Agar v krvi

Krvný prístup. S licenciou

Čo je krvný agar?

On Agar v krvi Je obohateným tuhým kultivačným médiom, ktoré sa používa na zotavenie a rast širokej škály mikroorganizmov z klinických alebo subjektívnych vzoriek.

Toto kultivačné médium je v podstate zložené z obohateného agaru a 5% ovčej krvi. Základňa agaru sa môže líšiť v závislosti od potrieb, ale medzi inými sa bude skladať hlavne z peptonov, aminokyselín, vitamínov, extraktu z mäsa, chloridu sodného, ​​agaru. Pokiaľ ide o krv, niekedy sa používa ľudská krv.

Zber krvi je možné pripraviť v laboratóriu alebo sa dá kúpiť už od spoločností, ktoré sa mu venujú. Príprava tohto média je veľmi chúlostivá, akákoľvek nedbanlivosť v jeho vypracovaní bude mať za následok kontaminovanú časť.

Preto sa musia prijať všetky možné bezpečnostné opatrenia a nakoniec vykonať kontrolu kvality inkubujúce 37 ° C 1 doštičku na 100, ktoré sú pripravené.

Základ

Staphylococcus aureus pestovaný v krvnom agar. Zdroj: Nathan číta na Flickr Nathan R. Na Twitteri, Wikimedia Commons

Blood Agar je obohatené, diferenciálne a neeelektívne médium. 

• Je to obohatené médium, pretože nesie ako hlavná prísada 5-10% krv na agarovej báze. Obe zlúčeniny obsahujú veľa živín, ktoré umožňujú rastúce baktérie v ňom.
• Tento rast sa vyskytuje bez obmedzenia, takže nie je selektívny. Ak sa však pridávajú zlúčeniny, ktoré bránia rastu niektorých mikroorganizmov a uprednostňuje rastúce, stáva sa selektívnym. Napríklad, ak sa pridajú určité typy antibiotík alebo antimykopov.
• Je to rozdielne, pretože umožňuje rozlíšiť 3 typy baktérií: beta-hemolytický, alfa-hemolitický a gama-hemolytický.
• Beta-hemolytické sú tie, ktoré majú schopnosť lisovať alebo dokončiť. Príklady ß-hemolytických baktérií sú Pyogenes Streptococcus a Streptococcus agalactiae.
• Alfa-hemolytické sú tie, ktoré vykonávajú čiastočnú hemolýzu, kde je hemoglobín oxidovaný na methemoglobín, ktorý vytvára zelenkavú sfarbenie okolo kolónií. Tento jav je známy ako hemolýza a alebo a-hemolýzy a baktérie sú klasifikované ako a-hemolytické. Príklad a-hemolytických baktérií je Pneumónia streptococcus a Streptokok skupina Viridáni.
• Gama-hemolytické alebo nehemolytické baktérie rastú nad agarom bez toho, aby v ňom vytvorili zmeny, účinok známy ako y-hemolýza a mikroorganizmus sú y-hemolitické. Príklad y-hemolytických baktérií: niektoré kmene z Streptokok skupiny D (Bovis streptococcus a enterococcus faecalis).

Žiadosti

• Toto kultivačné médium je jedným z najbežnejšie používaných v mikrobiologickom laboratóriu. Among the microorganisms capable of growing in this medium are: strict, optional, microaerophilic, anaerobic, gram -positive or gram -negative bacteria, rapid growth bacteria or slow growth or slow growth.
• Niektoré náročné alebo nepríjemné baktérie tiež rastú z výživového hľadiska, ako aj z húb a kvasiniek. Je užitočný pre subjektívne alebo reaktivačné kmene, ktoré sú metabolicky veľmi slabé.

Môže vám slúžiť: CyclopentanoperhydropenanTreno: Štruktúra a význam

Výber agentúry Krv a základná agentúra sa však bude líšiť v závislosti od mikroorganizmu, ktorý sa pravdepodobne zotaví, a od použitia, ktoré sa poskytne doštičky (kultivácia alebo antibigram).

Výber krvného typu

Krv môže byť z jahňacieho, králika, koňa alebo človeka.

