Zafarbenie Giemsa

Farbenie Giemsa je bežnou metódou na preskúmanie rôznych tkanív a vzoriek krvi

Čo je Giemsovo zafarbenie?

Ten Zafarbenie Giemsa Je to typ klinických vzoriek (tkanivá, krv), na základe zmesi kyseliny a základných farbív. Vytvoril Gustav Giemsa, nemecký chemik a bakteriológ, ktorý zdokonalil Romanowského prácu pridaním glycerolu na stabilizáciu zlúčenín.

Zmeny vytvorené na pôvodnú Romanowskú technika, ktorá sa umožnila významne zlepšiť mikroskopické pozorovania, preto bola táto technika pokrstená menom farbenia Giemsa.

Keďže je jednoduchou technikou na vykonanie, s veľkou funkciou a ekonomikou, v súčasnosti sa široko používa v klinickom laboratóriu na hematologickú vôňu, vzorky kostnej drene a tkanivové škrty.

Technika farbenia Giemsa je veľmi užitočná pre cytologické štúdie, pretože umožňuje pozorovanie špecifických buniek štruktúr. Táto technika zafarbuje cytoplazmy, jadrá, nukleoly, vakuoly a bunkové granule, dokonca rozlišujú stôp jemných chromatínu.

Okrem toho je možné zistiť významné zmeny vo veľkosti, tvaru alebo sfarbení jadra, kde je to možné.

Nadácia Giemsovho zafarbenia

Farby Romanowského typu majú ako základný kontrast medzi kyslými a základnými farbivami, aby zabili základné a kyslé štruktúry. Ako je vidieť, existuje afinita kyslých farbív farbenia základných štruktúr a naopak.

Použité základné farbivo je metylénová modrá a jeho hrdzavé deriváty (Azure A a Azure B), zatiaľ čo kyslé farbivo je eozín.

Kyslé štruktúry buniek sú okrem iného nukleové kyseliny, granule bazofilných segmentov. Preto budú farbení metylénovou modrou.

V tom istom zmysle sú základné štruktúry buniek hemoglobín a niektoré granule, ako napríklad obsah v segmentovaných eozinofiloch, okrem iného. Budú zafarbené eosinou.

Na druhej strane, pretože metylén a azúrová modrá sa vyznačujú metacromatickými farbivami, môžu rôznym štruktúram poskytnúť variabilný tón rôznym štruktúr.

Takto sa strategická kombinácia základných a kyslých farbív podarí vyvinúť široké spektrum farieb podľa biochemických charakteristík každej štruktúry, ktorá prechádza bledou modrou, tmavo modrou, lila a fialovou modrou farbou, v prípade štruktúr kyseliny kyslej kyseliny kyseliny kyseliny kyseliny.

Sfarbenie poskytované eosinou je stabilnejšie a vytvára farby medzi červenkastým, oranžovým a lososom.

Materiál

Príprava roztoku matky

Príprava materského roztoku vyžaduje váženie 600 mg prachu Giemsa, meracie 500 cm3 acetónu, ktorý je hmotný metilolický alkohol a 50 cm3 neutrálneho glycerínu.

Spôsob prípravy

Položte ťažký prach Giessa na maltu. Ak existujú hrudky, musia byť rozdrvené. Následne pridajte značné množstvo nameraného glycerínu a veľmi dobre premiešajte. Získaná zmes sa naleje do veľmi čistej jantárovej fľaše.

Zvyšok glycerínu je umiestnený do malty. Znovu premiešajte, aby ste vyčistili zvyšok farbiva, ktorý bol prilepený k mínom stenách a hodil tú istú fľašu.

Môže vám slúžiť: Conidia

Fľaša je zakrytá a trvá 2 hodiny vo vodnom kúpeli pri 55 ° C. Ako dlho.

Následne sa zmes nechá ochladiť na umiestnenie alkoholu. Predtým sa časť nameraného alkoholu umiestni do malty na dokončenie premytia toho, čo sa sfarbuje, a potom sa pridá do zmesi vedľa zvyšku alkoholu.

Táto príprava by sa mala umožniť dozrievať najmenej 2 týždne. Časť, ktorá sa používa z materského roztoku, sa musí filtrovať.

Aby sa predišlo kontaminácii prípravy, odporúča sa prejsť časťou, ktorá sa bude neustále používať na malú jantárovú fľašu s odkvapkávačom. Opätovné opakovanie zakaždým, keď je činidlo vyčerpané.

