Thayer Martin Agar Čo je, nadácia, príprava, používa

On Thayer Martin Agar Je to vysoko výživné a selektívne pevné médium pre izoláciu Neisseria meningitidis a Neisseria Gonorrhoeae; oba známe ako patogénny alebo klinický význam.

Jednou z najdôležitejších špeciálnych funkcií, ktoré predstavuje Agar Thayer Martin, je vysoký obsah výživných doplnkov. Táto vlastnosť je nevyhnutná, pretože neistá sú veľmi náročné mikroorganizmy z výživového hľadiska, a preto nerastú v bežných médiách.

Na druhej strane, pretože tieto mikroorganizmy sa bežne vyskytujú v oblastiach, ktoré nie sú v prevádzke, je potrebné pridanie inhibítorov, ktoré bránia rastu sprievodnej flóry, bez ovplyvnenia rozvoja rodu Neisseria.

Tento agar sa skladá z GC bázy agaru, hemoglobínu, dodatočných výživových doplnkov a komplexu inhibičných látok (antibiotiká a antifungály). Komerčné domy predávajú každý z doplnkov osobitne.

Vzorka, ktorá zaseie v tomto médiu, bude závisieť od hľadaného mikroorganizmu. Pre Neisseria kvapavka Ideálne vzorky sú vaginálne a močové sekréty. Zatiaľ čo Neisseria meningitidis Najpoužívanejšie vzorky sú CSF, exsudáty Pharyngeal a Nasofaryngeal.

Základ

Neisseries sú mikroorganizmy katalogizované ako nepríjemné, a preto je ich izolácia zložitá.  Preto je Thayer Martín zložité médium a každá z jeho komponentov plní funkciu, ktorá je vysvetlená nižšie:

Agar GC

GC agar obsahuje peptónový proteín, kukuričný škrob, chlorid sodný, dipotalizový fosfat. Jeho zložky poskytujú základné živiny pre mikrobiálny vývoj, neutralizujú toxické mastné kyseliny, prispievajú k udržiavaniu osmotickej rovnováhy, definujú pH a poskytujú pevnú konzistenciu životnému prostrediu.

Hemoglobín

Hemoglobín poskytuje faktory v a x (nikotínamid adenín dinukleotid NAD a Hemina). Preto v tomto médiu tiež rastie druhy z Haemophilus. Hemoglobín sa dá získať komerčne dehydratovaný alebo môže do životného prostredia pridať čerstvo defibrinovaný hovädzí.

Môže vám slúžiť: biogenetické prvky

Doplnok obohatenia

Na druhej strane, médium Thayer-Martin by sa malo pridať aj doplnok obohacovania, pretože živiny, ktoré obsahuje základný agar, nestačia na požiadavky rodu Neisseria.

Najčastejšie používaný doplnok obohatenia sa nazýva Isavalex. Obsahuje glutamín, adenín, NAD, kokarboxylázu, guanín, dusičnan žrasy, benzoickú p-aminokyselinu, vitamín B12, tiamín a glukózu. Všetky tieto zlúčeniny sú potrebné na dobrý vývoj patogénnych neisseries.

Inhibítory

Pretože ide o vysoko výživné inhibítory média, ktoré bránia rastu mikroorganizmov z obvyklej flóry oblasti, a preto uprednostňujú izoláciu rodu Neisseria.

Komplex inhibítora sa skladá z vankomycínu, kolistínu a nistatínu. Vankomycín inhibuje rast gram -pozitívnych baktérií, kolistín bráni rozvoju gramne negatívnych baktérií, ako sú pseudomóny a niektoré saprofytické neisseries, a nistatín pôsobí na kvasinky ako kvasinky, ako sú napríklad kvasinky, ako sú napríklad kvasinky Candida albicans.

Avšak potom bol Thayer Martin Agar upravený; Zmeny pozostávali z pridania trimetoprim, zvýšenie množstva agaru a agregátu extra glukózy. Tieto zmeny významne zlepšili zotavenie druhov Neisseria gonorrhoeae.

Je potrebné poznamenať, že Trimetoprim inhibuje rast proteínového žánru a jeho následnú tvorbu roja. V tomto zmysle sú antibiotiká antibiotiká, ktoré poskytujú selektívny charakter média Thayer Martin.

