Nadácia katalázy, technika a použitie

Ten kataláza Je to metodika používaná v bakteriologických laboratóriách na zdôraznenie prítomnosti enzýmovej katalázy v tých baktériách, ktoré ju majú. Vedľa Gramových sfarbení sú hlavné testy, ktoré by sa mali vykonávať na čerstvo izolovaných mikroorganizmoch. Tieto testy usmerňujú mikrobiológa o krokoch, ktoré treba dodržiavať pre definitívnu identifikáciu príslušného mikroorganizmu.

Všeobecne platí, že baktérie obsahujúce cytochróm majú enzým Catlas, to znamená, že by ho mali mať aeróbne a voliteľné anaeróbne baktérie. Existujú však výnimky, ako napríklad Streptococcus, ktoré napriek tomu, že sú voliteľnými anaeróbnymi mikroorganizmami.

Vykonávanie testu katalázy, vykazujúce pozitívnu reakciu. Zdroj: K dispozícii nie je žiadny stroj na čítanie stroja. NASE sa predpokladá (na základe nárokov na autorské práva). [CC BY-SA 3.0 (http: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0/]]

Z tohto dôvodu sa test katalázy používa hlavne na rozlíšenie Staphylocoae a MicroCoCaceAE (obidva pozitívna kataláza) rodiny Streptocaee (negatívna kataláza) (negatívna kataláza).

Podobne sa medzi ostatnými odlišuje rod Bacillus (pozitívna kataláza) od rodu Clostridium (negatívna kataláza).

[TOC]

Základ

Kataláza je enzým klasifikovaný ako hydroperoxidáza, čo znamená, že používajú peroxid vodíka ako substrát (H₂Ani₂).

Považuje sa tiež za oxidoreduktázu, pretože v reakcii, kde existuje prvok, ktorý slúži ako darca elektrónov (redukčná látka) a iná ako elektrónový prijímač (oxidačná látka).

Kataláza je proteín, ktorý obsahuje prostatickú skupinu so štyrmi trivalentnými atómami železa (viera⁺⁺⁺), preto je to homoproteín. Počas reakcie zostáva železitý ión oxidovaný.

Dá sa povedať, že kataláza je detoxikačný enzým, pretože jeho funkciou je eliminovať látky, ktoré sa vyskytujú počas bakteriálneho metabolizmu, ktoré sú toxické pre baktérie. Medzi tieto látky patrí peroxid vodíka.

Peroxid vodíka je tvorený rozkladom cukrov aerobikmi. Tento proces sa vyskytuje nasledovne:

Superoxidový ión (alebo₂^-) (Voľný radikál) sa tvorí ako konečný produkt asimilácie glukózy aeróbnou cestou. To je toxické a je eliminované enzýmovou superoxidd dysmutázou, ktorá ho transformuje na plynný kyslík a peroxid vodíka.

Môže vám slúžiť: Holdridge Life Zones: Čo je v Latinskej Amerike

Peroxid vodíka je tiež toxický pre baktérie a musí sa eliminovať. Katalázový enzým rozvíja peroxid vodíka vo vode a kyslíku.

Kataláza môže pôsobiť na iné substráty iné ako peroxid vodíka, ako sú alkoholy, aldehydy, kyseliny, aromatické amíny a fenoly. Peroxid vodíka sa však môže použiť aj katalázou na oxidáciu iných toxických zlúčenín, ako je metyl a etylalkohol.

Podobne je kataláza prítomná vo fagocytárnych bunkách a chráni ju pred toxickým pôsobením peroxidu vodíka.

Rutinná technika pre katalázový test

-Metóda v snímke

Materiál

3% peroxid vodíka (10 objemov).

Prenosná lamina

Jednorazová plastová rukoväť alebo drevená tyčinka.

Postup

Z kolónie si vziať dostatok množstva, aby ste sa dotkli agaru, z ktorého pochádza. Kolónia musí byť čerstvá, to znamená z úrody 18 až 24 hodín.

Položte kolóniu na držiak sucha a na ňu pridajte pokles o 3% peroxid vodíka (môžete tiež použiť H₂Ani₂ pri 30%). Ak sú bubliny oddelené alebo nie.

Interpretácia

Pozitívna reakcia: Oddelenie plynu, čo je zrejmé z tvorby bublín (silná bublina).

Negatívna reakcia: Neexistuje žiadna tvorba bublín.

-Priama metóda v čistej kultúre

Umiestnite 1 ml h₂Ani₂ 3% na čistej plodine v tanieroch alebo klinoch, ktoré neobsahujú krv (najlepšie výživné priľnavosť). Okamžite sledujte, či dôjde k tvorbe bublín alebo nie. Môžete tiež použiť h₂Ani₂ 30%.

Interpretuje sa rovnako ako metóda držiteľa objektu.

-Metóda s kapilárou alebo hubou a trubicou Petrisho

Naplňte kapilárnu trubicu 67 mm vo výške 20 mm s 3% peroxidom vodíka na kapilaritu.

Dotknite sa izolovanej kolónie, ktorú chcete študovať s kapilárou plnou H₂Ani₂ 3%_. Pozorujte, či je kapilára naplnená bublinami za približne 10 sekúnd. Táto metóda umožňuje polo-kvantifikovať reakciu na krížoch:

Bez krížov neexistujú žiadne bubliny (negatívna reakcia).