Najviac odporúčaná jahňacia krv, s výnimkou niektorých výnimiek. Napríklad na izoláciu druhov Hemophilus, kde odporúčaná krv je kôň alebo králik, pretože jahňacie krv má enzýmy, ktoré inhibujú faktor V.

Najmenej odporúčané je človek, hoci je najpoužívanejší, možno preto, že je najjednoduchšie získať. 

Krv musí byť defibrinovaná, získaná bez akejkoľvek prísady a od zdravých zvierat. Na použitie ľudskej krvi je potrebné pamätať na niekoľko faktorov:

• Ak krv pochádza od jednotlivcov, ktorí utrpeli bakteriálne infekcie, budú mať konkrétne protilátky. Za týchto podmienok je pravdepodobné, že rast niektorých baktérií bude inhibovaný.
• Ak sa získa z krvnej banky, obsahuje citrát a je možné, že sa určité baktérie nevyvíjajú vo svojej prítomnosti.
• Ak krv pochádza od pacientov, ktorí užívajú antibiotiká, rast citlivých baktérií je možné inhibovať.
• A ak pochádza krv od diabetickej osoby, prebytok glukózy narúša správne vyvíjajúce sa hemolýzové vzorce.

Výber základnej sadzby

Základný agar používaný na prípravu agaru v krvi môže byť veľmi široký. Medzi nimi patrí: výživový agar, infúzia srdca Cerebro, Triptych Soybeans, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar atď.

Použitie krvného agaru podľa základného média používaného na prípravu

Výživový agar

Táto základňa je najmenej použitá, pretože budú rásť hlavne neohrozené baktérie, ako napríklad enterické bacily, Pseudomonas SP, Siež. aureus, bacillus sp, medzi inými. Neodporúča sa izolovať Streptokok.

Infúzia srdca cerebro (BHI)

Je to jedna z najpoužívanejších ako základňa, pretože má potrebné živiny pre rast väčšiny baktérií vrátane Streptococcus SP a ďalšie náročné baktérie. Aj keď nie je vhodné pozorovať vzorce hemolýzy.

S touto základňou sa používa krv jahniat.

Môžete tiež pripraviť varianty krvného agaru, kde sa pridávajú ďalšie zlúčeniny na izoláciu určitých mikroorganizmov. Napríklad infúzia cerebro srdca doplnená králičou krvou, cystínom a glukózou, slúži na izoláciu Francisella tularensis.

Zatiaľ čo s Cistinou Telurito je užitočné izolovať Corynebacterium difteriae. Môže sa použiť ľudská alebo jahňatá krv.

Môže vám slúžiť: biotický potenciál

Pri prvom bude beta-trimolýza vnímaná ako úzka halo, zatiaľ čo s druhým halo bude oveľa širší.

Táto základňa spolu s bacitracínom, kukuričným škrobom, krvou koní a ďalšími doplnkami obohatenia (ISovalex) sa používa na izoláciu pohlavia Hemophilus sp Zo vzoriek dýchacích ciest.

Ak sa pridá kombinácia chloramfenikol-gentamycínu alebo penicilín-tuffyínových antibiotík s krvou koní, slúži na izoláciu náročných patogénnych húb, a to aj s vyšším výkonom pre agar glukuraudovej glukózy Sabouraud. Najmä je užitočné pri izolácii Histoplazmatické kapsulatum.

Agar Triptyse

Táto základňa je najviac odporúčaná na lepšie pozorovanie vzoru hemolýzy a realizáciu diagnostických testov, ako sú opto -corner a bacitracínový dane. Je to klasický krvný agar, ktorý používa rutina.

S touto základňou môžete tiež pripraviť špeciálny krvný agar pre Corynebacterium difteriae, S telurito cistina a jahňac.

The combination of this agar blood, more kanamycin-vancomycin, is ideal for anaerobic growth, especially Bakteroidy sp.

Müeller Hinton Agar

Táto základňa doplnená krvou sa používa na vykonanie antibigramu náročných mikroorganizmov, ako napríklad Streptococcus SP. Je tiež užitočný pre izoláciu baktérií, ako napríklad Légia pneumophila.