Príprava roztoku vyrovnávacieho roztoku

Na druhej strane je roztok pufra 7,2 pH pripravený nasledovne:

6,77 gr fosforečnanu sodného (bezvodý) (NAHPO sa odvážia₄), 2,59 gr fosforečnanu draselného dihydrogénu (KH₂Po₄) a destilovaná voda do 1.000 cm3.

Konečná príprava sfarbenia

Na prípravu konečného roztoku farbenia sa merajú 2 cm3 filtrovaného materského roztoku a zmiešajú sa so 6 cm3 roztoku pufra. Zmes sa mieša.

Relevantná skutočnosť, ktorú je potrebné vziať do úvahy, je to, že techniky prípravy farbiva sa môžu meniť podľa komerčného domu.

Ďalšie materiály potrebné na vykonanie sfarbenia

Okrem opísaných materiálov, sfarbenia mostov, dezénov s vodou alebo nárazníkom na umývanie, plátky alebo zakrytie, stopky, stopky na riadenie časov sfarbenia a sušenia alebo nejakého materiálu, ktorý slúži na sušenie (gáza alebo bavlna (gáza alebo bavlna).

Technika

Zafarbenie

1. Pred zafarbením by mala byť pripravená predĺžená vzorka na čistom posúvaní.

Vzorky môžu byť krv, kostná dreň, histologické tkanivá alebo vzorky krčka maternice. Odporúča sa, aby predĺžené boli v poriadku a mali 1 alebo 2 hodiny sušenia pred ich vyfarbením.

2. Na sfarbení sa most umiestni všetky listy, ktoré majú zafarbiť. Vždy funguje v rovnakom poradí a každý list je dobre identifikovaný.

3. Položte niekoľko kvapiek 100% (metanol) kovovým alkoholom na zápach a nechajte 3 až 5 minút, aby sa vzorka fixovala a dehydratuje.

4. Zlikvidujte metanol prítomný v liste a nechajte vyschnúť vo vzduchu.

5. Akonáhle je suchý, vložte konečné zafarbenie roztoku s kvapkadlom, až kým nezakryje celý list. Nechajte akt 15 minút. Niektorí autori odporúčajú až 25 minút. Závisí to od komerčného domu.

6. Vypustite farbivo a umyte si trenie destilovanou vodou alebo roztokom tlmivého roztoku 7.2.

7. Na suchom papieri nechajte vonkajšie plachty suché, usporiadané vertikálne pomocou podpory.

Môže vám slúžiť: Renina: Štruktúra, výroba, sekrécia, funkcie

8. Vyčistite chrbát sklíčka gázou alebo bavlnou vlhkou alkoholom, aby ste odstránili akýkoľvek zvyšok farbiva.

Použitie/aplikácie farbenia Giemsa

Technika farbenia Giemsa sa používa v rôznych oblastiach: v hematológii, mykológii, bakteriológii, parazitológii, cytologii a cytogenetike.

Hematológia

Je to najčastejšie použitie, ktoré sa poskytuje tomuto farbeniu. S ním je identifikovaný každá z buniek prítomných vo vzorkách kostnej drene alebo periférnej krvi. Ako aj vypočítať počet každej série, ktorý je schopný detegovať leukocytózu alebo leukopéniu, trombocytopéniu atď.

Pretože je citlivý na identifikáciu nezrelé bunky, je relevantný pri diagnostike akútnej alebo chronickej leukémie. Je tiež možné vykonať diagnózu anémií, ako je drepanocytická, falciformná anémia,.

Mykológia

V tejto oblasti je jeho použitie bežné pre hľadanie Histoplazmatické kapsulatum (intracelulárne dimorfné huby) vo vzorkách tkanív.

Bakteriológia

V hematologickom nátere zafarbenom Giemsou je možné zistiť Borrelias SP U pacientov, ktorí študujú chorobu nazývanú recipentis horúčka. Spiroquety sú pozorované hojné medzi erytrocytmi, vo vzorkách odobratých v horúčkovom vrchole.

Je tiež možné vizualizovať intracelulárne baktérie, ako napríklad Rickettsias SP a Chlamydia trachomatis V infikovaných bunkách.

parazitológia

V oblasti parazitológie umožnilo farbenie Giemsu diagnózu parazitických chorôb, ako je malária, zlo Chagas a Leishmanióza.

V prvých dvoch, paraziti Plazmodium SP a Cruzi tripaosoma, môžu sa vizualizovať v periférnej krvi infikovaných pacientov. Sa nachádzajú v rôznych štádiách podľa fázy, v ktorej je choroba.

Na zlepšenie hľadania krvných parazitov sa odporúča.

Podobne môže byť kožná leishmanióza diagnostikovaná pri hodnotení vzoriek kožených biopsií zafarbených Giemsou, kde sa nachádza parazit.

