemocnici Eugenio Espejo Specialties Hospital v roku 2015. [Bakalárska práca]. Central University of Ekvádor, Quito; 2016. K dispozícii na: DSpace.Uce.Edu
3. Tapia-Torres N, de la Pazrez-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histochémia, celkový obsah fenolov a aktivita antioxidantov listov a dreva Litsea glaucescens Kunth (Laureaceae). Drevo a lesy. 2014; 20 (3): 125-137. K dispozícii na: Redalyc.orgán
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Anatómia a histochémia Tarenaya Hassleriana (Cleomaceae), druh liečivého záujmu. Latinskoamerický a karibský bulletin liečivých a aromatických rastlín 2016; 15 (3): 182-191. K dispozícii na: Redalyc.orgán
5. Bonifaz a. Základná lekárska mykológia. 4. vydanie. Mexiko: McGraw-Hill Inter-American Editors, S.Do. c.Vložka. 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Dalian. Klinika Patologická a imunohistochemická analýza spinocelulárneho karcinómu jazyka vretena: zriedkavý prípad. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): ERC4610. K dispozícii od: SCIELO.Br