Neubauerová história fotoaparátu, vlastnosti, používa

Ten Neubauerový fotoaparát, Hetimeter alebo hechocyometer, je laboratórny nástroj, ktorý pozostáva zo špeciálneho skleneného plaku. Táto komora slúži na vykonávanie niektorých typov buniek, ako sú červené krvinky, biele krvinky a doštičky, hoci sa dá použiť na počítanie spór, spermií, parazitov atď.

Predstavuje veľmi zvláštne charakteristiky, pretože pozostáva z 3 zón, ústredného pre gróf a dve podporné zóny. Každý fotoaparát má dve oblasti počítania alebo sieti, jednu na vrchu a jedna v spodnej časti.

Neubauerový fotoaparát. Zdroj: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/4.0)]. Upravený obrázok.

Majú viac divízií v mriežkovej podobe. Počítacie oblasti sú stredné škatule nachádzajúce sa v 4 rohoch oboch sietí a stredný štvorec.

Zostava fotoaparátu by sa mala vykonávať veľmi opatrne, pretože každý detail ovplyvňuje počet buniek. Existuje veľa chýb, ktoré je možné urobiť, ale ak sa objaví niektorá z nich, kamera musí byť rozobraná, čistá a znovu zostavená. Medzi hlavnými chybami je možné spomenúť nasledujúce:

Rebosar fotoaparát alebo nevytvorte nedostatočnú výplň, nechajte fotoaparát zaschnúť, pokúsiť sa odstrániť prebytočnú tekut. Všetky tieto chyby budú mať za následok nereálnu hodnotu.

[TOC]

História

Neubauerova fotoaparát je presný prístroj a vo výrobnom procese prechádza prísnou kontrolou kvality. Bol vytvorený pre presné častice alebo formy od mm³, ako sú bunky v rôznych kvapalinách. Jeho jemná grafika je vyrezaná s diamantovou ceruzkou.

Charakteristiky komory Neubauer

Kompletný fotoaparát je veľkosť normálneho posúvača, aby sa dal umiestniť na mikroskopu.

Fotoaparát sa skladá z troch centrálnych obdĺžnikových povrchov (A, B, C). V zóne „B“ sa nachádza zóna R alebo Count, tiež nazývaná retikulum. Jeden na každej strane fotoaparátu, oddelený zónou „D“.

Grafická schéma kamery Neubauer. Zdroj: Praktická hematologická príručka. Bioanalysis School na University of Carabobo, Venezuela.

Každé retikulum je leštená oblasť, ktorá obsahuje vyryté oblasť príspevku. Pozostáva z štvorca s plochou 9 mm² A je vnútorne rozdelený na 9 obrázkov s 1 mm² povrch. Štyri rohy sú rozdelené do 16 menších sietí (0.0625 mm² Povrchu).

Tieto mriežky sú tvorené sériou milimetrových čiar, ktoré sa vzájomne pretínajú, tvoria dokonale grafické mriežky a vymedzujú sa na stanovené opatrenia. Tieto čiary boli zaznamenané s diamantovým tipom.

Vylepšené retikula Neubauer. Zdroj: Praktický hematologický sprievodca Bioanalýzou School University of Carabobo, Venezuela.

Štyri strany zodpovedajú oblasti počítania. V týchto stranách alebo rohoch sa vykonáva popis väčšiny buniek (červené krvinky a leukocyty), zatiaľ čo doštičky sa počítajú v centrálnej oblasti.

Môže vám slúžiť: Malachit Green: Charakteristiky, príprava, aplikácie, toxicita

Centrálna zóna má viac divízií, pozostáva z štvorca 1 mm² rozdelené do 25 obrazov, ktoré majú plochu 0,04 mm² každý. Tieto sú zase rozdelené na 16 mriežiek s plochou 0,0025 mm².

Opis vylepšeného retikula Neubauer. a) štvorec rohov, b) stredný štvorec, C) stredný štvorec stredného štvorca. Zdroj: Praktický hematologický sprievodca Bioanalýzou School University of Carabobo, Venezuela.

Oblasť „A“ a „C“ slúži ako podpora na umiestnenie špeciálneho objektu, ktorý sa nazýva hematimetrická lamela alebo hematimeter.

Výška medzi lamelou a povrchom počítania je 0,1 mm. Povrchové miery počítania políčok, ako aj výška fotoaparátu a riedenie vzorky, sú potrebné údaje na vykonanie konečných výpočtov.

Žiadosti

Používa sa na počet buniek. Najmä v oblasti hematológie je veľmi užitočná, pretože umožňuje vyrobiť 3 série krviniek; to znamená červené krvinky, biele krvinky a doštičky.

