Simmons Citrate Agar

Pseudomonas fluorescens v Simmons Citrate Agar. Zdroj: Pochybnosti, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Čo je Simmons Citrate Apar?

On Simmons Citrate Agar Je to tuhé médium používané ako biochemický test identifikácie mikroorganizmov, najmä gram -negatívnych bacilov. Pôvodné médium vytvoril spoločnosť Koser v roku 1923.

Koserovo citrátové médium sa skladalo z bujónu obsahujúceho fosforečnan sodný, fosforečnan amónneho, monopotonický fosfát, síran horečnatý a citrát sodný.

Ako je zrejmé, jediným zdrojom uhlíka v médiu je citrát a dusík je fosforečnan amónny, vynechávajúci proteíny a uhľohydráty ako zdroj týchto prvkov, bežne prítomný v iných médiách.

Z tohto dôvodu sa naočkované baktérie v tomto médiu môžu reprodukovať iba vtedy, ak je schopné vziať uhlík citrátu. Test bol pozitívny, ak v strede bola zákal. Mal som však nepríjemnosti, že by mohla dôjsť k neurčitej zákalu.

Tento problém vyriešil Simmons pridaním Bromotimol Agar do Koserovho pôvodného vzorca. Aj keď je zásada rovnaká, interpretuje sa inak.

Základ

Niektoré baktérie majú schopnosť prežiť v neprítomnosti fermentácie alebo produkcie kyseliny mliečnej, ktorá potrebuje dosiahnuť energiu pomocou iných substrátov. V tomto teste je jediným ponúkaným zdrojom uhlíka Citrate.

Baktérie schopné prežiť za týchto podmienok rýchlo metabolizujú citrát alternatívnou cestou k tradičnému cyklu s použitím cyklu kyseliny trikarboxylovej alebo cyklu fermentácie citrátu.

Katabolizmus citrátu baktériami zahŕňa enzymatický mechanizmus bez zásahu koenzýmu do. Tento enzým je známy pod názvom Citrica (citrát oxalacetát-Liasa) alebo citrát demolázy. Reakcia vyžaduje prítomnosť bivalentného katiónu, ktorý je v takom prípade dodávaný horčíkom.

Môže vám slúžiť: typy dýchania a ich vlastnosti

Reakcia generuje oxaloacetát a pyruvát, ktoré potom vedú k organickým kyselinám uprostred alkalického pH tvoreného použitím zdroja dusíka. Tieto organické kyseliny sa používajú ako uhlíkový zdroj, ktorý vytvára uhličitany a bikarbonáty, čo ďalej alkalizáciu média.

Vysiatie režim

Simmons Citrate Médium musí byť mierne naočkované rybím chvostom pomocou rovnej alebo ihly a inkubuje sa 24 hodín až 35-37 ° C. Vyvrcholil čas, ktorý sa pozorujú výsledky.

Pasiak sa vykonáva iba na povrchu agaru, bez vpichu.

Interpretácia

Ak je médium originálna farba (zelená) a nedochádza k viditeľnému rastu, test je negatívny, ale ak sa médium mení modrá, naznačuje prítomnosť alkalických produktov, ktoré sa detegujú indikátorom pH. V tomto prípade je test pozitívny.

Stáva sa to preto, že ak baktérie používa uhlík citrátu, je tiež schopný vziať dusík z fosforečnanu amónneho, s ktorým uvoľňuje amoniak, čo alkalizáciu média.

Na druhej strane, ak je rast baktérií pozorovaný v strede, ale nedochádza k zmene farby, test sa musí považovať za pozitívny, pretože ak existuje rast, znamená to, že baktérie boli schopné používať citrát ako a zdroj uhlíka, hoci v tom čase nedochádza k zmene pH (niekedy to môže trvať).

Ak existujú pochybnosti o interpretácii konečnej farby, dá sa porovnávať s nekrývanou citrátovou trubicou.

Príprava

Vážiť 24,2 g dehydratovaného média pre liter vody. Zmiešajte a odídete približne po 5 minútach. Dokončite rozpustenie stredného zahrievania po dobu 1 alebo dvoch minút, často mávnutím.

Môže vám slúžiť: Aká je makromolekulárna úroveň?

Podávajte 4 ml v testovacích a autoklavarových trubiciach pri 121 ° C počas 15 minút. Pri opustení autokláve sa nakláňajte s pomocou podpory, takže agar je upevnený vo forme flautského vrcholu s malým taco alebo pozadím a viac rámu.

Konečné pH stredného citrátu je 6,9 ​​(zelená farba). Toto médium je veľmi citlivé na zmenu pH.

PH 6 alebo niž. Táto farba sa pri teste baktérií nepozoruje.

A pri pH 7,6 alebo viac sa médium zmení v modrej intenzívnej Prusku.

Využitie

Simmons Citrate Agar sa používa na identifikáciu určitých mikroorganizmov, najmä Bacilli patriacich do rodiny Enterobacteriaceae a iným nefermentujúcim glukózovým bacilom.

Konečné úvahy

Simmons Citrate Médium je veľmi chúlostivý test, pretože ak sa urobia niektoré chyby.

Starostlivosť, ktorá sa musí venovať, je nasledujúca:

Inokulo

Nemalo by sa vykonávať veľmi hrubé alebo naložené bakteriálne inokulum, pretože môže spôsobiť, že sa v mieste vysiate vyvíja medená žltá farba, bez toho, aby ovplyvnila zvyšok média, ale môže veriť, že existuje rast. To neznamená dôkaznú pozitivitu. 

Podobne môže hrubé inokulum generovať falošne pozitívne, pretože vopred vytvorené organické zlúčeniny v bunkových stenách morboundárnych baktérií môžu uvoľniť dostatok uhlíka a dusíka na otočenie indikátora pH.

Preto je ideálnym zasiatím pomocou ihly namiesto rukoväte platiny, aby ste zabránili odobratiu prebytočného materiálu.

Môže vám slúžiť: potravinový reťazec džungle

Vysiať

Na druhej strane, keď siala batéria biochemických testov na identifikáciu príslušného mikroorganizmu, je dôležité, aby test citrát bol prvý.

Za týchto okolností je možné získať falošný pozitívny, pretože každá z týchto látok, ktoré sa zavádzajú chybou, sa metabolizuje a spôsobí zmenu pH.

Ďalším spôsobom, ako sa vyhnúť ťahaniu látky, je spáliť rukoväť a vziať nové inokulum medzi jedným testom a druhým.

Starostlivosť sa musí venovať aj pri dotyku kolónie na vykonanie inokula, pretože by sa malo vyhnúť ťahu časti plodiny agaru, z ktorého baktérie pochádzajú, kvôli vyššie uvedenému vysvetlenému.

V tomto zmysle Matsen, Sherris a Branson odporúčajú zriedenie inokula vo fyziologickom roztoku pred naočkovaním citrátového testu, aby sa zabránilo prenosu iných zdrojov uhlíka.

Intenzita farieb

Malo by sa brať do úvahy, že intenzita farby vyrobenej, keď je test pozitívny, sa môže líšiť v závislosti od komerčného domu.

Okrem toho existujú mikroorganizmy, ktoré pozitívne po 24 hodinách, ale existujú aj iné kmene, ktoré si vyžadujú 48 hodín alebo viac, aby sa vytvorila zmena pH.

Odkazy

1. BBL Simmons Citrate Agar Slants. BD sa získal.com.
2. Simmons Citrate Agar. Zotavené z Británky.com.