Môže vám slúžiť: Flora a fauna na Falklandských ostrovoch: Vynikajúci druh

+ --Nedostatočné bubliny (slabá alebo oneskorená reakcia).

++ -Bohaté bubliny (mierna reakcia).

+++ -Bubliny dosiahnu opačný koniec (energetická reakcia).

-Metóda Taylor a Achanzar pre testy katalázy, ktoré dávajú pochybné

V čistom a suchom posúvaní je izolovaná kolónia a potom položte kvapku H₂Ani₂ 0,5% a zakryte krytmi. Všimnite si, či existuje alebo nie je tvorba uväznených bublín.

Interpretácia: Prítomnosť bublín naznačuje pozitívnu reakciu. Bez bublín sa interpretuje ako negatívna reakcia.

Test katalázy pre druhy Mycobacterium

Túto techniku ​​je potrebné vykonať reguláciou pH a teploty. Musí sa vykonávať pod zvončekom laminárneho prietoku, pretože manipulácia s rôznymi druhmi Mycobacterium je nebezpečná.

-Materiál

30% alebo 110 objemový peroxid vodíka (superoxal).

Fosfátový pufer pH 7

Tween 80 až 10%

Mycobacterium kultúra v klinoch od 3 do 4 týždňov

-Príprava z činidlá

Fosfátový pufer pH 7

Vážiť:

1 361 g (kh₂Po₄) Anhydra.

1 420 g (Na2HPO3) dysodického fosfátu bezvodého.

Rozpustite obidve soli v malej sterilnej destilovanej vode a kompletne s vodou až do 1 000 ml.

Tween 80 až 10%

Vykonajte riedenie 1:10 pre Tween 80, ktorá je komerčne koncentrovaná, aby to pokračovalo takto:

Vezmite 1 ml Tween 80 a vložte ju do malej destilovanej vody, rozpustite sa a potom dokončite objem vodou do 10 ml.

Konečné činidlo

Zmiešajte množstvo fosfátového pufra s množstvom Tween 80 až 10% (v rovnakých častiach). Definujte v laboratóriu, koľko sa chcete pripraviť.

-Postup

Vložte 5 ml fosfátového pufra do sterilnej skúmavky s vekom závitu (Baquelita).

Pri rukoväti naočkovania si vezmite dostatok kolónie rastu Mycobacterium zasiate v klinoch a rozpustite sa vo fosfátovom pufri.

Trubičku prikryte bez utiahnutia závitu. Vložte do kúpeľne pri 68 ° C po dobu 20 až 30 minút. Vyberte a ochladte pri 22-25 ° C

Zmerajte 0,5 ml konečného činidla (zmes) a pridajte ho do skúmavky so studeným roztokom. Pozorovať alebo nie tvoriť bubliny.

Sa interpretuje, ako aj predchádzajúce techniky.

Využitie

Keď sa získa rast kolónií v obohatenom médiu, do získaných kolónií sa musí vykonať gram zafarbenie a test katalázy. Tým sa sprevádza mikrobiológa o postupoch, ktoré sa majú dodržiavať na definitívnu identifikáciu.

Môže vám slúžiť: Jednoduchý plochý epitel: Charakteristiky, funkcie a typy Zdroj: Pripravil autor MSC. Marielsa Gil

 Qa

Na vyhodnotenie správneho fungovania činidla peroxidu vodíka používajte čerstvo kultivované kontroly, ako napríklad Stafylococcus aureus ako pozitívna kontrola a kmene Streptococcus SP ako negatívna kontrola.

Ďalšou alternatívou, ktorá slúži ako pozitívna kontrola, je umiestnenie kvapky peroxidu vodíka na agar v krvi, erytrocyty majú katalázu, preto dôjde k bubliningu, ak je činidlo v dobrom stave.

Ako negatívnu kontrolu môžete použiť čokoládový agar, tu sú už uvedené erytrocyty a test poskytuje negatívny.

Obmedzenia

-Na test nepoužívajte staré plodiny, pretože to môže spôsobiť falošné negatívy.

-Vyhnite sa berúc kolónia z plodín v krvnom agari, ak ste opatrní, aby ste sa nedotýkali agaru; Tento postup môže spôsobiť falošné pozitíva, pretože erytrocyty obsahujú katalázu.

-Ak vezmete kolóniu s platinovou rukoväťou, neinvestujte poradie postupu, pretože to môže generovať falošné pozitíva. Dôvodom je, že platina je schopná reagovať s peroxidom vodíka, pôvodom z bubliny.

-Nepoužívajte činidlo peroxidu vodíka, ak je veľmi staré, pretože činidlo je veľmi nestabilné a má tendenciu sa časom rozkladá.

-Udržujte činidlo peroxidu vodíka chránené pred svetlom a chladením, aby ste zabránili poškodeniu.

-Vykonajte kontrolu kvality v súvislosti s peroxidom vodíka pri každom použití.

-Berte do úvahy, že ak sa použije h₂Ani₂ pri 30% sú reakcie silnejšie ako reakcie s H₂Ani₂ 3%.

Odkazy

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. PAN -AMERICAN. Buenos Aires. Argentína.
4. BD Laboratories. Kataláza. K dispozícii na: http: // winklerltda.Cl
5. Laboratóriá Vadequímica. Peroxid vodíka. Rovnocennosť medzi objemami a percentuálnym podielom. K dispozícii na: Vadequimica.com