Nadácia, príprava a použitie fosfátového pufra (PBS)

On fosfátový pufor, BPS alebo tlmivý roztok fosfátu Je to vyrovnávací pamäť a izotonické riešenie, ktorého funkciou je udržiavať pH a osmotický tlak najbližšie k prírodnému (fyziologickému) environmentálnemu prostrediu. Skratka PBS Priemerná fosfátová pufrovaná soľným roztokom.

PH a osmolarita sú dva veľmi dôležité aspekty, ktoré sa musia kontrolovať v určitých laboratórnych protokoloch. V prípade pH je nevyhnutné, aby bol kontrolovaný, najmä v biochemických reakciách, pretože tieto sa môžu meniť alebo nevykonať, ak sú reaktanty v nevhodnom pH.

Tlmivý roztok Salino PBS fosfát v dvoch rôznych pH. Zdroj: pixinio.com

Zatiaľ čo kontrola osmolarity je nevyhnutná najmä pri práci so živými bunkami, pretože plazmatické membrány buniek reagujú podľa koncentrácie rozpustených látok, v ktorých sa nachádzajú.

Ak sa bunky prenesú do hypertonického média, dehydratuje sa, pretože vodný gradient sa bude transportovať na stranu, kde je väčšia koncentrácia rozpustených látok. Ak sú naopak bunky umiestnené do hypotonického média, bunky budú absorbovať tekutinu až do ležania.

Preto sa používa pufer PBS pre laboratórne protokoly, ktoré vyžadujú údržbu buniek In vitro, Týmto spôsobom sa bunky nebudú poškodiť.

PBS sa skladá z kombinácie solí, ako je chlorid sodný, fosforečnan sodný, chlorid draselný a fosforečnan draselný. Zloženie PBS sa môže líšiť v závislosti od protokolu.

[TOC]

Základ

V zásade funkcia tlmivého roztoku fosfátu soľného roztoku je udržiavať konštantné fyziologické pH vedľa elektrolytickej koncentrácie podobnej ako v rámci organizmu.

V tomto prostredí sú bunky schopné zostať stabilné, pretože fyziologické podmienky simulujú čo najviac.

K pôvodnej formulácii PBS je možné pridať ďalšie zlúčeniny, ktoré sú potrebné, napríklad pridanie EDTA do tlmivého roztoku je užitočné pre premývanie červených krviniek v teste nekompatibility v kríži.

EDTA zabraňuje frakcii doplnku C1 prítomného v sére, rozdeliť sa a lisovať do červených krviniek, to znamená, že sa vyhnite falošným výsledkom nekompatibility. Okrem toho EDTA pomáha disociovať bunky.

Môže vám slúžiť: fylogenetický strom: typy a ich vlastnosti, príklady

Príprava

Množstvo solí, ktoré sa musia zvážiť na vypracovanie PBS fosforečnanu soľného roztoku, bude závisieť od množstva, ktoré sa vyžaduje na prípravu:

-Roztok roztoku pufra Salino ffosfát (PBS 10X)

Pre liter riešenia:

Vážiť:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCL,

11,5 g NA₂HPO₄,

2,0 g kh₂HPO₄

Prípravná technika

V kadičke umiestnite ťažké soli, pridajte dostatok vody (80%) a premiešajte na miešaciu dosku s magnetickou tyčou, kým sa soli nerozpustia.

Príprava PBS pomocou miešania železa s magnetickou tyčou . Zdroj: Používateľ: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filter na odstránenie odvratných častíc. Používajte filtre s 0,45 µm pórmi. AutoCLAVE sterilice a distribuuje asepticky v laminárnom prietoku v sklenených pohároch s vekom.

Do roztoku 10x (koncentrované) neupravuje pH. Úprava sa vykoná po zriedenej koncentrácii pufra PBS 1X (riedenie 1:10).

-Roztok soľného fosfátu (PBS 1X)

PBS 1X sa dá pripraviť priamo, vážiť zodpovedajúce množstvá každej soli alebo môže pripraviť riedenie materského roztoku (1:10) sterilnou destilovanou vodou.

-Priamo pripraviť liter fyziologického fosfátu PBS 1x ľútosť:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCL,

1,15 g z NA₂HPO₄,

0,20 g kh₂HPO₄

Prípravná technika

Postupujte podľa vysvetlenia v koncentrovanom roztoku. Následne sa musí pH upraviť. Aby ste to dosiahli, zmerajte pH a v závislosti od výsledku použite kyselinu (HCI) alebo bázu (NaOH) na zníženie alebo nahrávanie pH podľa potreby, až kým nebude 7.4.

Kyselina alebo základňa sa pridá pokles poklesu pri monitorovaní hodnoty pH roztoku pomocou metra pH. Filter, autoklávovanie sterilice a podľa potreby distribuuje asepticky v kónických skúmavkách alebo fľašiach.

-Na prípravu PBS 1X z 10 -násobného roztoku matky:

Urobte riedenie 1:10. Napríklad na prípravu 1 litra PBS 1X, zmerajte 100 ml materského roztoku a pridajte 700 ml sterilnej destilovanej vody. Upravte pH a dokončite množstvo vody, kým nedosiahne 1 000 ml.

Môže vám slúžiť: Smerový výber: Čo je, definícia, príklady

Pripravený nárazník PBS je bezfarebný a priehľadný.

Denné použitie PBS je možné uchovávať pri izbovej teplote a zvyšok v chladničke.