Môže sa však použiť v iných oblastiach, napríklad na počítanie spermií, spór, baktérií alebo iných dôležitých prvkov v závislosti od typu vzorky.

Ako sa používa?

príprava vzorky

Na vykonanie počtu buniek zvyčajne začína z predchádzajúceho riedenia. Príklad: Na spočítanie bielych krviniek sa pripravuje riedenie 1:20 s Turk Liquid. Riedenie je pred naložením pipety dobre premiešané a nastavením Neubauerovej kamery.

Existujú prípady, keď riedenie 1:20 nestačí na spočítanie. Napríklad u pacientov trpiacich určitými typmi chronických leukémií. V týchto prípadoch by sa mali robiť vyššie riedenia ako 1: 100.

Ak je naopak, účet je veľmi nízky, ako v závažných leukopéniách, je možné urobiť menšie riedenia na sústredenie vzorky. Príklad: Môžete urobiť riedenie 1:10.

Zmeny, ktoré sú vykonané, ovplyvňujú výpočty.

Zhromaždenie komory Neubauer

Neubauerova komora je zostavená umiestnením hematimetrickej lamely do centrálnej zóny. Obidve musia byť veľmi čisté a suché. Na umiestnenie lamely ju berú okrami a jemne kvapká na fotoaparát.

Toto je vyplnené umiestnením špičky automatickej pipety alebo pipety Thoma pod uhlom 35 ° na okraji oblasti nákladu. Kvapalina je jemne prepustená a zaťažovacia zóna je vyplnená kapilárnosťou. Toto sa robí na oboch stranách na načítanie týchto dvoch sietí.

Žiadne sieti by sa nemali preťažiť a nemali by sa odoprieť tekutina. Zaťaženie musí byť presné. Je dôležité, aby sa výplň vykonáva homogénne, to znamená, že nemali byť žiadne bubliny.

Akonáhle je fotoaparát nastavený v pokoji na 2 minúty, aby bunky zrážali v pozadí a jeho vizualizácia a počítanie je jednoduchšie.

Po čase odpočinku je namontovaný na svetle ľahkého mikroskopu na pozorovanie. Najprv sa zameriava na 10x cieľ av prípade potreby sa odovzdá na 40x.

Môže vám slúžiť: anión medzery

Na zlepšenie vašej vizualizácie sa mikroskopické svetlo zníži. Za týmto účelom je kondenzátor spustený a membrána sa trochu uzatvára.

Účtovať

Z dôvodu bielych krviniek alebo leukocytov sa musí spočítať celý povrch štyroch stredných štvorcov rohov a stredný štvorec každého retikula.

Počet sa začína na štvorci ľavého horného rohu. Začína sa od prvého štvorca predného radu, to znamená zľava doprava, aby ste dosiahli opačný koniec.

Tam je spustený a vzhľad sa vracia sprava doľava, až kým nedosiahne druhý koniec a tak na bunkách v každej mriežke vo forme kľukat. Počíta sa 16 mriežok každého média.

Aby sa zabránilo počítaniu bunky dvakrát, existujú pravidlá na bunkách, ktoré sa nachádzajú na hraničných líniách každej mriežky. Bunky, ktoré sa nachádzajú v ľavom a horných líniách.

Ručné bunkové počítadlo by malo byť k dispozícii tak, aby operátor utláčal kľúč zariadenia toľkokrát, ako pozorujú bunky. Pri použití účtovníka môže operátor počítať bez toho, aby musel vyhľadať z mikroskopického poľa. Na konci účtu budete pozorovať celkový počet spočítaných buniek.

Výpočty

Pre výpočty môžete pokračovať niekoľkými spôsobmi. Môžete spočítať jedno retikulum alebo obidve sa dajú spočítať a priemer oboch. V týchto dvoch situáciách sa spočítané bunky musia vynásobiť faktorom, ktorý by v tomto prípade mal 40. A tak sa získa celkový počet na mm³.

Ak sa však tieto dve gule počítajú a nie je priemer, musí sa vynásobiť iným faktorom, v tomto prípade 20.

-Násobenie

Ďalej sa vypočíta násobenie faktora.

Pri výpočtoch sa berie do úvahy niekoľko údajov, vrátane názvu riedenia, výšky komory a povrchu povedali.

Zriedenie

Riedenie, ktoré sa používa štandardným spôsobom, je 1:20 pre počet leukocytov.

Výška komory

Výška medzi kamerou a hematimetrickou laminou je 0,1 mm.

