Agar Lia (Iron Lysina) Čo je, nadácia, príprava, používa

On Agarová liata (Iron Lysina) Je to biochemický test použitý na identifikáciu baktérií rodiny Enterobacteriaceae rodiny. Toto médium vytvorili Edwards a Fife, založené na Falkowovom receptúre.

Tento test bol pôvodne vývarom obsahujúcim peptóny, kvasinkový extrakt, glukózu, L-lisín, bromokres a destilovanú vodu Purpurová. Edwards a Fife pridali agar-Adagar, železito citratus amónneho a tiosíranu sodného.

Pozitívny a negatívny test lyzínu dekarboxylácie. Zdroj: Foto a schéma, ktorú vlastní autor MSC. Marielsa Gil

Test v podstate pozostáva z demonštrácie prítomnosti enzýmu rudboxylázy, ktorá je schopná reagovať s karboxylovou skupinou aminokyseliny L-l-l-l-l-lisin. Deaminácia aminokyseliny sa môže vyskytnúť aj v dôsledku prítomnosti srdca enzýmu lyzínu.

Zloženie média navyše umožňuje demonštrovať schopnosť niektorých bakteriálnych rodov produkovať sulfid vodíka. Nakoniec je tiež možné pozorovať výrobu alebo nie plynu v strede.

Základ

Pepton a kvasinkový extrakt

Ako väčšina plodinových médií, železný agar Lisine obsahuje komponenty, ktoré poskytujú potrebný zdroj živín pre bakteriálny rast rastu. Tieto komponenty sú reprezentované peptónmi a kvasinkovým extraktom.

Glukóza

Podobne tento agar obsahuje ako fermentovateľné uhľohydráty glukóza. Je známe, že všetky baktérie rodiny Enterobacteriaceae fermentujú glukózu.

Tento krok je rozhodujúci, pretože bude mať na starosti okyslenie prostredia, nevyhnutný stav pre enzým lyzínu dekarboxylázu - ak je prítomný - pôsobí na jeho substráte.

V niektorých bakteriálnych žánroch je možné pozorovať produkciu plynu v dôsledku fermentácie glukózy.

Plyn sa dokazuje, keď sa posunutie agaru OCC.

Môže vám slúžiť: biomateriály

L-Lisina

Akonáhle je lyzín dekarboxylovaný, vytvorí sa diamín (kadaverín) a karbonický anhydrid.

Diskalovanie sa vyskytuje v prítomnosti pyridoxálneho fosfátového koenzýmu. Táto reakcia je nezvratná.

Indikátor pH (bromokresol fialová)

Všetky zmeny pH sa vyskytli v strede rôznymi reakciami, sú detegované indikátorom pH pH bromokresolu.

V tomto zmysle, keď dôjde k okysleniu, médium je žlté a keď dôjde k alkalizácii, médium sa vráti do pôvodnej fialovej alebo fialovej farby.

Keď dochádza k srdcovej látky Lysine v dôsledku prítomnosti enzýmu lyzínu, na povrchu sa tvorí červenkastá farba, typická v proteuse, prozreteľnosti a niektorých druhoch Morganella.

Je to spôsobené skutočnosťou, že počas procesu disaminácie sa tvorí kyselina alfa-zokónová, ktorá reaguje s citrátom amónneho v prítomnosti kyslíka, ktorý spôsobuje vyššie uvedenú farbu.

Citrát železitého amónneho a tiosíranu sodného

Na druhej strane, baktérie, ktoré produkujú sulfid vodíka₂Siež.

Baktérie, ktoré majú znížený tiosíranový enzým, majú schopnosť pôsobiť znížením súčasného tiosíranu sodného, ​​tvorbou sulfit a sulfidu vodíka (H (H (H₂S).

Posledne menovaný je bezfarebný plyn, ale pri reagovaní so železnou soľou tvoria kovový sulfid, čo je nerozpustná zlúčenina (viditeľná čierna zrazenina).

