Agar TSI Čo je, nadácia, príprava, používa

On Agar TSI o Agar s trojitým cukrom je tuhé kultivačné médium, ktoré slúži ako biochemický test na usmernenie počiatočnej identifikácie gramne negatívnych bacilov. Je založená na dôkazoch.

Jeho zloženie a základy sú veľmi podobné testu Kigler Hierro, s rozdielom, že posledne menovaný obsahuje iba glukózu a laktózu. Na druhej strane, - ako názov naznačuje - Agar železa s trojitým cukrom obsahuje tri fermentovateľné sacharidy: glukóza, laktóza a sacharóza.

Okrem toho má médium TSI štyri deriváty proteínov, vďaka ktorým je veľmi výživným agarom: kvasinkový extrakt, extrakt z mäsa, peptón a peptón. Obsahuje tiež síran amónny železitý, tiosíran sodný, chlorid sodný, fenol červený a agar.

Neschopnosť mikroorganizmu pri fermentácii glukózy prítomnej v prostredí ho okamžite vylučuje z patriaceho do rodiny Enterobacteriaceae rodiny. Preto je tento test nevyhnutný na rozhodnutie, ktorá identifikačná cesta by sa mala vykonať na určenie pohlavia a druhov.

Každé laboratórium rozhoduje, či funguje s TSI Agar alebo Kligler Hierro.

Základ

Každá zo zlúčenín plní funkciu v médiu.

Chlorid sodíka a agar

Chlorid sodný je potrebný na udržanie osmotickej rovnováhy média. Zatiaľ čo agar vám dáva solídnu konzistenciu.

Indikátor pH (fenol červená)

Pripravené médium pH je vyvážené pri 7,3 a indikátor pH (fenol červená) so žltou farbou pod 6,8. To znamená, že malé množstvo kyselín produkovaných fermentáciou cukrov premení červenooranžovú na žlté médium.

Ak sa nestane fermentáciou, dôjde k alkalizácii média v dôsledku použitia peptones, ktoré sa zmení z červenooranžovej na silnú červenú.

Proteínové deriváty (kvasinkový extrakt, extrakt z mäsa, peptón a peptón proteín)

Keď baktérie metabolizujú proteíny prítomné v agar TSI, vyrábajú sa amíny, ktoré alkalizujú médium (hlavne na úrovni rámu), pretože reakcia potrebuje kyslík. Amíny premenia rám na silnú červenú.

Bude to však závisieť od schopnosti fermentujúcich baktérií alebo nie uhľohydrátov.

Fermentácia uhľohydrátov (glukóza, laktóza a sacharóza)

Štúdia fermentácie cukrov môže poskytnúť niekoľko obrázkov a každý z nich sa interpretuje odlišne. Interpretácia testu rozdeľuje mikroorganizmy do 3 kategórií: fermenters -glukózový fermenter, fermentery ne -laktózy a fermentory laktózy/sacharózy.

Je potrebné poznamenať, že množstvo glukózy v strede je obmedzené, zatiaľ čo koncentrácia laktózy a sacharózy je 10 -krát vyššia.

Baktérie rodiny Enterobacteriaceae a ďalšie mikroorganizmy fermentujúce glukózy začnú tento cukor fermentovať, pretože najjednoduchším uhľohydrátom je získať energiu na získanie energie.

Môže vám slúžiť: izotonické riešenie: komponenty, príprava, príklady

Na druhej strane, laktóza a sacharóza sú zložité uhľohydráty, ktoré sa musia rozložiť a stať sa glukózou, aby mohli vstúpiť do cyklu Embden-Meyerhof.

-Nefermentárne mikroorganizmy

Ak naočkovaný mikroorganizmus nie je schopný fermentovať glukózu, oveľa menej môže fermentovať ďalšie sacharidy. Preto tu nie sú tvorené kyseliny, ale v ráme je tvorba amínu v dôsledku použitia peptones.

V tomto prípade skosenie zmení silné.

