biológia

Agarový počet štandardných nadácií, prípravy a použitia

Agarový počet štandardných nadácií, prípravy a použitia

On agarový štandard Je to solídne, neselektívne kultivačné médium navrhnuté na kvantifikáciu aeróbneho mikrobiálneho zaťaženia prítomného v spotrebiteľských vodách, odpadových vodách, mliečnych nápojoch, okrem iných potravín. Toto médium je známe aj ako agar PCA) pre svoju skratku v anglickom agarovom počte dosiek. Vytvorili ho v roku 1953 Buchbinder, Baris a Goldstein.

Médium štandardného účtu sa skladá z kvasinkového extraktu, tripteínu, glukózy, agaru a destilovanej vody. Táto formulácia obsahuje výživové základné prvky, ktoré umožňujú vývoj súčasného, ​​náročného aeróbneho mikrobiálneho zaťaženia aeróbneho mikrobiálneho zaťaženia.

Riedenie desatinných miest pre štandardný počet počítania UFC. Zdroj: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0)]

Pretože médium neobsahuje inhibítory, baktérie sa môžu vyvíjať bez akýchkoľvek obmedzení, takže je ideálny pre všeobecné kolónie. Technika kvantifikácie plakov však nezistí všetky prítomné baktérie, ale iba tie, ktoré sú schopné rásť za podmienok prostredia, ku ktorým je agar vystavený.

V tomto zmysle je technika kvantifikácie plaku zvyčajne určená množstvom baktérií aeróbneho mezofilového typu, to znamená, že tie, ktoré sa vyvíjajú pri teplotách medzi 25 a 40 ° C, s optimálnou rastovou teplotou pri 37 ° C C.

Táto bakteriálna skupina je veľmi dôležitá, pretože pre človeka existuje najviac patogénnych baktérií.

Je potrebné poznamenať, že niekedy úrok kvantifikuje množstvo psychrofilných baktérií prítomných v potravinách. Tieto baktérie sú tie, ktoré sa vyvíjajú pri nízkych teplotách (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Podobne môžu byť dôležité termofilné baktérie, ktoré sa vyvíjajú v rozmedzí medzi 50 ° C pri 80 ° C alebo viac, v určitých druhoch potravín, ako je konzervy, je dôležité.

Mikrobiálna kvantifikácia je vyjadrená v jednotkách tvoriacich hrubých čreva (UFC) na gram alebo mililiter vzorky.

[TOC]

Základ

Štandardný účet je navrhnutý tak, aby umožnil uspokojivý vývoj aeróbnych baktérií, ktoré sa nezodpovedajú, pretože kvasinkový extrakt, tripteín a glukóza poskytujú potrebné živiny pre dobrý mikrobiálny vývoj.

Môže vám slúžiť: Alizarina: Charakteristiky, príprava, použitie a toxicita

Na druhej strane, médium má svetlú farbu a priehľadný vzhľad, takže je ideálny na vizualizáciu kolónií vyvinutých metódou v odosievaní v hĺbke (únik platne).

Je to tiež možné kolónie počítať pomocou povrchovej vysadenej metódy s drigalski špachtľou.

Ak je mikrobiálne zaťaženie vysoké, musí sa urobiť desatinné riedenia študovanej vzorky, aby bolo možné vykonať počet UFC.

Je potrebné poznamenať, že toto médium odporúča Americká asociácia verejného zdravia (APHA) pre počítanie aeróbnych Messophils.

Príprava

Vážiť 23,5 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody. Aby sa úplne rozpustila, zmes by sa mala zahrievať často mávaním, až kým sa nevarí. Nasledujúce kroky závisia od vysadenej techniky, ktorá sa použije.

Pre techniku ​​skládky taniera

Distribuujte tým, že dáte 12 až 15 ml v testovacích skúmavkách. Následne sterilizácia v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte vertikálne tuhnúť vo forme taco. Uložiť do použitia.

Taco roztavte, keď sa bude používať. Akonáhle ju budete môcť udržať v Márii na 44-47 ° C, keď sú vzorky pripravené.

Pre povrchové zasiatie

Sterilizujte médium v ​​autokláve pri 121 ° C a potom distribuujte 20 ml v petri sterilných platne. Nechajte upevniť, investovať a ušetriť do chladničky, až kým sa nepoužívate.

Pred použitím mierte doštičky. Médiové pH musí byť 7,0 ± 0,2.

Využitie

Štandardný účet sa používa v technike aeróbneho mezofilného počítania počas mikrobiologickej analýzy vody a potravín. Správa aeróbnych mezofíl je potrebná, pretože určuje kvalitu zdravia študovanej vzorky.

Aplikácia tejto techniky (s použitím tohto média) umožňuje kvantifikáciu makroskopickej vizualizácie izolovaných kolónií.

Technika výtoku doštičiek (vysiate s hĺbkou)

-Postup

Táto technika pozostáva z nasledujúcich:

1) Homogénka vzorky s cieľom prerozdeliť prítomné baktérie.

2) Počiatočná suspenzia sa vykonáva v sterilnej fľaši alebo vrecku, pričom rešpektuje pomer 10 GR alebo 10 ml v 90 ml riedidla (10-1).