Spočítaný povrch

Ak je spočítaných 5 štvorcov 1 mm² povrch, to znamená, že celkový popis počtu je 5 mm². Tieto údaje sa musia vynásobiť výškou fotoaparátu, aby sa získal celkový objem. To znamená 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Vzorce a výpočty

S uvedenými údajmi sa hovorí:

Ak je pri 0,5 mm³ -sú spočítané ° buniek

V 1 mm³ --bude existovať - ​​x počet buniek

X bunka N ° = (n ° buniek vybavených x 1) /0,5 mm³

Musí sa však zohľadniť aj zriedenie. Preto je vzorec nasledujúci:

(N ° spočítaných buniek x 1) x 20/0,5 mm³

Nakoniec, aby ste sumarizovali, môžete vynásobiť počet buniek spočítaných 40. Hodnota leukocytov na mm sa teda získava³.

Môže vám slúžiť: osmóza: proces, typy, rozdiely s difúziou a príkladmi

V prípade, že sa spočítajú dve sieti, údaje sa zmenia, že v tomto prípade by to bolo 10 štvorcov, tj 10 mm². A celkový objem povedaný o 1 mm3. Vzorec zostane:

(N ° buniek spočítaných x 1) x 20/1 mm³

Preto by v tomto prípade faktor násobenia bol 20.

Chyby

-Ak je pri načítaní kamery prekročená alebo prekročená tekutinou, výška fotoaparátu sa bude meniť. To má za následok spočítanie skutočného. Ak sa pokúsite odstrániť prebytok gázou alebo bavlnou, predstavuje to chybu karafalu. Táto akcia spôsobí, že bunky sa budú koncentrovať, čím sa zvýši počet.

-Ak je zle účtovaný, počet bude pod skutočným.

-V prípade, že je fotoaparát namontovaný a prepustený, už nie je možné dosiahnuť počet, pretože bude vysielať chybné výsledky.

-Ak pred načítaním fotoaparátu nie je riedenie vzorky dobre zmiešané, existuje riziko chyby čítania, pretože bunky nebudú distribuované homogénne. Preto bude existovať menšia alebo väčšia koncentrácia buniek v závislosti od toho, či je vzorka odobratá z povrchu kvapaliny alebo spodnej časti trubice.  

-Prítomnosť bublín znižuje množstvo kvapaliny, ktorá musí vstúpiť do krídla, zasahuje do správnej vizualizácie a distribúcie buniek. To všetko významne ovplyvňuje výsledky.

-Počas počtu mikroskop nezdvihnite, kým sa nedokončí každé veľké štvorec, aby sa zabránilo strate.

-Dôvodom chýb je po namontovaní kameru. Preto by ste mali opatrne nahrať mikroskopovú dosku.

Odporúčanie

Ak z nejakého dôvodu zistíte abnormalitu pri podávaní fotoaparátu, najviac sa odporúča, aby ste túto prípravu rozobrali, vyčistili fotoaparát a znova zostavili od nuly.

Pri čistení fotoaparátu buďte veľmi opatrní, aby ste sa vyhli poškriabaniu sietí. Na druhej strane majte na pamäti, že hematimetrický lamel je jemný a krehký. Nedostatočná manipulácia to môže zlomiť.

Pred začatím počítania sa uistite, že bunky boli dobre distribuované. Nerovná distribúcia buniek sa vyskytuje slabou zmesou vzorky alebo riedenia. Ak k tomu dôjde, musí sa zostava opakovať.

Spôsob, ako zistiť, či sú bunky dobre distribuované, je porovnávanie popisu každého veľkého štvorca, počet buniek spočítaných každým štvorcom by sa nemal prehnane líšiť medzi jedným a druhým.

-Ak sa biele krvinky počítajú nad 50.000 mm³ Je vhodné zopakovať účet, čo je väčšie zriedenie.

-Ak modifikuje riedenie, musí sa mu znásobenie znova vypočítať, pretože to ovplyvňuje vzorec.

Odkazy

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Porovnanie koncentrácie spermií pomocou Maklerovej kamery a Neubauerovho fotoaparátu. Urol esp 2008; 32 (4): 443-445. K dispozícii na: SCIELO.
2. Neubauerový fotoaparát. (2018, 27. marca). Wikipedia, encyklopédia zadarmo. Dátum konzultácie: 04:10, 23. júna 2019 od es.Wikipedia.orgán
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Aplikácia alternatívnej metódy počítania v Neubauerovej komore na stanovenie koncentrácie vaginalis trichomonas. Otáčať sa. Cub Med 2001; 53 (3): 180-8. K dispozícii na: ResearchGate.slepo
4. Gómez-Pérez Roald E. Analýza expertov. Otáčať sa. Venez. Endokrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. K dispozícii na: VE.Scilo
5. Praktický hematologický sprievodca Bioanalysis School na University of Carabobo. Venezuela.1998