Nadácia, príprava a použitia tioglilátu, príprava a použitia

On Tiglycolát Je to obohatený prostriedok konzistencie tekutín. Je známy s skratkou FTM). Vytvoril ho Brewer a upravil v roku 1944 Vera, ktorý ho začlenil peptone kazeínu.

Toto médium má nízku oxidačnú potenciálu, takže sa neodporúča na vývoj prísnych aeróbnych baktérií, ale je ideálne na obnovenie voliteľných aeróbnych baktérií, prísnych a mikroaerofilných anaeróbnych baktérií.

Tioglycolát vývar bez indikátora. Vzorka vaginálnej sekrécie. Zdroj: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/4.0)]

Vysoký výkon pozorovaný s týmto médiom v izolácii a zotavovaní širokej škály mikroorganizmov ho prinútil akceptovať Pharmacopoeia Spojených štátov (USP), úradnou asociáciou poľnohospodárskych chemikov (AOAC) a Európskymi farmakopémi (EP).

Tieto organizácie to odporúčajú na testy farmaceutických výrobkov sterility a na obohatenie rôznych typov vzoriek.

Tioglykolát Cado sa skladá z kvasinkového extraktu, digreatického kazeínu, bezvodej dextrózy, L-istína, chloridu sodného, ​​tioglykolátu sodného, ​​odpočinku a vrchol v malom množstve v malom množstve.

Existuje niekoľko verzií tohto média, medzi nimi sú: Tioglycolát s indikátorom, tioglykolátový vývar bez indikátora, tioglykolát s indikátorom bohatstva s hemínom a vitamínom K_1, A tioglikolate vývar s kalciálnym uhličitanom.

Je potrebné poznamenať, že variant tioglykatového bujónu obohateného o hemín a vitamín K slúži na zlepšenie rastu náročných prísnych anaerób a variant tioglykolátového vývaru, ktorý obsahuje uhličitan vápenatý.

[TOC]

Základ

Tioglycolát bujón sa považuje za obohatenie, nie selektívne, pretože umožňuje vývoj najdôležitejších baktérií. Výživové požiadavky sú poskytované kvasinkovým extraktom, štiepeným pankreasom a glukózou.

Na druhej strane, toto médium napriek tomu, že je vývarom, obsahuje malé množstvo agaru; To spôsobuje potenciál s nízkym oxidom redukcie, pretože kyslíkové vstupné brzdy, takže kyslík klesá, keď sa prehlbuje vo vnútri trubice.

Z tohto dôvodu je toto médium ideálne na vývoj voliteľných aeróbnych baktérií, mikroaerofilov a prísnych anaeróbov, tieto posledné 2 bez inkubácie za týchto podmienok. Rovnaké médium reguluje množstvo kyslíka v prostredí, ktoré chýba na spodku trubice a v dostatočnom množstve na povrchu.

Môže vám slúžiť: fenylalanín: charakteristiky, funkcie, biosyntéza, jedlo

Podobne aj Tioglycolát a L-Cistine pôsobia ako redukčné látky, ktoré prispievajú k prevencii akumulácie látok škodlivých pre bakteriálny vývoj, ako je peroxid. Okrem toho tieto zlúčeniny obsahujú skupiny sulfidrilov (-SH-), ktoré neutralizujú inhibičné účinky orturných derivátov, arzénu, medzi inými ťažkými kovmi.

Na druhej strane, nepokoj je indikátorom redukcie oxidu. Táto látka je bezfarebná, keď je redukovaná a ružová, keď je oxidovaná. Existujú varianty tioglilátého vývaru s indikátorom a bez indikátora. Jeho použitie bude závisieť od typu preferencie vzorky a laboratória.

Medzitým chlorid sodný udržiava osmotickú rovnováhu tioglykate bujónu a použitie glukózy anhydry zabraňuje nadmernej vlhkosti v dehydratovanom prostredí.

Príprava

Tioglycolát vývar s indikátorom

Vážiť 29,75 g gr dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v 1 litri destilovanej vody. Zmes sa ponecháva približne 5 minút. Prineste zdroj tepla a často miešajte, až kým sa úplne nerozpustí.

Nalejte médium do testovacích skúmaviek a autoklavate pri 121 ° C počas 15 minút. Nechajte vychladnúť pred použitím. Skontrolujte, či sa na ochranu vložky v komerčnom dome. Niektorí odporúčajú úsporu pri izbovej teplote na tmavom mieste a iné v chladničke chránené pred svetlom.

Pripravené pH média je 7,1 ± 0,2.

Farba dehydratovaného média je ľahká a pripravená béžová je jasná jantárová s určitým opalescenciou.

Tioglycolát vývar s indikátorom hemínu a vitamínu K₁

Existujú komerčné médiá, ktoré už prinášajú heminu a vitamín K₁, Špeciálne pre anaeróbnu kultiváciu.

Ak nemáte obohatené médium pre anaeróby, je možné pripraviť základný tioglykolát. Za týmto účelom sa pridá 10 mg hydrochloridu hemínu a 1 mg vitamínu K₁ Pre každý liter média. Ak sa však do tioglykolátého vývaru pridáva krv alebo sérum, pridanie hemínu, vitamínu K nie je potrebné.

