Tincion of Capsula Foundation a techniky

Ten zafarbenie kapsuly Je to technika diferenciálneho sfarbenia, ktorá vlastní zvýraznenie polysacharidovej štruktúry, ktorá obklopuje určité baktérie a kvasinky nazývané kapsuly. Používa sa v klinických laboratóriách na pomoc diagnostike určitých patológií spôsobených kapsulovanými mikroorganizmami.

Používa sa tiež vo výučbových laboratóriách na demonštráciu tejto morfologickej štruktúry pre študentov zdravotníckeho vedeckého kariéry, ako napríklad: medicína, bioanalýza, ošetrovateľstvo alebo cytotechnológia, okrem iného.

Klebsiella pneumoniae náter zafarbený farbením kapsúl. Metóda indického atramentu s Safranine. Zdroj: а.А.В [verejná doména]

Existuje niekoľko jednoduchých techník na demonštráciu prítomnosti kapsuly v mikroorganizmoch, ktoré ju majú, sú: negatívne zafarbenie, zafarbenie Anthonyho a variantu, ktoré kombinuje predchádzajúce dva.

Negatívne zafarbenie sa používa hlavne vo vzorkách CSF, keď je podozrivá prítomnosť kvasiniek Cryptococcus neoformans. Tieto kvasinky sú častou príčinou meningitídy.

Táto technika využíva nigrosín alebo čínsky atrament a je založená na vytvorení kontrastu medzi prípravným dnom a nepreniknuteľnou kapsulou mikroorganizmu. Pozadie je zafarbené tmavo a kapsula je bezfarebná. Týmto spôsobom je táto štruktúra zvýraznená.

Pokiaľ ide o techniku ​​Anthony, dá sa povedať, že sa väčšinou používa vo výučbových laboratóriách na demonštráciu polysacharidovej štruktúry v baktériách, ako je napríklad Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae a Neisseria meningitidis.

Použitie tejto techniky na diagnostické účely je veľmi zriedkavé, pretože existujú ďalšie rutinné testy, ktoré umožňujú identifikáciu týchto mikroorganizmov.

[TOC]

Základ

Kapsula je silnou štruktúrou polysacharidovej povahy. Chráni to mikroorganizmy fagocytózy, a preto je ťažké preniknúť.

Z tohto dôvodu sú kapsuly založené na kontraste. Farbivá zafarbujú spodok prípravy, zatiaľ čo kapsula je bezfarebná.

Preto je s týmito technikami kapsula ľahko rozpoznateľná. Ak mikroorganizmus nemá kapsulu, nebude sa rozlišovať s týmto typom sfarbenia, pretože všetko bude zafarbené z rovnakej farby.

Môže vám slúžiť: homológne a analogické štruktúry (s príkladmi)

Všetky techniky používané na zafarbenie kapsuly majú rovnaký základ, aj keď používajú rôzne farby a postupy.

Technikyna farbenie kapsuly

-Anthony zafarbenie

Anthonyho zafarbenie používa fialové sklo ako farbivo. Tým sa zafarbí pozadie bakteriálneho tela a farby fialovej farby.

Na druhej strane sa používa 20% sulfát medi. Toto slúži ako roztok pre umývanie, to znamená, že odstraňuje prebytočné fialové poháre prípravky, čo spôsobuje objasnenie kapsúl, ale bez bakteriálneho tela alebo pozadia strata farby.

Materiál

- Zber mlieka.

- Prenosná lamina.

- 1% fialové sklo.

- 20% síran meďnatého.

- Optický mikroskop.

- Ponorný olej.

Postup

Táto technika pozostáva z:

1. Kultivovať mikroorganizmus v linkovom mlieku 36 hodín.
2. Umiestnite kvapku plodiny na koniec listu držiaka objektu a vedľa umiestnite kvapku fialového skla, premiešajte a predlžujte sa s koncom ďalšieho snímky.
3. Vonkajšie a neopravujte teplo.
4. Umyte sa 20%roztokom sulfátu medi, vypustite vonku vonku.
5. Sledujte mikroskop s ponorením cieľom. Hľadať smerom k extrémom rozšíreného.

Je dôležité nepoužívať teplo, neopravovať alebo suchať, pretože to poškodzuje kapsula. Ani umývanie vodou.

Interpretácia

Krátke mlieko je vynikajúce kultivačné médium, pretože poskytuje potrebné živiny pre mikroorganizmus na rozvoj prominentnej kapsuly.

Na druhej strane, latmolentné mlieko bude tvoriť silné a kompaktné pozadie, ktoré bude zafarbené fialové spolu s bakteriálnym telom, ale kapsula, ktorá obklopuje mikroorganizmus, je bezfarebná. Preto sa okolo bakteriálneho tela pozoruje jasný halo.

Môže vám slúžiť: Faktory, ktoré ovplyvňujú enzymatickú aktivitu Grafické znázornenie mikroskopického pozorovania náter Klebsiella pneumoniae zafarbeného farbením Anthony. Zdroj: Vyrobené autorom MSC. Marielsa Gil.