Interpretácia: K / K znamená alkalické skosenie / alkalické alebo neutrálne pozadie

Na obrázku nachádzajúci sa na začiatku článku pozri obrázok trubice d.

Tento výsledok naznačuje, že mikroorganizmus nepatrí do rodiny Enterobacteriaceae.

-Nefermentárne mikroorganizmy laktózy/sacharózy

Ak sú baktérie schopné fermentovať glukózu, ale nie laktózu alebo sacharózu, stane sa nasledujúce:

Baktérie budú konzumovať všetku glukózu prítomnú po približne 6 až 8 hodinách, čo je schopné okysliť rámec aj taco; to znamená, že agar bude úplne zožltnutý. Ale keď je glukóza vyčerpaná a vzhľadom na nemožnosť použitia laktózy a sacharózy, baktérie začnú metabolizmus proteínov.

Táto reakcia potrebuje kyslík, takže na povrchu dochádza k degradácii Peptonas (rám). Amíny produkovali alkleinizáciu kskľovacej vinutia žltej až červenej. Táto reakcia sa dokazuje po 18 až 24 hodinách inkubácie.

Interpretácia: K/A znamená alkalický rám a kyslý taco.

Na obrázku nachádzajúci sa na začiatku článku pozri obrázok trubice B.

-Fermentárne/sacharózové fermentujúce mikroorganizmy

Mikroorganizmy schopné fermentovať laktózu a sacharózu môžu samozrejme fermentovať glukózu. Po vyčerpaní minimálneho množstva glukózy prítomného v médiu začne formovaný pyruvát metabolizovať za vzniku kyselín cez aeróbny cyklus Krebs a v období 8 až 12 hodín bude celé médium žlté.

Ak sú baktérie schopné rozvinúť laktózu alebo sacharózu, kyseliny sa budú naďalej vyrábať a po 18 až 24 hodinách bude celá rúrka -isel a taco- pokračovať.

Je potrebné poznamenať, že použitie glukózy trvá.

Interpretácia: A/ A znamená kyslé skosenie/ kyslé pozadie. Môže predstavovať plyn alebo nie.

Na obrázku nájdeného na začiatku článku pozri obrázok trubice a.

Môže vám slúžiť: cytozín: štruktúra, funkcie, vlastnosti, syntéza

Výroba plynu

Niektoré mikroorganizmy sú schopné produkovať plyn počas fermentácie cukrov. Plyn je v trubici dokazovaný v dôsledku tlaku, ktorý vyvíja vo vnútri agaru. Tlak spôsobuje tvorbu bublín alebo posunutie agaru. Niekedy sa formovanie plynu môže zlomiť do životného prostredia.

Je dôležité, aby pri výseve média TSI sa defekt vykonáva čisto cez stred agaru, až kým nedosiahne dno. Ak sa defekt odchýli od steny trubice, môže spôsobiť falošné pozitíva pri výrobe plynu, pretože unikne chybne vytvorenému kanálu.

Produkcia plynu, ako aj reakcie, ktoré sa vyskytujú pri skosení agar, potrebujú kyslík, preto sa odporúča, aby trubica bola pokrytá bavlneným uzáverom, a ak sa použije baquelite veko, nemalo by sa úplne upraviť.

Produkcia plynu sa uvádza ako pozitívna (+) alebo negatívna (-).

Tiosulfát sodný a železný síran amónny (Výroba sulfidu vodíka)

Baktérie schopné produkovať sírovodík (bezfarebný plyn), berú síru tiosíranu sodného prítomného v médiu. Akonáhle sa H vytvorí₂S reaguje s železným síranom amónny, ktorý produkuje sulfid železa (jasne viditeľná čierna zrazenina).

H₂S sa uvádza ako pozitívny (+) alebo negatívny (-).

Na obrázku nachádzajúci sa na začiatku článku pozri obrázok trubice C.

Príprava

Vážiť 62,5 Gr dehydratovaného železného agaru napoly -Sugar.