Môže vám slúžiť: fikológia

3) Z pôvodného zavesenia sa príslušné desatinné riedenia v závislosti od typu vzorky. Ex: (10-2, 10-3, 10-4). Riedenia sa vykonávajú s roztokom vodného alebo fosfátového tlmivého roztoku Peptonada.

Pre to-2 a tak ďalej.

4) 1 ml každého riedenia sa odoberie a umiestni na prázdne sterilné petrie taniere.

5) Pridajte do každej dosky 12 až 15 ml agaru predtým roztavené a odpočívané pri 44 - 47 ° C.

6) Dajte doštičky mäkkých rotačných pohybov na rovnomerné rozdelenie vzorky vedľa agaru a nechajte stuhnúť.

7) Investujte doštičky a inkubujte pri 37 ° C do aerobiózy 24 až 48 hodín.

8) vyvrcholil čas pokračoval na preskúmanie dosiek a spočítanie kolónií v riedení, ktoré mu umožňujú. Tí platne, ktoré majú 30 až 300 UFC, sú vybrané na účet.

Počet je možné vyrobiť manuálne alebo môže použiť tím účtovníka kolónie.

Hodnoty povolené vzorkou ML sa môžu líšiť v závislosti od jednej krajiny k druhej podľa pravidiel, ktorým sa riadia.

-Výpočet

Všeobecný výpočet sa vykonáva pomocou nasledujúceho vzorca:

Vzorec pre všeobecný výpočet kvantifikácie UFC. Zdroj: Národná správa liekov a lekárska technológia (ANMAT). Mikrobiologická analýza potravín, oficiálna analytická metodika, indikátor mikroorganizmy. 2014 Zväzok 3. K dispozícii na: anmat.Vláda.ar

Vyjadrite výsledky v 1 alebo 2 číslic, vynásobenie príslušnej základne 10. Príklad: Ak je výsledok 16.545 je zaokrúhlená na základe tretej číslice o 17.000 a bude vyjadrené takto: 1,7 x 104. Teraz, ak bol výsledok 16.436 je zaokrúhlené na 16.000 a vyjadruje 1.6 x 104.

Technika povrchu

-Postup

-Naočkate sa 0,1 ml priamej vzorky, ak je kvapalná, počiatočná suspenzia 10-1 alebo po sebe idúcich riedení 10-2, 10-3 atď., V strede štandardnej doskovej dosky.

Môže vám slúžiť: Flora a fauna Tamaulipas: Reprezentatívne druhy

-Distribuujte vzorku drigalski špachtľou alebo sklenenou tyčou vo forme L. Nechajte stáť 10 minút.

-Investujte doštičky a inkubujte do aerobiózy pri 37 ° C počas 24 až 48 hodín.

-Pokračujte v počítaní kolónií, vyberte tie platne, ktoré sú v rozmedzí od 20 do 250 UFC.

-Výpočet

Na výpočet sa uplatňuje faktor riedenia, čo je inverzná. Počet na 2 významné číslice je zaokrúhlený (zaokrúhlenie podľa tretej číslice) a je vyjadrené v základnej výkone 10. Napríklad, ak sa vo vzorke počíta 224 UFC bez riedenia (10-1), Uvádza sa 22 x 101  UFC, ale ak bol obrázok 225, uvádza sa, 23 x 101 UFC.

Teraz, ak sa v zriedení 10 spočítava 199 UFC-3, Bude nahlásený 20 x 104 UFC, ale ak sa 153 UFC spočítava v rovnakom riedení, bude nahlásených 15 x 104 UFC.

Qa

Štandardné účtovné médium je možné vyhodnotiť pomocou certifikovaných známych kmeňov, napríklad: Escherichia coli ATCC 8739, Stafylococcus aureus ATCC 6538, Bacils subtilis ATCC 6633, Fermentum Lactobacillus ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Ak je kultivačné médium v ​​optimálnych podmienkach, vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý rast, s výnimkou L. Fermentum ktoré môžu mať pravidelný výkon.

Na vyhodnotenie sterility kultivačného média musí byť inkubovaná jedna alebo dve platne z každého pripraveného šarže (bez naočkovania) pri 37 ° C v aerobióze počas 24 hodín. Po tejto dobe by sa nemal dodržiavať žiadna zmena rastu alebo farby média.

Obmedzenia

-Nepatrajte agar viackrát.

-Pripravené médium môže trvať až 3 mesiace, pokiaľ zostáva v chladničke a chránené pred svetlom.

-Toto médium nie je vhodné na náročné mikroorganizmy alebo anaeróbne.

Odkazy

  1. Národná správa potravín a lekárskych technológií (ANMAT). Mikrobiologická analýza potravín, oficiálna analytická metodika, indikátor mikroorganizmy. 2014 Zväzok 3. K dispozícii na: anmat.Vláda.ar
  2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.Do. Agarový počet dosiek. 2009. K dispozícii na: http: // f-soria.je
  3. Laboratóriá Conda pronadisa. Agar pre štandardné metódy (PCA) podľa APHA a ISO 4833. K dispozícii na: Condalab.com
  4. Británske laboratóriá. Agarový počet dosiek. 2015. Dostupné na: BritánAlab.com
  5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B a Velázquez alebo. 2009. Techniky pre potravinovú mikrobiologickú analýzu. 2. vydanie. Fakulta chémie, UNAM. Mexiko. K dispozícii na: Depa.Frame.Žobrák