Výhody

Je to jednoduchá technika na vykonanie. Nevyžaduje fixáciu.

Podobne by sa malo poznamenať, že je možné použiť iné kultúrne médiá, ale médium s mliekom sa uprednostňuje, pretože má výhodu, že poskytuje výraznejšie kapsuly.

Nevýhody

Je to trochu namáhavejšia technika ako negatívne farbenie a na vizualizáciu si vyžaduje čakanie na suchý prípravok.

-Negatívne zafarbenie

Materiál

- Šmykľavky.

- Kultúrne médium s mikroorganizmom.

- Čínsky alebo nigrosínový atrament.

- Optický mikroskop.

- Fyziologický soľný roztok.

Postup

Položte kvapku fyziologického soľného roztoku na kryty a rozpustite malú časť mikrobiálnej plodiny. Je dôležité, aby príprava nie je príliš silná. Potom položte kvapku čínskeho alebo nigrosínového atramentu a premiešajte.

Potom sa na prípravku umiestni krycí list bez prekročenia kvapaliny. Pozoruje sa na mikroskope, ktorý sa najskôr zameriava na 10 -násobný cieľ a potom prechádza na 40x.

Táto technika sa dá použiť aj priamo na vzorkách CSF. To znamená, že namiesto umiestnenia kvapky mikrobiálnej kultúry je umiestnená kvapka.

Výhody

Je to jednoduchý spôsob vykonávania a zároveň ekonomický. Nevyžaduje fixáciu alebo sušenie prípravy.

Nevýhody

Má ako nevýhodu, že by sa malo pozorovať na mikroskope pred vyschom prípravy, pretože ak k tomu dôjde, mikroorganizmy sa sťahujú, čo sťažuje vizualizáciu.

Na druhej strane, falošné pozitíva sa môžu vyskytnúť, ak je analytik neskúsený, pretože leukocyty zvyčajne zamieňajú kvasinky.

Pozorovanie kvasiniek s kapsulom čínskou alebo nigrosínovou technikou by sa malo považovať za predpokladanú diagnostiku Cryptococcus neoformans Kým to nie je preukázané s kultiváciou.

Je to preto, že existujú aj iné kvasinky, ktoré by mohli byť príčinou meningitídy a nielen Cryptococcus neoformans, ako sú rod Genus Candida a Rhodotorula, ako aj iné druhy Cryptococcus.

Môže vám slúžiť: acetyl coenzým do

Interpretácia

Ak existujú kapsulované mikroorganizmy, bude pozorované tmavé pozadie, s priehľadnými telieskami vznášajúcimi sa v tekutine, čo zvýrazňuje prítomnosť kapsuly.

Kapsula Cryptococcus neoformans zafarbená čínskym atramentom. Zdroj: Photo Credit: Poskytovatelia obsahu: CDC/DR. Leanor Haley [verejná doména]

-Technika indického atramentu

Túto techniku ​​je možné vykonať aj s nigrosínom. Je to kombinácia predtým vysvetlených techník. Táto technika používa fialové krištáľové a Indiu alebo nigrosínový atrament.

Bakteriálne telo berie fialovú farbu fialového skla, pretože je negatívne naložené, zatiaľ čo nigrosín vyfarbuje spodok náteru. Ak má baktéria kapsula, bude sa vnímať ako priehľadný halo okolo mikroorganizmu.

Fialový kryštál môže byť nahradený ktorýmkoľvek z týchto sfarbení: safranín, základný fuchsín alebo metylénová modrá.

Materiál

- Fialové sklo.

- Nigrosín alebo indický atrament.

- Šmykľavky.

- Mikroskop.

Postup

- Kultivovať mikroorganizmus v kultúrnom médiu.

- Položte kvapku plodiny na konci posúvacieho listu a vedľa kvapky indického alebo nigrosínového atrament.

- Na vzduchu suchý a neopravujte teplotu.

- Prikryte fialovým skleneným roztokom za 1 minútu, umyte sa destilovanou vodou, ale veľmi jemne (mäkký prúd), vypustite vonku vonku.

- Sledujte mikroskop s ponorením cieľom. Hľadať smerom k extrémom rozšíreného.

Interpretácia

Budú sa pozorovať fialové bakteriálne telo a tmavé pozadie. Kapsula, ak je prítomná, bude okolo baktérií bezfarebná.

Odkazy

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Základné mikrobiologické techniky. Pozorovanie baktérií. Znížte (biológia). Mikrobiológia. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Základné zafarbenie v mikrobiologickom laboratóriu. Sprostredkovateľský.orgán. 2014; 3 (1): 10-18. K dispozícii na: MediGraphic.com
3. Gil m. Negatívne zafarbenie: Nadácia, technika, výhody a nevýhody. Záchranca.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. 2009. Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. Argentína. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do
5. Tankešwar a. Zafarbenie kapsúl: princíp, postup a výsledky. 2019. Sprievodca lekárskou mikrobiológiou. K dispozícii v: Microbeonline.com