Čokoládový agar

Yersinia pestis baktérie na čokoládovom agarovom plaku. Zdroj: Ministerstvo zdravotníctva a ľudských služieb, Wikimedia Commons

Čo je čokoládový agar?

On Čokoládový agar Je to prostriedok pevnej, obohatenej, selektívnej a neferenčnej kultúry. Používa sa hlavne na izoláciu náročných mikroorganizmov z hľadiska výživy, hoci v ňom môže rásť akýkoľvek typ baktérií.

Preto sa jeho užitočnosť zvyšuje najmä vo vzorkách vzoriek, ktoré sú normálne sterilné, napríklad CSF a kĺbová kvapalina. Aj keď je tiež zahrnutý do média vybraného na výsadbu polymikrobiálnych vzoriek, ale v týchto prípadoch je potrebné pridať antibiotiká, ktoré inhibujú sprievodnú flóru.

Toto médium má charakteristickú hnedú farbu veľmi podobnú čokoláde, odtiaľ jej názov. Príprava je veľmi podobná prípraveniu krvného agaru, iba v tomto prípade sa musí krv zahriať, aby sa červené krvinky prelomili.

Jeho príprava, podobne ako krvný agar, je veľmi chúlostivá, pretože je ľahko kontamminovateľná. Mnoho laboratórií preto uprednostňuje získanie tohto média už pripraveného komerčnými domami, ktoré zaručujú ich kvalitu.

Základ

Skladá sa z agarovej bázy -bohatej agarovej krvi. Hemolýza červených krviniek poskytuje stredný faktor X (hemina) a faktor V (NAD), ktorý je potrebný na rast niektorých mikroorganizmov, ako je napríklad pohlavie Hemophilus. Je tiež veľmi užitočné izolovať Neisserias SP.

Rovnako ako krvný agar, aj rôzne médiá sa môžu použiť ako základná agentúra, v závislosti od potreby. Medzi použité médiá patria infúzne srdiečko a sójové bôby, hoci najviac odporúčané sú Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar a Thayer Martin Agar.

Môže vám slúžiť: jednoduché šírenie: proces a príklady

Niektoré varianty čokoládového agaru zahŕňajú obohatený doplnok, komerčne dostupný, nazývaný Isovalex alebo Polyvitex.

Tieto doplnky obsahujú vitamín B₁₂, L-glutamín, adenín, guanín hydrochlorid, kyselina p-aminobenzoová, nikotínamid adenín dinukleotid (NAD), tiamín pyrofosfát, dusičnan žuva.

Je dôležité zdôrazniť, že čokoládový agar je obohatený viac ako krvný agar, ale neumožňuje hemolýzové vzorce.

Žiadosti

• Čokoládový agar s agarom Columbia: Obsahuje pankreatický kazeín a srdce, trávený mäsový peptik, chlorid sodný, agar, kvasinkový extrakt a kukuričný škrob. Okrem toho je bohatý na vitamíny, minerály a esenciálne aminokyseliny. Táto základňa s zahrievanou krvou je ideálna na izoláciu baktérií žánru Neisseria. Na druhej strane, ak sa pridá doplnok Brucella, Vyššie uvedený mikroorganizmus môže byť izolovaný. Výsledky sa zlepšujú pomocou krvi koní.
• Čokoládový agar s agarom GC (pre gonokocci): Obsahuje peptones, kukuričný škrob, monobázové a dibasické pufry, chlorid sodný a agar. Väčšina komerčne pripravených prezentácií čokolády prichádza s touto základňou a neobsahuje zahrievanú krv, ale syntetickú zmes hemíny a chemický doplnok rastových faktorov, vitamínov, minerálov, aminokyselín, faktora V a glukózy.
• Čokoládový agar pripravený s agarom Müeller Hinton: Používa sa na vykonanie testu antimikrobiálnej citlivosti náročných mikroorganizmov, ako napríklad Pneumónia streptococcus, Použitie 5% vyhrievanej krvi RAM. Slúži tiež na primárnu izoláciu Nečestné práce a Hemophilus, ale v konkrétnom prípade izolácie Hemophilus Uprednostňuje sa použitie krvi koní, aby ste boli bohatí na faktor X a V. Na druhej strane, ak vzorka, ktorá sa má vysadiť, pochádza z oblasti, ktorá nie je v priebehu, odporúča sa pridanie antibiotík na inhibíciu normálnej flóry oblasti oblasti. Príklad: Pre vzorky dýchacích ciest, kde je podozrenie na prítomnosť rodových baktérií Hemophilus bacitracín sa používa na inhibíciu rastu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus a Nečestné práce saprofyty. 
• Čokoládový agar s Thayerom Martinom agarom: Je to špeciálne izolovať Neisseria gonorrhoeae. Musí obsahovať antibiotiká, aby inhibovali sprievodnú flóru. Používa sa jahňatá krv.

