Držanie toho, čo je, nadácia, príprava, používa

On Agar alebo stredné endo je pevná, diferenciálna kultúra a s určitým stupňom selektivity. Pôvodný vzorec bol vytvorený spoločnosťou Endo v roku 1904 na rozlíšenie fermentárnych baktérií laktózy, ktorá nie je preferovaná. Počiatočný Salmonella Typhi, Neskôr sa však cieľ média obrátil na hľadanie koliformov.

Začiatok endo agaru zostal, ale jeho formulácia v priebehu rokov utrpela nespočetné množstvo zmien. V súčasnosti je médium zložené zo živočíšneho tkanivového peptického, laktózy, vodíkového nafúknutia, síranu sodného, ​​základného fuchsínu a agaru a agaru.

Hlavné použitie média bolo spojené s izoláciou a diferenciáciou gramne negatívnych bacilov patriacich do rodiny Enterobacteriaceae a ďalšie blízke rodiny.

Po dlhú dobu sa použil pri detekcii koliformných vo vzorkách vody, mliečnych výrobkov a potravinách, ale dnes používanie tohto média vysídlili iné podobné funkcie. Niektoré mikrobiologické laboratóriá však používajú tento agar na izoláciu z klinických vzoriek.

Základ

Endo agar obsahuje peptony, ktoré slúžia ako zdroj aminokyselín, dusíka, uhlíka a energie, ktoré sú potrebné na rast málo náročných mikroorganizmov.

Na druhej strane, mierne selektívny charakter agaru je poskytovaný agregátom síranu sodného a základného fuchsínu; Obidve zložky čiastočne alebo úplne inhibujú vývoj najpozitívnejších gramových baktérií.

Diferenciálny charakter je daný prítomnosťou fermentovateľného uhľohydrátu, ktorý je v tomto prípade laktóza a základný fuchsin, ktorý tiež slúži ako ukazovateľ pH.

Gram negatívne baktérie, ktoré rastú v tomto agari a sú schopné fermentovať laktózu, budú tvoriť silné ružové kolónie; byť patognomonický Escherichia coli Tvorba tmavo červených kolónií so zelenkavým kovovým leskom. Je to kvôli vysokej produkcii kyseliny z uhľohydrátových fermentácií.

Je potrebné poznamenať, že médium nachádzajúce sa okolo kolónií tiež zmení silnú ružovú farbu. Zatiaľ čo gram negatívne bacily nefermentujúce laktózu tvoria svetloružové kolónie podobné stredne alebo bezfarebnej.

Fosforečnanový fosforet v vodíku vyvažuje pH média a agar je zložka, ktorá poskytuje pevnú konzistenciu.

Príprava

Agar

Vážiť 41,5 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v 1 litri destilovanej vody. Zahrejte zmes za stáleho miešania, až kým nedôjde k celkovému rozpusteniu média. Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C, 15 lb tlaku, počas 15 minút.

Po odstránení z autoklávu nechajte ochladiť na približnú teplotu 45-50 ° C, pred podávaním pretrepte zmes, aby ste homogenizovali. Nalejte 20 ml na Petri sterilné platne.

Nechajte doštičku stuhnúť, investovať a uložiť do plaku alebo zábal s tmavým papierom pred uložením v chladničke. Je veľmi dôležité chrániť pripravené prostredie pred priamym svetlom. Odporúčaná prax je pripraviť presnú sumu, ktorá sa má potrebovať.

Ak sú uložené v chladničke, doštičky by sa mali pred použitím povoliť.

Médiové pH musí byť medzi 7,2 až 7,6 a farba pripraveného média je svetlo ružová farba.

Agent M-Endo

Existuje ďalšia verzia endo agar (M-Endo), ktorá sleduje McCarthy, Delaney a Grasso, ktorá obsahuje viac zlúčenín a líši sa vo forme prípravy.

Tento variant obsahuje: laktózu, triptózu, trávený kazeín enzymatický, enzým s tkanivovým tkanivom, chlorid sodný, dibázický fosforečnan draselný, sodný sulfit sodný, kvasinkový extrakt, monobazický fosforečnan draselný, základný fuchsín sodný, laurílový sulfát sodný a agar.

V tomto prípade je 51 GR dehydratovaného média vážiť a suspenduje v 1 litri destilovanej vody obsahujúcej 20 ml etanolu.

Mierne zahrievajte, zatiaľ čo miešajte, aby ste médium úplne rozpustili. Nemalo by sa prehrievať a buď sterizovať v autokláve. Akonáhle je zmes homogénna, podávajte v petri sterilných platniach a nechajte stuhnúť.

Využitie

V niektorých krajinách sa stále používa na spočítanie celkových a fekálnych koliformov vo vzorkách vody a potravín, najmä prítomnosť Escherichia coli Ako hlavný ukazovateľ kontaminácie fekálnej.

Agar M-Endo odporúča American Public Health Association (APHA) na monitorovanie a kontrolu programov dezinfekcie a liečby odpadovej vody, ako aj pri hodnotení kvality pitnej vody.

Najpoužívanejšou metódou je membránová filtrácia, predchádzajúce obohatenie vzorky laurylsulfátovým vývarom počas 2 až 4 hodín.

Môže sa tiež použiť ako náhrada za agar EMP v mikrobiologickej analýze potravín a vody najpravdepodobnejšou technikou čísla (NMP), konkrétne v úplnej potvrdzovacej fáze na potvrdenie prítomnosti A. coli z kalných vývarov EC.

Qa

Na vyhodnotenie kvality prípravnej koncovej dávky sú zasiate známe alebo certifikované ovládacie prvky.

Medzi kmeňmi, ktoré sa môžu na tento účel použiť, patria: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter kanalizácia ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 a Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Kmene sú zasiate vyčerpaním a inkubujú sa pri 37 ° C počas 24 hodín pri aerobióze.

Očakávané výsledky sú:

• Pre Escherichia coli: Silné červené kolónie s kovovým leskom.
• Pre A. Cloacae a Klimatizovať. pneumónia Kolónie musia byť ružové sliznice.
• V prípade S. Typhimurium, s. Flexneri a P. Mirabilis Kolónie sú zvyčajne svetlo ružové alebo bezfarebné.
• Konečne, A. Faecalis Očakáva sa, že bude čiastočne inhibovaná, preto musí byť jeho rast slabý s veľmi malými ružovými kolóniami.

Obmedzenia

-Endo médium má preto pod selektívnou silou, preto môže pestovať niektoré gramovo pozitívne mikroorganizmy, ako je Staphylococcus, Enterococcus a dokonca aj kvasinky.

-Iné bacily, ktoré nepatria do rodiny Enterobacteriaceae, sa môže vyvinúť v tomto médiu, napríklad v tomto médiu Pseudomonas SP a Aeromonas SP. Charakteristiky týchto kmeňov sú bezfarebné nepravidelné kolónie.

-Toto pripravené médium je preto veľmi citlivé na svetlo, a preto predĺžené vystavenie tomuto zhoršeniu indikátorového systému, nezvratne poškodzujúce životné prostredie.

-Stredné komponenty sa považujú za karcinogénne, takže sa treba vyhnúť priamemu kontaktu.

-Dehydrované médium je veľmi hygroskopické a musí sa udržiavať v pôvodnej nádobe pri izbovej teplote, dobre zatvorené a v suchom prostredí.

Odkazy

1. BD Laboratories. Agar. K dispozícii na: BD.com
2. Neogen laboratórium. Som agar. K dispozícii na: Potravinová bezpečnosť.Neogén.com