Agar m.R.Čo je, nadácia, príprava, používa

On Agar m.R.Siež. Je to selektívne tuhé kultivačné médium, ktoré sa používa na izoláciu a počítanie baktérií kyseliny mliečnej, najmä rodu Lactobacillus. Tento agar bol vytvorený v roku 1960 Man, Rogosa a Sharpe, ktorý nesie médium rovnaké meno, ale kvôli jeho zložitosti sa často používa skratka M často.R.Siež.

Je zložený z peptónového proteínu, extraktu z mäsa, kvasinkového extraktu, glukózy, sorbitánu monoleato, fosforečnanu dipbotasného, ​​octanu sodného, ​​citranu amónneho, síranu horečnatého, sulfátu mangánu a agaru a agar.

Agar Han a Sharpe Man (m.R.Siež.) vysiate pomocou Lactobacillus sp. Zdroj: Darovaná fotografia pre tento článok autorov: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografia urobená počas výskumu s názvom: Vyhodnotenie baktérií kyseliny mliečnej a bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a detských výkaloch.

Toto zloženie umožňuje dobrý vývoj baktérií kyseliny mliečnej z klinických vzoriek, ako sú výkaly, vaginálna sekrécia, perorálne vzorky a materské mlieko, ako aj mliečne výrobky a mäsové potraviny.

V klinických laboratóriách sa bežne nepoužíva, pretože baktérie kyseliny mliečnej sa zriedka zapoja do patologických procesov. Avšak v oblasti potravinovej mikrobiológie je používanie agar M častejšie.R.Siež.

Na druhej strane, toto médium používajú niektoré výskumné strediská, ktorých cieľom je štúdium baktérií kyseliny mliečnej kyseliny.

Základ

Muž, Rogosa a Sharpe majú pomerne zložité zloženie. Roztrhaním funkcie, ktorú každá z jej komponentov plní, môžete vysvetliť jej základ.

Peptónový proteín, extrakt z mäsa, kvasinkový extrakt a glukóza sú živiny, ktoré poskytujú zdroj uhlíka, dusíka, vitamínov a minerálov potrebné na bakteriálny rast. Okrem toho je glukóza univerzálny zdroj energie používaný vo väčšine kultivačných médií.

Na druhej strane, na zvýšenie rastu baktérií kyseliny mliečnej, je v metabolizme laktobacilu a príbuzných baktérií potrebná prítomnosť nevyhnutných kofaktorov (katiónov); Tieto zlúčeniny sú solí sodíka, horčík a mangány.

Môže vám slúžiť: opssonizácia: čo je, typy, funkcie, molekuly

Podobne, monoleoát sorbitánu alebo polysorbátu 80 je dôležitým zdrojom mastných kyselín, keď sa absorbuje ako živiny.

Okrem toho pôsobenie sorbitan monoleoátu a citrát amónneho inhibujúceho vývoja sprievodnej flóry, najmä gramne negatívnych baktérií, poskytujúce selektívny charakter tohto agaru.

Nakoniec, agar -agar je ten, ktorý poskytuje solídne konzistentnosť životnému prostrediu.

Existujú aj ďalšie varianty agaru Rogosa Sharpe; Jedným z nich je doplnok cysteínom (M.R.Siež.c), veľmi užitočný na izoláciu bifidobaktérií, okrem iných mikroorganizmov. Na druhej strane je MRS doplnená neomycínom, paromomycínom, buxickou kyselinou a chloridom lítium, špeciálne pre selektívny počet bifidobaktérií v mliečnych výrobkoch.

Príprava

Vážiť 68,25 gramov dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody. Nechajte stáť 5 minút. Rozpustenie v celom rozsahu vedie k tomu, že zdroj tepla často mávne a uvarím sa 1 až 2 minúty. Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Pri odchode z autoklávu nechajte pár minút stáť a distribuujte stále horúce na Petriho sterilných tanieroch.

Nechajte silne a investovať doštičky, objednať si do krvných doštičiek a ušetrite v chladničke, kým sa nepoužijete. Pred použitím taniere nechajte doštičku prijať izbovú teplotu.

Médiové pH musí byť 6,4 ± 0,2. Niektoré komerčné domy odporúčajú pH medzi 5,5 až 5,9.

Dehydrované médium je béžové a pripravené je tmavé jantárové.

Dehydrované médium aj pripravené platne sa musia skladovať od 2 do 8 ° C.

Žiadosti

Agar m dosky.R.Siež. Môžu byť zasiate na povrchu (vyčerpanie alebo s drigalski špachtľou). Môže byť tiež zasiate hĺbkou. Doštičky musia byť inkubované pri 37 ° C v mikroaerofílii (4% OR₂ a 5-10% CO₂) 24 až 72 hodín.

Môže vám slúžiť: Amensalizmus: charakteristiky, príklady, rozdiely s večerom

Metóda vysiate je vybraná podľa účelu vykonaného (izolácia alebo počet).