Avšak výcviková kapacita H₂S s týmto médiom nie je príliš spoľahlivý, pretože niektoré negatívne baktérie dekarboxylázy schopné produkovať H₂S nebude tvoriť čiernu zrazeninu, pretože kyslosť média interferuje. Preto sa odporúča potvrdzovať inými prostriedkami obsahujúcimi železo.

Môže vám slúžiť: neuróny

Interpretácia testu

Rekoboxylácia lyzínu

Truby by sa mali prečítať po dokončení 24 hodín inkubácie, inak existuje riziko nedorozumenia reakcie a hlásenia falošných negatívov.

Pamätajte, že prvou reakciou, ktorá sa vyskytne, bude fermentácia glukózy, preto všetky trubice po 10 až 12 hodinách zažltnú.

Ak na konci času inkubácie (24 hodín) je žlté pozadie s fialovou alebo fialovou plochou, reakcia je negatívna. Fialová farba povrchu zodpovedá alkalizácii média použitím peptones.

Pozitívnou reakciou je, že tam, kde sú spodná a povrch trubice úplne fialová, to znamená, že sa vracia k pôvodnej farbe.

Kto teda určuje pozitivitu testu, je základňou alebo spodkom média. Ak máte pochybnosti o farbe, dá sa porovnávať s neotročenou trubicou Lia.

Deaminácia lyzínu

Trubica, ktorá ukazuje srdcový zlom lyzínu, bude mať červenkastý povrch granátu a žlté pozadie (kyselinu) alebo celú červenkastú trubicu granátu.

Táto reakcia sa interpretuje ako negatív pre dekarboxyláciu lyzínu, ale pozitívna na deamináciu lyziny.

Táto reakcia je definovaná a interpretovaná v skosení.

Produkcia sulfidu vodíka (H₂S)

Pozitívna reakcia sa pozoruje výskytom čiernej zrazeniny v celom stredu alebo jej časti. Všeobecne medzi limitom rámu a základne.

Ak dôjde k zrazeniu v trubici, nebude vidieť ďalšie reakcie, ktoré sa vyskytujú v strede.

Registrácia výsledkov

Pri interpretácii testu sa výsledky zaznamenávajú nasledovne:

Môže vám slúžiť: Miller a Urey Experiment

Najprv sa načíta rámec, potom pozadie alebo taco, potom výroba H₂S a nakoniec výroba plynu.

Príklad: K/A + (-). To znamená:

• K: Alkalický rám (fialová farba)
• Odpoveď: Kyslé pozadie (žlté), to znamená negatívna dekarboxylačná reakcia a negatívny srdcový zlom.
• +: Výroba sulfidu vodíka
• (-): Bez plynu.

Príprava

Vážiť 35 g ležiaceho stredne dehydratovaného železa a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody.

Horúce, až kým agar úplne nerozpustí, aby sa na chvíľu svahla. Distribuujte 4 ml média v 13/100 testovacích skúmavkách s bavlneným vekom.

Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Odstráňte z autoklávu a nechajte stojan naklonený, takže existuje hlboká základňa a krátke skosenie.

Uložte do chladničky s rozlohou 2-8 ° C. Pred siatom bakteriálny kmeň nechajte temperament.

Farba dehydratovaného média je béžová a pripravená červenkastá fialová médium.

Konečné pH pripraveného média je 6,7 ± 0.2

Médium je žlté, pričom pH sa rovná alebo menším ako 5,2 a je fialové pri pH 6,5 hore.

Žiadosti

Tento test sa spolu s ďalšími biochemickými testami používa na identifikáciu bacilov rodiny Enterobacteriaceae rodiny.

Médium je zasiate priamou alebo ihlou, jedna alebo dve punkcie sa vyrábajú na spodok trubice a potom povrch média v kľuka.

Je to inkuba 24 hodín pri 35-37 ° C pri aerobióze. Ak je to potrebné, ponecháva sa inkubáciou na 24 hodín viac.

Je užitočný hlavne na rozlíšenie negatívnych druhov citrobaktérov od Salmonellas SP.

Odkazy

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. PAN -AMERICAN. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.