Príprava

Thayer Martin Original Agar

-Agar GC

Vážiť 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte pri 100 ml. Zmiešajte a varte 1 minútu s častým agitáciou, aby ste sa rozpustili v celom rozsahu. Sterilizujte zmes v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Môže vám slúžiť: Hominizačný proces: Charakteristiky a fázy

-2% hemoglobín

Zastavte 2 GR dehydratovaného hemoglobínu v 2 alebo 3 ml horúcej destilovanej vody za vzniku jednotnej zmesi. Postupne pridajte vodu na dokončenie objemu 100 ml. Pozastavenie musí byť pred sterilizáciou homogénne.

Sterilizovať v autokláve po dobu 15 minút.

-Doplnok obohatenia

Rekonštruujte obchodnú injekčnú liekovku s riedidom poskytovaným rovnakým obchodným domom. Dobre premiešať. Množstvo zriedka, ktorý sa má použiť.

-Doplnok inhibície V.C.N (vankomycín, kolistín, nistatína)

Rekonštruujte liekovku s riedidlom poskytovaným komerčným domom. Dobre premiešať. Množstvo zriedka, ktorý sa má použiť.

-Pripravený

Za každých 100 ml agaru GC postupujte takto:

Keď agar GC opúšťa autokláve, nechajte sa ochladiť na približnú teplotu 50 ° C a pridajte 2 ml pripraveného roztoku hemoglobínu, 2 ml doplnku obohatenia (Isoobalex alebo Brex) a 2 ml doplnku inhibície inhibície inhibície. Zmiešajte a podávajte v petri sterilných platniach.

Nechajte upevniť a uložiť do chladničky, až kým sa nepoužijete.

Farba pripraveného média je čerešňová červená. Konečné pH média je 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar upravil

Vážiť 8,2 g dehydratovaného GC média a suspendujte pri 100 ml. Pridajte 1 g agar-voda a pridajte 0,3 g glukózy. Zmiešajte a varte 1 minútu s častým agitáciou, aby ste sa rozpustili v celom rozsahu. Sterilizujte zmes v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Pripravte doplnok hemoglobínu a obohatenia, ako je opísané vyššie.

Použitý doplnok inhibície je V.C.N.T (vankomycín, kolistín, nistatína, trimoprim).

Môže vám slúžiť: pred -evolucionistické teórie, jeho autori a nápady

-Pripravený

Pokračujte spôsobom opísaným pre pôvodný agar Thayer Martin.

Využitie

Thayer Martin Agar by mal byť pred siatom vzorky temperamentný. Bežne používané vzorky sú hltanové exsudáty, nosné exsudáty, vaginálne, močové močové a/alebo rektálne a CSF.

Používajte čerstvo odobraté vzorky a robte silné inokulam o agare. Vzorky sú zasiate priamo v dôsledku vypúšťania materiálu a potom sa vystupujú v dôsledku vyčerpania na povrchu.

Doštičky sa inkubujú pri 35-37 ° C počas 24 až 48 hodín v džbáne mikroaerofílie (5% CO₂). Po inkubačnom čase sa doštičky skúmajú pri hľadaní malých kolónií, sivých a niekedy aj mukoidným vzhľadom.

Vykonajte gram a potvrdzujúce biochemické testy na podozrivé kolónie.

Qa

Na vykonanie kontroly kvality Thayer Martin môže použiť nasledujúce mikrobiálne kmene.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 a Neisseria meningitidis ATCC 13090; V obidvoch kmeňoch sa očakáva uspokojivý vývoj.

Musia byť zahrnuté aj nasledujúce kmene: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 a Candida albicans ATCC 10231. Vo všetkých z nich sa v tomto médiu očakáva celková alebo čiastočná inhibícia.

Obmedzenia

-Majte na pamäti, že v stredných baktériách, ktoré sú rezistentné na použité inhibítory.

-Existujú kmene Neisseria kvapavka ktoré môžu byť citlivé na koncentráciu použitého vankomycínu. Z tohto dôvodu sa odporúča používať paralelný čokoládový agar doplnený Isovalexom, ale bez inhibítorov.

-Existujú kmene kvasiniek rezistentných na nistatine, ktoré môžu rásť v tomto médiu a interferovať s izoláciou patogénnych neisseries, najmä s gonokokmi.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. Thayer Martin Media upravil. Dostupné na: BritánAlab.com