Môže vám slúžiť: Intra -špecifická konkurencia: Charakteristiky, typy a príklady

Tioglycolát vývar s uhličitanom vápenatého

Prichádza komerčne a pripravuje sa podľa pokynov vložky.

Tioglycolát vývar bez indikátora

To má rovnaké zloženie základného tioglycate, ale neobsahuje resazurine.

Vážiť 30 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody. Zvyšok prípravy sa rovná prípravu opísanej v tioglykate bujóni s indikátorom.

Využitie

Tioglycolát vývar je užitočný na obohatenie klinických vzoriek, najmä pre tie zo sterilných miest. Je tiež užitočný pre neklinické vzorky, ako sú kozmetika, lieky atď.

Na inokuláciu kvapalných vzoriek (ako je CSF, synoviálna tekutina, okrem iného), vzorky sa najprv odstredia a potom sa odoberú 2 kvapky sedimentu a umiestnia sa do tioglykolát. Inkubujte pri 35 ° C počas 24 hodín. Ak v tomto okamihu neexistuje rast (zákal), inkubuje sa až do maximálne 7 dní.

Ak sa vzorka odoberie s Hiopusom, kultivované médiá sa najskôr naočkujú do tanierov a nakoniec sa tampón zavedie do vývaru, časť, ktorá vyniká a trubica je zakrytá, ponechajte tampón vo vnútri vo vnútri. Inkuba pri 35 ° C počas 24 hodín, maximum 7 dní.

V prípade tuhých vzoriek musí byť homogenizovaný v roztoku fyziologického soľného roztoku (SSF) a potom naočkuje tioglykolát bujón s 2 kvapkami suspenzie.

Niekedy sa dá použiť ako transportný prostriedok pre vzorky, kde je podozrivá prítomnosť prísnych anaeróbov alebo ako záložný obohacovací vývar.

Variant tioglykolát s uhličitanom vápenatého sa používa na udržiavanie kontrol na dlhšiu dobu, pretože má schopnosť neutralizovať kyseliny produkované použitím glukózy; Tieto kyseliny sú toxické pre určité baktérie.

Rast v tioglykoláte bude pozorovaný v dôsledku zákalu životného prostredia. Odporúča sa vykonávať gramové zafarbenie a následne subjektívne v ne selektívnych a selektívnych médiách, v závislosti od typu vzorky a mikroorganizmov, ktorých sú podozrivé.

Qa

Pre reguláciu sterility sa odporúča inkubovať jeden alebo dva vývary bez naočkovania. Očakávaným výsledkom je priehľadný vývar, bez zmeny farby, hoci je normálne, aby sa na povrchu trubice pozorovala mierna ružová farba.

Môže vám slúžiť: Marine Meadow: Čo je, vlastnosti, flóra, fauna

Pre kontrolu kvality, medzi 10 - 100 UFC certifikovaných ovládacích prvkov, ako napríklad Stafylococcus aureus ATCC 6538, Mikrokokcus luteus ATCC 9341, Bacils subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bakteroidy vulgatus ATCC 8482.

Inkubujte pri 30-35 ° C pri aerobióze počas 24 hodín až do maximálne 3 dni, pretože tieto mikroorganizmy sú rýchly rast.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva dobrý vývoj, s výnimkou Mikrokokcus luteus a Bacils subtilis, kde môže byť mierny rozvoj.

Pre kontrolu kvality tioglykolátého vývaru obohateného o heminu a vitamín K₁, Môžu sa použiť kontrolné kmene Bakteroidy vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 a Fragilis bakteroidy ATCC 25285. Očakávaný výsledok je uspokojivý rast.

odporúčania

-Niekedy je zrejmé, že povrch tioglykátového vývaru s indikátorom sa stáva ružovým; Je to kvôli oxidácii životného prostredia. Ak ružová farba pokrýva 30% alebo viac z celkového vývaru, môže sa zohriať vo vodnom kúpeli 5 minút, znova sa ochladiť a použije sa.

Tým sa eliminuje absorbovaný kyslík a vráti médium do pôvodnej farby. Tento postup sa dá vykonať iba raz.

-Na zlepšenie rastu aeróbnych baktérií sa musí inkubovať s mierne lenivým vekom. Na tento účel je však lepšie použiť infúzny vývar mozgu alebo triptic sójový vývar pre dobrý vývoj prísnych aeróbov.

-Je potrebné vyhnúť sa zmrazeniu životného prostredia alebo prehriatiu, pretože obe podmienky poškodzujú médium.

-Priamy svetlo poškodzuje kultúrne médium, musí byť chránený pred svetlom.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. USP tioglycolát s indikátorom. 2015. K dispozícii na: labbritánia.com.
2. Quos SAS Laboratories. 2019. Tiglycolát. K dispozícii na: quios.com.co
3. Laboratóriá BD tekutiny TioglyCollate Médium (FTM). 2003. K dispozícii na: BD.com/Európa
4. BBL Médium pripravené v skúmavkách na kultiváciu anaeróbnych mikroorganizmov. Tioglycate médium. 2013. K dispozícii na: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.