Močovina, čo je, nadácia, príprava, používa

On Močovina Je to tekuté kultivačné médium, ktoré sa používa na demonštráciu prítomnosti enzýmu ureasy v určitých mikroorganizmoch. Ureasa je mikrobiálny enzým, ktorý sa vyskytuje konštitutívnym spôsobom, to znamená, že je syntetizovaný bez ohľadu na to alebo nie je substrátom, na ktorom pôsobí.

Funkcia ureasy súvisí s rozkladom organických zlúčenín. Nie všetky mikroorganizmy sú schopné syntetizovať tento enzým, a preto jeho určenie v laboratóriu vám umožňuje identifikovať určité bakteriálne kmene a dokonca rozlišovať medzi druhmi toho istého pohlavia.

Existujú dva typy testu močoviny: Stuart a Christensen. Líšia sa z ich zloženia a citlivosti. Prvý je špeciálny, ktorý ukazuje veľké množstvo ureasy produkovanej druhom proteínového rodu.

Druhá je citlivejšia a v poslednej dobe môže detekovať malé množstvá ureasy inými bakteriálnymi žánrami, ako sú Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter a Mycobacterium.

Stuartov vývar močoviny sa skladá z močoviny, chloridu sodného, ​​fosfat dipo -.

Zatiaľ čo Christensenov vývar alebo uchopenie močoviny sa skladá z peptonov, chloridu sodného, ​​monopotázového fosforečnanu, glukózy, močoviny, fenolu červenej, destilovanej vody a agar-gut. Posledne menované, iba ak je to pevné médium.

Základ

Enzým ureasa hydrolyzuje močovinu za vzniku karbonového anhydridu, vody a dvoch molekúl amoniaku. Tieto zlúčeniny reagujú na vytvorenie konečného produktu nazývaného uhličitan amónny.

Vývar močoviny

Stuartov vývar močoviny je viac pufrovaný s pH 6,8. Preto musí byť mikroorganizmus schopný vytvoriť veľké množstvo amoniaku, aby sa zmenila červená fenol. PH musí stúpať nad 8.

Preto je Stuartov močovinový vývar selektívny pre druhy proteusu, čo poskytuje pozitívne výsledky v 24 až 48 hodinách inkubácie a nie je účinný pre baktérie, ktoré produkujú niekoľko množstiev ureasy alebo ktoré pomaly hydrolyzujú močovinu.

Je to preto, že druhy proteus sú schopné používať močovinu ako zdroj dusíka. Na druhej strane, ďalšie baktérie produkujúce ureasy potrebujú ďalší zdroj.

Pérez a kol. Avšak. (2002) zistili, že Stuartov vývar močoviny bol rovnako účinný ako Christensenov močový agar, aby sa určil ureasa v kvasinkových kmeňoch úprimného.

Autori štúdie tvrdia, že dosiahli 100% náhoda s oboma médiami (Stuart a Christensen) inkubáciou 24 a 48 hodín; Výnimka, že kmene, ktorým sa podarilo premeniť médiá na silnú farbu ružovej fuksie, považovali za pozitívne.

Toto vysvetlenie je potrebné, pretože Lodder (1970) uviedol, že takmer všetkým kvasinkami dokážu umiestniť ráme močoviny močoviny bledý Rosado. Je to preto, že môžu hydrolyzovať močovinu v minimálnych množstvách a na tvorbu amínov oxidačnou dekarboxyláciou povrchových aminokyselín. Toto by sa nemalo interpretovať ako pozitívne.

Christensenov močovina alebo agar

Christensenov močovina alebo agar je menej vyrovnávací, je schopný zistiť malé množstvá amoniaka. Okrem toho je toto médium obohatené o peptony a glukózu. Tieto zlúčeniny spôsobujú, že sa rozvíjajú ďalšie mikroorganizmy produkujúce ureasy, ktoré nerastú.

Podobne, Christensenov test močoviny ponúka rýchlejšie výsledky, najmä v prípade proteusu, ktorý je schopný poskytnúť silne pozitívne za 30 minút ako minimálny čas a až 6 hodín ako maximálny čas.

Zvyšok výrobných mikroorganizmov Ureasy dokáže mierne zmeniť farbu prostredia po 6 hodinách a silne po 24, 48, 72 hodinách alebo viac, a dokonca aj niektoré kmene môžu po 5 alebo 6 dňoch slabé reakcie dať slabé reakcie.

Interpretácia oboch médií (Stuart a Christensen)

Médium je pôvodne žlté oranžové a pozitívna reakcia zmení farbu zo stredného na ružovú fucsiu. Intenzita farieb je priamo úmerná množstvu vyrobeného amoniaka.

Negatívna reakcia ponechá pôvodnú farbu s výnimkou kvasiniek, ktoré môžu dať bledo ružovú s Christensenovou močovou médiou.

