Nadácia koagulázy, postup a použitie

Ten Koaguláza Je to laboratórna technika, ktorá sa používa na zvýraznenie prítomnosti enzýmu koagulázy. Tento enzým má vlastnosť koagulárnej plazmy. Loeb v roku 1903 bol prvým, kto opísal tento enzým.

Tento test sa vykonáva na gram pozitívne kokosové orechy, pozitívna kataláza, ktorá umožňuje kmene Stafylococcus aureus Zvyšok stafylokokov, pretože je jediným mikroorganizmom klinického významu, ktorý ho produkuje.

Oba obrázky odhaľujú pozitívny koagulázový test. Zdroj: ľavý obrázok: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0/]]. Správny obrázok: Fotografia, ktorú urobil autor MSC. Marielsa Gil.

V tomto zmysle sa členovia rodiny Staphylococaee, ktorí vydali tento negatívny test.

Existujú niektoré kmene odlišné od Siež. aureus  ktoré môžu produkovať koagulázu, napríklad Staphylococcus Schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius a S. Delphini.

Prvé tri majú však klinický význam na veterinárnej úrovni a zriedka sa dajú nájsť ako príčinné činidlo ľudských infekcií, zatiaľ čo Siež. Delphini Nachádza sa iba v morských prostrediach.

Okrem toho sa ľahko líšia, pretože Siež. Hyicus a Siež. Medzimedius Neprehrá z manitolu a Siež. Schleiferi spp koagulans Neferuje maltózu ani trehalosu, zatiaľ čo Siež. aureus Áno, ferment tieto uhľohydráty.

Prítomnosť enzýmu koagulázy je spojená s virulenciou kmeňov.  Táto teória však klesá, vzhľadom na skutočnosť, že iné druhy virulentnej negatívnej koagulázy sú pozorované schopné produkovať dôležité infekcie.

[TOC]

Základ

Stafylococcus aureus Vytvára dva typy koagulázy, jeden, ktorý zostáva spojený s bunkovou stenou, tiež nazývaný aglutačný faktor alebo reaktívny faktor koagulázy (FRC), a extracelulárny, ktorý sa uvoľňuje v kvapalných plodinách. Preto sa nazývajú United Coagulase a Free Coagulase.

Enzým koagulázy vďačí za svoj názov akcii, ktorú vytvára. To má schopnosť transformovať fibrinogén na fibrín a vytvára zjavnú zrazeninu, keď je v plazme, to znamená, že tento enzým simuluje trombínovú aktivitu koagulačného vodopádu.

V skutočnosti jednou z najprijateľnejších teórií je, že Spojená koaguláza reaguje s voľnou koagulázou na aktiváciu koagulačných faktorov. Táto aktivácia vytvára látku, ktorá pôsobí podobne ako robí protrombín, čím vytvára zlúčeninu s trombínovou funkciou.

Môže vám slúžiť: profil štítnej žľazy: hormónová funkcia, dôležitosť, kvantifikácia

Rozdiel s normálnym vodopádom koagulácie spočíva v tom, že táto reakcia nepotrebuje prítomnosť vápnika a nie je ovplyvnená heparínom.

Na vykonanie testu koagulázy stačí čeliť čerstvej plodine Staphylococcus s plazmou výhodne králikovou plazmou a tak pozorovať tvorbu alebo nie zrazeniny.

Existujú špecifické techniky na detekciu United Coagulase a United a Free Coagulase súčasne.

Niektoré kmene Siež. aureus Dávajú rýchlejší pozitívny výsledok ako ostatní. Rýchlosť tvorby zrazenín je priamo úmerná súčasnej koncentrácii koagulázy.

Technika testu koagulázy v snímke detekuje United Coagulas.

Postup

-Koagulázový test u držiteľa

Materiál

-Čistého posúvača

-Králiková plazma je výhodne použitá aj ľudská alebo konská plazma. Plazma je možné získať komerčne lyofilizovanú a rekonštituovanú, keď sa bude používať alebo sa dá použiť čerstvé (nedávno prijaté). Ďalšou životaschopnou alternatívou je použitie fibrinogénu.

-Soľný roztok (0,85%) sterilný (SSF).

Získanie čerstvej plazmy

Extrahovať ľudskú alebo zvieratá žilovú krv. Môže sa použiť ktorýkoľvek z nasledujúcich antikoagulancií: EDTA, oxalát vápenatého, heparínu alebo citrát sodný. Dobre premiešať a odstredivka. Asepticky odstráňte supernatant (plazma), bez červených krviniek a ukladajte v sterilnej trubici.

Oddelenie plazmy. Zdroj: Fotografia urobená autorom: MSC. Marielsa Gil.

Lyofilizovaná plazma

Rekonštruovať podľa špecifického injekčnej liekovky Commercial Kit.

Čerstvý fibrinogén

Z citratovanej plazmy premiešajte plazmu s nasýteným roztokom chloridu sodného. Nechať.

Zlikvidujte supernatant, rekonštituujte zrazeninu až 5 -násobok jej objemu so sterilnou destilovanou vodou. Pridajte 5 jednotiek heparínu pre každú ml fibrinogénu. Uložiť.

Technika

V sklíčku sa umiestnia kvapka soľného roztoku a kvapka plazmy osobitne. Vezmite si platinovú rukoväť 1 alebo 2 čisté kolónie mikroorganizmu, aby ste to vyskúšali.