Charakteristiky kolónií

Predpokladané kolónie Lactobacillus pestovania belatej farby a v tomto agari majú mukoidný alebo krémový vzhľad. Následne musia identifikovať.

Izolácia baktérií kyseliny mliečnej

Na tento účel sa používa povrchové zasiatie. Vzorky, ktoré sa majú žalovať, vyžadujú predchádzajúci postup. 

V prípade vzoriek materského mlieka sa odporúča odstrediť 1 ml vzorky pri 14.000 RMP po dobu 10 minút, aby sa odstránila vrstva tuku. 900 ul sa vyhodí a v zostávajúcich 100 ul je sediment suspendovaný a povrch agaru m.R.Siež. Potom musíte rovnomerne distribuovať drigalski špachtle.

V prípade vzoriek stolice sa odváži jeden (1) gram výkalov a homogenizuje sa 9 ml sterilnej peponovanej vody 0,1%, čo zodpovedá riedeniu 1/10. Potom sa vykonávajú sériové riedenia, až do konečného riedenia 10^-4.

Nakoniec sa berie 100 ul riedenia 10^-2, 10^-3 a 10^-4 A každé riedenie sa zasiela na pani Agar a rovnomerne distribuuje drigalski špachtle.

Počítanie baktérií kyseliny mliečnej

V tomto prípade sa zasiatie vykonáva hĺbkou.

Pre vzorky materského mlieka sa odoberie 1 ml a umiestni sa do sterilnej kužeľovej plastovej trubice. Agar MRS sa pridá pri približnej teplote 40 ° C do konečného objemu 25 ml, čím sa získa homogénna zmes. Následne sa naleje do sterilného Petriho.

Pre vzorky stolice sa vykonávajú riedenia, ako je opísané vyššie. 1 ml každého riedenia sa odoberie a plastové trubice sterilné. Zvláštne agar MRS sa pridáva do objemu 25 ml.

Môže vám slúžiť: Vodné biomy: Charakteristiky, typy, flóra, fauna, príklady

Zmes každého riedenia sa rovnomerne naleje na petri sterilné platne. Nakoniec nechajte stáť až do polymerizácie.

Kolónie sa počítajú s človekom a agarom Sharpe (m.R.Siež.). Zdroj: Darovaná fotografia pre tento článok. Autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografia urobená počas výskumu s názvom: Vyhodnotenie baktérií kyseliny mliečnej a bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a detských výkaloch.

Na úrovni výskumu

Každý deň sa štúdium baktérií kyseliny mliečnej stáva väčším záujmom; Najmä vedci sa snažia poznať nové kmene a ich potenciál ako iniciatíva fermenty pre štandardizáciu pri výrobe mliečnych výrobkov, okrem iného.

V tomto zmysle Alvarado a kol. (2007) použitý agar m.R.Siež. Vykonať štúdiu, v ktorej izolovali, identifikovali a charakterizovali baktérie kyseliny mliečnej prítomné v ahumado andskom remeselnom syre.

V syre zistili, že prítomnosť baktérií žánrov laktococcus a lactobacillus a dospeli k záveru, že zmesi izolovaných kmeňov sú primerané ako iniciujúce kmene pri výrobe syrov z pasterizovaného mliečneho mlieka.

Na druhej strane, sánchez y cols. (2017) použitý agar m.R.Siež. Na skúmanie prítomnosti baktérií kyseliny mliečnej v tráviacom trakte Piglet, aby sa ich použili ako natívne probiotiká, ktoré zvyšujú produktivitu zdravých ošípaných.

S týmto médiom sa im podarilo izolovať štyri druhy: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae a Pediococcus pentosaceus.

Podobne aj Báez a kol. (2019) použil starnutie m.R.Siež. Na vyhodnotenie baktérií kyseliny mliečnej (BAL) a bifidobaktérií s probiotickým potenciálom v materskom mlieku a výkaloch dojčiat.

Podarilo sa im izolovať 11 BAL a 3 Bifidobacteria sp V materskom mlieku a 8 BAL a 2 Bifidobacteria sp. Výkaly. Všetky splnili určité parametre, ktoré ich akreditujú ako baktérie s probiotickou aktivitou.

Autori dospeli k záveru, že materské mlieko aj výkaly dojčiacich detí slúžia výlučne ako prírodné zdroje probiotických baktérií.

Qa

Na vyhodnotenie kvality agaru m.R.Siež. Ovládacie prvky ako:

Fermentum Lactobacillus ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli a Bacillus cereus.

Očakávané výsledky sú uspokojivý rast pre prvých 6 baktérií, zatiaľ čo A. coli a Cereus Bacillus Musí byť inhibovaný v celom rozsahu.

Odkazy

1. Británske laboratórium. M.R.Agar. Dostupné na: BritánAlab.com