Thayer Martin Agar

Toto médium je ideálne ako základ krvného agaru pri podozrení z rodu Neisseria, najmä Neisseria meningitidis, vzhľadom na to N. kvapavka V krvi agar nerastie. Slúži tiež na vykonanie testov náchylnosti Neisseria meningitidis.

Columbia Agar

Táto základňa je vynikajúca na siatie vzoriek žalúdočných biopsií pri hľadaní Helicobacter pylori.

Médium pripravuje 7% defibrinovanej jahňacieho krvi s antibiotikami (vankomycín, trimetoprim, amfotericín B a cefsulodín) na obmedzenie rastu iných typov baktérií, ktoré môžu byť prítomné.

Rovnaká základňa doplnená ľudskou alebo jahňacou krvou, na izolácii je užitočná kyselina nalidínín a kyselina kolistín Gardnerella vaginalis. Je tiež ideálne vyhodnotiť antimikrobiálnu citlivosť na antibiotiká rovnakého mikroorganizmu.

Okrem toho slúži na prípravu krvného agaru na anaeróbnu kultiváciu, pridanie aminoglykozidov a vankomycín. Táto základňa nám umožňuje správne pozorovať vzorce hemolýzy.

Agar Brucella

Toto médium používané ako základňa krvnej agentúry, spolu s pridaním vitamínu K, je ideálne na pestovanie anaeróbnych baktérií. V tomto prípade sa odporúča použitie jahnickej krvi.

Môže vám slúžiť: Dýchanie pokožky: Charakteristiky a príklady zvierat

Agar

Agar Campylobacter doplnený 5% RAM Blood a 5 antibiotík (cefalotín, amfotericín B, Trimetoprim Campylobacter jejuni Vo vzorkách výkalov.

Príprava

Každý komerčný dom prináša na zadnej strane obalov indikácie na prípravu liter kultúrneho média. Zodpovedajúce výpočty môžu byť vykonané na prípravu požadovaného množstva podľa vybraného základného agaru.

Zvážiť

Základný agar je dehydratovaný (v prachu), preto sa musí rozpustiť v destilovanej vode upravenej na pH 7,3.

Množstvo označené zvoleným základným agarom sa odváži a rozpustí v zodpovedajúcom množstve vody v fixole, potom sa zahrieva na mierne teplo a zmieša sa s rotačnými pohybmi až do celého prachu.

Sterilizovať

Po rozpustení sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 20 minút.

Agregovaný krv

Pri opustení autokláve sa fixola ochladí, až kým sa teplota pohybuje medzi 40 až 50 ° C. Je to teplota, ktorá podporuje ľudskú pokožku a zároveň agar ešte nespevnil.

Za týmto účelom je fixola dotknutá rukou a ak je teplo tolerovateľné, je ideálnou teplotou na pridanie zodpovedajúcej defibrinovanej krvi (50 ml na liter agaru). Zmiešať sa na homogenizáciu.

Priechod agregátu krvi je rozhodujúci, pretože ak sa to robí, keď je médium veľmi horúce, červené krvinky sa zlomia a médium nebude slúžiť na pozorovanie hemolýzy.

Ak sa pridá príliš chladno, vytvoria sa hrudky a povrch média nebude hladký na to, aby bol striatum správne vyrobený.

Nalejte do Petriho taniere

Podávame v sterilných Petriho tanier. V každej Petriho tanieri sa naleje približne 20 ml. Tento postup sa vykonáva v laminárnom prietokovom zvonku alebo blízko zapaľovača.

V čase podávania krvi na Petriho tanier. Ak k tomu dôjde, plameň Bunsenovho zapaľovača rýchlo prechádza na tanier, aby ste ich odstránili.

Doštičky sa nechajú tudifikovať a sú skladované v chladničke (2-8 ° C) invertované až do použitia. Pred použitím dosiek s krvným agarom musia byť temperovaní, aby mohli zasiať.

Pripravené dosky majú približné trvanie 1 týždňa.

Odkazy

1. Bayona, m. Mikrobiologické podmienky na kultiváciu Helicobacter pylori. Otáčať sa. Kapusta. Gastroenterol. 
2. Forbes, B ,, SAHM, D., Weissfeld, a. Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do.