Horúce na rozpustenie agaru. Variť. Distribuujte 4 ml média v 13/100 testovacích skúmavkách s bavlneným vekom.

Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Odstráňte z autoklávu a nechajte stojan naklonený. Malo by sa postarať o to, že základňa aj skosenie majú rovnakú vzdialenosť.

Uložte do chladničky s rozlohou 2-8 ° C. Pred siatom bakteriálny kmeň nechajte temperament.

Farba dehydratovaného média je ľahká béžová a pripravené médium je červené oranžové

Konečné pH pripraveného média je 7,3 ± 0,2.

Žiadosti

Test TSI sa široko používa na úrovni mikrobiologického laboratória. Tento test je nevyhnutný na usmernenie typu testu, ktorý sa musí použiť na dosiahnutie identifikácie rodu a druhu. Vaše dobré vykonanie a interpretácia môžu ušetriť materiál a prácu.

Ak je výsledkom TSI K/K K a test cytochrómu oxidázy poskytuje pozitívny. Ak je to negatívna oxidáza, je orientovaná na acinetobacter, stenotrophomonas atď.

Môže vám slúžiť: Totipotencialita: História, charakteristiky a dôležitosť

Na druhej strane, ak sa získa TSI A/A alebo K/A a test oxidázy cytochrómu je negatívny, znižujú sa dusičnany na dusitany, budeme si istí, že ide o mikroorganizmus patriaci do rodiny Enterobacteriace rodiny. V tomto prípade bude identifikačná cesta orientovaná na špecifické testy pre túto skupinu baktérií.

Na druhej strane, ak sa získa obraz K/A alebo A/A a test cytochrómu oxidázy je pozitívny, ďalšie testy sa zameriavajú na identifikáciu fermentujúcich kmeňov, ktoré nepatria do rodiny Enterobacteriaceae, ako napríklad: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio a Pasteurella.

TSI s sulfidom vodíka, negatívna oxidáza, bude usmerňovať nasledujúce žánre rodiny Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella alebo Salmonella.

TSI so zriedkavým alebo miernym sulfidom vodíka v alkalickom ráme s alkalickým pozadím a pozitívnou oxidázou bude usmerňovať testy na identifikáciu neoprávnenia gramne negatívnych bacilov producentov H H₂S ako Shewanella putrefaciens.

Nakoniec sa TSI môže použiť na skúmanie výroby sulfidu vodíka v gramne pozitívnych baciloch, najmä ak je podozrivý Erysipelothrix rhusiopathiae.

Vysiať

TSI médium musí byť naočkované čistými kolóniami, izolované v primárnych alebo selektívnych plodinách. Ak je kolónia odobratá selektívnymi prostriedkami, ktoré boli vysiate vzorkami so zmiešanou flórou, musí sa starostlivosť vziať iba z povrchu, pretože v dolnej časti kolónie môžu byť v tomto médiu inhibované životaschopné kmene.

Preto by sa rukoväť nikdy nemala ochladiť vo selektívnom médiu a potom by si vzala kolónia a naočkovala médium TSI.

Zasiatie sa uskutoční s priamou alebo ihlou. Punkcia sa uskutoční, pričom sa dá dávať pozor, aby je cez stred stredu, až kým nedosiahne dno, a potom sa osie. Nerobte dva vpichy.

Inkubujte pri 37 ° C pri aerobióze po dobu 18-24 hodín. Interpretovať v súčasnosti, ani predtým, ani po.

Obmedzenia

Test TSI by sa mal čítať medzi 18 až 24 hodinami inkubácie. Čítanie pred týmto časom môže dať falošnú fermentáciu A/A. Zatiaľ čo čítanie po tomto čase môže viesť k falošnému negatívnemu obrazu ne -fermentora v dôsledku konzumácie peptones, ktoré alkalizujú médium.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. Agar TSI (Agar Triple Sugar Iron). 2015. Dostupné na: BritánAlab.com
2. BD Laboratories. Trojitý agar železa v cukre (TSI Agar). 2003. K dispozícii na: BD.com