Príprava

Vývar močoviny

Zvážte potrebné gramy podľa indikácií komerčného domu. Rozpustite sa najlepšie v sterilnej destilovanej vode.  Nepoužívajte teplo na rozpustenie, pretože močovina je citlivá na teplo.

Na sterilizáciu metódy filtrácie membrány sa používa. Na tento. Nepoužívajte autokláve. Akonáhle je roztok filtrovaný, je distribuovaný v sterilných skúmavkách. Na získanie spoľahlivých výsledkov sa musí medzi 1,5 ml prenášať ako minimálne množstvo pri 3 ml ako maximálne množstvo na trubicu.

Pred použitím udržiavajte v chladničke a temperamente.

Ak metóda filtrácie nie je k dispozícii, médium sa musí okamžite použiť na získanie spoľahlivých výsledkov.

Ďalším spôsobom, ako pripraviť Stuartovu močovinu, je nasledujúci:

Niektoré komerčné domy predávajú základné médium pre test močoviny, okrem močoviny.

Suma označená komerčným domom váži. Rozpúšťa sa v destilovanej vode a sterilizuje sa v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte trochu stáť a keď je médium teplé 100 ml 20% pripraveného roztoku močoviny a pridá sa filtrácia filtráciou.

Je distribuovaný v sterilných skúmavkách, ako je opísané vyššie.

Christensenov močovina alebo agar

-Príprava roztoku močoviny

Vážiť 29 g gr dehydratovanej močoviny a rozpúšťajte sa v 100 ml destilovanej vody. Na sterilizáciu použite metódu filtrácie. Nie autotoklavate.

-Agar močoviny

Rozpustite 24 Gr dehydratovanej bázy v 950 ml destilovanej vody. Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte stáť, kým nedosiahne teplotu 50 ° C a pridajte močovinu predtým pripravenú aseptickou cestou.

Nalejte 4 až 5 ml do sterilných trubí. Vrchol dlhej flauty musí byť.

Toto médium sa dá pripraviť aj v tekutej forme.

Žiadosti

Test močoviny je mimoriadne účinný na rozlíšenie žánru proteus od iných žánrov rodiny Enterobacteriaceae, vzhľadom na rýchlu reakciu, ktorú proteus poskytuje.

Ak sa použije zloženie Christensena, test pomáha rozlišovať medzi druhmi od toho istého rodu. Napríklad, Siež. Haemolyticus a s. Warneri sNa Stafylokok negatívna a betahemolytická koaguláza, Ale líšia sa v čom Siež. Haemolyticus Je to negatívne a Siež. Warneri Je to pozitívna močovina.

Na druhej strane McNulty úspešne použil 2% Christensenov močovinový vývar na štúdium prítomnosti Helicobacter pylori Vo vzorkách biopsie odobratých z žalúdočnej sliznice (antrálna oblasť).

Prítomnosť H. pylori Dôkazom je pozitívny test močoviny. Trvanie na pozorovanie výsledkov je priamo úmerné množstvu prítomných mikroorganizmov.

Ako je vidieť, je to jednoduchá metóda diagnózy Helicobacter pylori V žalúdočných biopsiách.

Nakoniec je tento test užitočný aj na diferenciáciu druhov od žánrov brucella, bordetella, Bacillus, Micrococcus a Mycobacteria.

Test močoviny vysiate

Tieto dve metódy vyžadujú silné mikrobiálne inokulum na optimalizáciu výsledkov. Bakteriálne kolónie sú výhodne odobraté z krvného agaru a kvasiniek Sabouraudského agaru, s výnimkou niektorých výnimiek. Inokulum je emulgované v kvapalnom prostredí.

V prípade Stuartovho močového vývaru sa 37 ° C inkubuje 24 až 48 hodín, s vedomím, že hľadá iba kmene proteínového rodu, keď je kmeň baktériou. Pre kvasinky môžete inkubovať pri 37 ° C alebo pri teplote miestnosti počas 24 až 48 hodín inkubácie.

V prípade Christensenovho močového vývaru sa 37 ° C inkubuje 24 hodín. Ak je test negatívny, môže sa inkubovať až 6 dní. Ak test poskytuje pozitívny pred 6:00, naznačuje, že ide o kmeň žánru proteínu.

V prípade Christensenovho agaru močoviny je ráme agar silne naočkovaný bez prepichnutia. Vývar je inkuba a interpretuje rovnakým spôsobom.

Qa

Na testovanie média, ktoré môžete použiť ovládacie prvky, ako napríklad Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 a Salmonella typhimurium.  Prvé dva musia poskytnúť pozitívne výsledky a posledné dva negatívne výsledky.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. Christensen Media (agar močoviny). Dostupné na: BritánAlab.com