Môže vám slúžiť: Flora a fauna zacatecas: Reprezentatívne druhy

Príprava

Musia sa vidieť indikácie prípravy základného agaru, ktorý sa použije. Všeobecne opisujú, koľko by ste mali zvážiť, aby ste pripravili liter kultúrneho média. V laboratóriu môžete pripraviť potrebné presné množstvo, ktoré môže byť viac alebo menej ako liter.

Výpočty

Na výpočet toho, koľko musíte zvážiť, je pravidlo, aby ste pripravili požadovaný objem. Príklad:

Ak je pre 1 liter potrebné zvážiť 40 GR a laboratórium vyžaduje 800 ml, hovorí sa:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

Vzorec bude nasledujúci:

X = 32 gr (množstvo napriek 800 ml).

Zvážiť

Potrebné množstvo sa odváži a umiestni sa do feloly s vodou.

Zahrieva sa na mierne teplo a je jemne zmiešané s rotačnými pohybmi, až kým sa dehydratované médium úplne nerozpustí, čo ho necháva vrie 1 minútu.

Sterilizovať

Fixola sa zavedie do autoklávu, aby ste sa sterilizovali médium pri 121 ° C počas 20 minút.

Agregovaný krv

Pri opustení autoklávu sa nechá stáť, kým sa teplota média nebude približne medzi 56 a 70 ° C, aby sa vložila krv a miešala, až kým médium nezmení hnedú farbu.

Ak sa doplnky pridajú, je čas na to. Následne premiešajte a podávajte 20 ml na každú sterilnú Petriho tanier.

Celý postup sa musí vykonávať v laminárnom prietokovom zvonku alebo okolo zapaľovača Bunsen. Nechajte stáť, kým sa stuhnú a ušetria obráteným spôsobom v chladničke.

Ďalším spôsobom, ako pripraviť čokoládový agar bez použitia krvi

Základné médium je pripravené tak, ako je opísané vyššie, dehydratovaný hemoglobín získaný komerčne a sterilizovaný v autokláve sa rozpustí v autokláve.

Môže vám slúžiť: hemoolinfa

Obe roztoky sa nechajú ochladiť pri 50 ° C, doplnok je spojený a pridaný. Zmiešajte v aseptických podmienkach a potom podávajte v petri sterilných doskách.

Qa

Je dôležité, aby sa krv umiestnila na indikovanú teplotu, pretože je ideálny na potlačenie červených krviniek a súčasne udržiavať faktor V, ktorý je výrazný.

Nemali by to byť bubliny na povrchu agaru. Z každej šarže 100 platní, musí sa v kachle pri 37 ° C inkubovať pri 37 ° C počas 24 hodín, aby sa skontrolovala jeho sterilita.

Pre lepšie výsledky sa musí čokoládový agar použiť krátko po príprave.

V laboratóriu by sa mali vykonávať bakteriálne kmene, aby sa vyhodnotila účinnosť životného prostredia čerstvo pripravené na rast hlavných náročných mikroorganizmov klinického významu.

Odkazy

1. Garcia, P., Steny, f., Fernández del Barrio, m. Praktická klinická mikrobiológia. Univerzita. Publikácie UCA.
2. Čokoládový agar. Získaný z.Wikipedia.orgán.