.Riešenia pre nastavenie pH

Hcl

Pre 100 ml HCl (kyselina hydrochlorovodíková) na 1 molárny.

Zmerajte 91 ml destilovanej vody a umiestnite ju do zrazeného nádoby s kapacitou 250 ml.

Zmerajte 8,62 ml koncentrovaného HCl a pomaly ho pridajte do kadičky obsahujúcej vodu (nikdy to nerobí hore nohami). Pri manipulácii s silnými kyselinami (vysoko korozívna látka) vykonajte príslušné opatrenia na biologickú bezpečnosť (vysoko korozívna látka).

Zmiešajte 5 minút pomocou miešanej dosky s magnetickou tyčou vo vnútri skla. Choďte na 100 ml gule a spláchnite pri 100 ml s H₂Alebo destilovaný.

Naoh

Pre 100 ml NaOH (hydroxid sodný) 10 molárnych.

Zmerajte 40 ml destilovanej vody a umiestnite ju do kadičky s kapacitou 250 ml. Zmerajte 40 gr nala a pridajte do vody. Zmiešajte pomocou miešanej dosky s magnetickou tyčou vo vnútri skla.

Choďte na 100 ml agroud loptu a spláchnite destilovanou vodou. Dodržiavajte štandardy biologickej bezpečnosti, pretože táto reakcia je exotermická (uvoľňuje energiu vo forme tepla).

Ak chcete pripraviť ďalšie množstvá roztoku so fyziologickým roztokom soľného roztoku, môžete si poradiť nasledujúcu tabuľku:

Zdroj: „Laboratórium vírusovej a ľudskej genomiky, lekárska škola UASLP“

Žiadosti

Používa sa hlavne v laboratóriách bunkovej biológie, imunológie, imunohistochémie, bakteriológie, virologie a výskumu.

Je ideálny na výrobu bunkového premytia odstredením (červené krvinky), bunkových monokapov premytých, v technikách spektroskopickej elipometrie, pri kvantifikácii bakteriálnych biofilmov, pri udržiavaní bunkových plodín pre vírusy, ako roztok premytia v technike nepriameho imunofluorescencia a techniky charakterizácie monoklonálnych protilátok.

Slúži tiež na transportné bunky alebo tkanivá, ako riedenie pre počítanie buniek, prípravu bunkových enzýmov (tripsín), ako riedidlo metódy vysušenia biomolekulov a prípravu ďalších činidiel.

Môže vám slúžiť: Heterotrof Výživa: Charakteristiky, fázy, typy, príklady

Na druhej strane Martin a spolupracovníci v roku 2006 ukázali, že PBS je užitočný v forenzných vedeckých laboratóriách, konkrétne pri regenerácii spermií z vaginálneho náter alebo pri regenerácii vaginálnych buniek penisových náterov. Týmto spôsobom sa dá zistiť, ak došlo k sexuálnemu vzťahu.

Obmedzenia

-Niektoré tlmivé roztoku PBS prinášajú ako konzervačné látky látka nazývaná azid sodný. Táto zlúčenina môže generovať výbušné látky, ak príde do kontaktu s olovom alebo meďou. Z tohto dôvodu sa musí pri vyradení tohto činidla na odtok osobitnú starostlivosť venovať osobitnej starostlivosti. Ak sa touto cestou vyhodí, musí sa pridať hojná voda, aby sa zriedila k maximum.

-Fosfátový pufer by sa nemal pridávať zinok, pretože vyzráža niektoré soli.

-Wangen a spolupracovníci v roku 2018 zistili, že použitie PBS nebolo vhodné na umývanie primárnej akútnej myeloidnej leukémie (AML) extrahovanej z periférnej krvi, pretože veľa buniek sa stratí lýzou, s veľkým poklesom proteínového materiálu.

Preto zistili, že primárne bunky AML by sa nemali premyť PBS po skladovaní v tekutom dusíku.

Odkazy

1. Cold j. (1993). Diagnostické techniky vo virológii. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Bunková kultúra. Zmena média. Katedra normálnej a patologickej histológie Univerzita v Seville. Dostupné v personáli.my.je
3. Príprava fosfátového pufrovaného soľného roztoku (PBS). (2008). Štandardné prevádzkové postupy (SOP) Vírusové a ľudské genomické laboratórne fakulty medicíny UASLP. K dispozícii na: Genomics.Uaslp.mx
4. „Fosfát so fyziologickým roztokom.„ Wikipedia, encyklopédia zadarmo. Apríl 2019, 19:36 UTC. Apríl 2019, 02:57 je.Wikipedia.orgán.
5. Pietrasanta L, von-bilderling C.Témy v molekulárnej biofyzike. K dispozícii na: Používatelia.Df.Uba.ar
6. Rediar. Manuálny. PBS+EDTA. K dispozícii na: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurBate K, Lucy D, Scrimger DG. Použitie fosfátového pufrovaného soľného roztoku na regeneráciu buniek a spermie z výterov. Sci Spravodlivosť. 2006; 46 (3): 179-84. K dispozícii v: NCBI.NLM.NIH.Vláda
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, a kol. Metóda konzervácie a fosfátový pufrovaný soľný rozmyčný soľný soľný roztok. Proteóm akútnej myeloidnej leukémie. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. K dispozícii v: NCBI.NLM.NIH.Vláda
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Teoretické a praktické základy histochémie. Vynikajúca rada pre vedecké vyšetrovania. Madrid. K dispozícii na: Knihy.Riadenie.co.ísť