Cytologia

Farbenie Giemsa sa tiež používa na cytologické štúdium endocervikálnych vzoriek, hoci to nie je technika, ktorá sa na tento účel najčastejšie používa.

Ale v prípade nedostatku zdrojov sa môže použiť, má funkciu podobnú funkcii, ktorú ponúka jazero Pap a nižšie náklady. Vyžaduje si to však odborné znalosti skúšajúceho.

Cytogenetika

Relevantnou charakteristikou farbenia Giemsa je jej schopnosť silne sa pripojiť k regiónom bohatým na adeníny a Timinas DNA. To umožňuje vizualizáciu DNA počas bunkovej myitózy v rôznych kondenzačných stavoch.

Tieto štúdie sú potrebné na detekciu chromatických aberácií, ako sú duplikácie, delécie alebo translokácie rôznych oblastí chromozómov.

Zafarbenie Giemsa. Zdroj: Panreac Applichem ITW Reagents. Verzia 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar Del Vallés, Španielsko.

Odporúčania na dobré zafarbenie

- Sušenie listov by sa nemalo zrýchliť. Obozretný čas na jeho sušenie sa musí očakávať vonku vonku. Približne 2 hodiny.

Môže vám slúžiť: Timina

- Sfarbenie bezprostredne po 2 hodinách pre lepšie výsledky.

- Aby sa zápach a lepšie zafarbil, vzorka sa musí distribuovať na plachte tak, aby bola tenká a rovnomerná vrstva.

- Preferovaná vzorka krvi je kapilárna, pretože Smere.

- Ak sa použije žilová krv, EDTA by sa mala používať ako antikoagulant a nie heparín, pretože ten zvyčajne deformuje bunky.

Bežné chyby v sfarbení Giemsa

V praxi tohto sfarbenia môžete robiť chyby. Dokazujú im náhle zmeny v tonalitách štruktúr.

Mimoriadne modré sfarbenie

Môže to byť spôsobené:

- Veľmi hrubé náter.

- Prekročenie času zafarbenia.

- Nedostatočne umyť.

- Použitie činidiel vysoko nad neutrálnym pH (alkalické).

Za týchto podmienok sú farby nasledujúcich štruktúr skreslené takým spôsobom, že erytrocyty namiesto farbenia ružových solí, n budú zelené, granule eozinofilov, ktoré sa musia zafarbiť červenou tehlom Gray, a tak ďalej, bude odchýlka v obvyklých odtieňoch.

Nadmerne ružové sfarbenie

Môže to byť spôsobené:

- Nedostatočný čas na farbenie.

- Predĺžené alebo nadmerné umývanie.

- Zle vysychanie.

- Použitie veľmi kyslých činidiel.

V tomto konkrétnom prípade štruktúry, ktoré sú normálne zafarbené modrou farbou, nebudú takmer viditeľné, zatiaľ čo štruktúry, ktoré sú farbené ako Rose, budú mať veľmi prehnané tóny.

Príklad: erytrocyty budú mať silnú jasnú alebo oranžovú červenú farbu, jadrový chromatín bude vyzerať bledom ružovo a eozinofilné granule budú zafarbené z jasne jasne jasne červenej jasnej jasnej jasnej jasnej červenej farby.

Prítomnosť precipitátov v nátere

Príčiny môžu byť:

- Používajte špinavé alebo zlé plátky.

- Nenechajte rozmazané zaschnúť.

- Upevňovacie riešenie nechajte príliš dlho.

- Nedostatočné umývanie na konci farbenia.

- Nedostatočná filtrácia alebo nefiltrácia, ktoré sa používa farbivo.

Prítomnosť morfologických artefaktov

V náteroch sa môžu objaviť morfologické artefakty, ktoré bránia vizualizácii a interpretácii prítomných štruktúr. Je to kvôli:

- Typ použitého antikoagulancie, napríklad heparín.

- Použitie špinavých, zhoršených alebo mastných listov.

Úložný režim

Po pripravení sa farbivo musí udržiavať pri teplote miestnosti (15-25 ° C), aby sa zabránilo zrážaniu farbiva. Musí byť uložený v dobre uzavretej jantárovej nádobe.

Odkazy

1. Cannova, D., Brito, e. A Simons, m. (2016). Vyhodnotenie sfarbenia techník na diagnostiku kožnej leishmaniózy. Saus. 
2. Panreac applichem itw reagnts. Zafarbenie Giemsa. Verzia 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar Del Vallés, Španielsko.
3. Clark, G. Postupy farbenia (1981). Williams a Willkins.