Zmiešajte bakteriálne zaťaženie v plazmovom poklese a opakujte operáciu v kvapke SSF. Okamžite si všimnite výsledky. Pozitívnym výsledkom bude výsledok, v ktorom sa tvorba makroskopického aglutinovaného (biela zrazenina) pozoruje po jednej minúte na strane kvapky plazmou.

Môže vám slúžiť: Ekofyziológia: Aké štúdie a aplikácie u zvierat a zeleniny

Kvapka SSF slúži ako negatívna kontrola. Ak sa pozoruje aglutinácia SSF, znamená to, že mikroorganizmus je self-aglutín, ktorý je schopný poskytnúť falošne pozitívne výsledky. V tomto prípade musí byť potvrdený testom trubice.

Odporúča sa tiež namontovať pozitívnu kontrolu so známym napätím Siež. aureus.   

Interpretácia

Aglutinácia do 5 až 20 SEG (silný pozitívny test).

Variabilná aglutinácia medzi 20 sekundami a jednou minútou (pozitívny oneskorený test).

Určitý stupeň aglutinácie po minúte (pochybný test). Odporúča sa opakovať test alebo potvrdiť metódou trubice.

Neexistuje žiadna aglutinácia (negatívny test).

Výsledok s SSF. Ak je výsledok testu automaticky.

-Test trubice koagulázy

Materiál

-Sterilná skúšobná trubica

-Plazma

-Kúpeľ Maria pri 37 ° C.

Technika

Zmerajte sterilnou 0,5 ml pipetou plazmy a vložte ju do skúšobnej trubice 12 x 75. Vložte platinovú rukoväť s 2 až 4 čistými kolóniami, aby ste sa študovali z pevnej plodiny od 18 do 24 hodín a opatrne ju rozpúšťajte v plazme, miešajte a inkubujte pri 37 ° C počas 4 hodín.

Preskúmajte trubicu v prvej hodine bez toho, aby ste ju potriasli, len jemne naklonené. Ak sa stále nedodržiava zrazenina, môžete každých 30 minút sledovať každých 30 minút až do dokončenia 4 hodín. Ak je po 4 hodinách stále negatívny, môže byť ponechaný do 24 hodín, ale pri izbovej teplote. Pozorovať a nahlásiť výsledok.

Na základe skúseností niektorí mikrobiológovia odporúčajú použiť 500 ul bakteriálnej suspenzie z 18 -hodinovej plodiny v kvapalnom médiu na vykonanie testu.

Zdá sa, že ponúka rýchlejšie a spoľahlivejšie výsledky, ako keď sú emulgované kolónie zo tuhých médií, najmä ak sa použila ľudská plazma získaná z krvnej banky.

Použitie kmeňov z vývaru pomáha zriediť možnú prítomnosť ľudských anti-stafylokokových protilátok v plazme, ktoré môžu inhibovať účinok koagulázy.

Interpretácia

Ak zrazenina, ktorá pokrýva všetku tekutinu (kompletná koagulácia) alebo zráža, že nič v zostávajúcej kvapaline (čiastočná koagulácia) by sa nemala považovať za pozitívny test.

Môže vám slúžiť: vetvy biológie a čo študujú

Ak sa nevytvára, to znamená, že suspenzia je homogénna, test je negatívny.

-Test koagulázy s použitím fibrinogénu

Fibrinogén sa používa rovnako ako plazma a slúži na test držiaka a test trubice. Postupujte podľa opísaného pre plazmu a interpretovať rovnakým spôsobom.

Využitie

Používa sa na rozlíšenie Stafylococcus aureus negatívnych koagulázových stafylokokov.

Qa

Mať čerstvé plodiny napätia Siež. aureus Používanie ako pozitívna kontrola. Môžete mať tiež napätie Siež. epidermidis ako negatívna kontrola.

Obmedzenia

-Pozitívny test by sa nemal ponechať v inkubácii 24 hodín, ako Siež. aureus produkuje fibrinolisín, ktorý rozpúšťa zrazeninu.

-Pri spoľahlivom teste by sa mala použiť čerstvá alebo čerstvo rekonštituovaná plazma, ako aj je dôležité používať čerstvé bakteriálne plodiny (18 až 24 hodín). Tým sa vyhýba falošným negatívom.

-Test sa musí vykonávať spoločne s negatívnou kontrolou a pozitívnou kontrolou.

-Niektoré pevné médiá môžu interferovať s testom koagulázy. Neodporúča sa.

-Ak sa použije citovaná plazma, odporúča sa umiestniť 5 jednotiek heparínu na ml plazmy, aby sa predišlo falošným pozitívam. Je to preto, že niektoré rôzne mikroorganizmy Siež. aureus Môžu rozložiť citrát a robiť zrazeninu plazmy. V tomto prípade je vhodné robiť gram a katalázový test.

-Pri teste trubice je dôležité monitorovať reakciu každých 30 minút, pretože existujú kmene Siež. aureus ktoré produkujú vysoké koncentrácie fibrinolisínu a zriedia novovytvorenú zrazeninu. Vyhnite sa falošným negatívom.

-Pri monitorovaní testu je potrebné náhle vyhnúť trubici, môže to zničiť začiatok tvorby zrazeniny, ktorá sa neobnoví, čo spôsobí falošné negatívy.

Odkazy

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. PAN -AMERICAN. Buenos Aires. Argentína.
4. Laboratóriá. Králičie plazma. K dispozícii na: Pro-Lab.com
5. „Koaguláza.„ Wikipedia, encyklopédia zadarmo. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.orgán.