Negatívne zafarbenie

Obrázok negatívneho zafarbenia vírusu chrípky a. Zdroj: Pozri stránku pre autor, Wikimedia Commons

Čo je negatívne zafarbenie?

Ten negatívne zafarbenie Je to špeciálna metóda sfarbenia na zvýraznenie prítomnosti kapsuly v niektorých mikroorganizmoch - Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae a Cryptococcus neoformans-, z klinických vzoriek alebo čistých plodín.

Priamo použitá priama vzorka na aplikovanie negatívneho zafarbenia je mozgovomiechový moment. Táto technika predstavuje rýchlu alternatívu pre predpokladanú diagnostiku meningitídy, najmä podľa Cryptococcus neoformans.

Toto zafarbenie sa môže aplikovať na sterilné spúta a kvapaliny všeobecne, ako aj na kmene získané od mladých čistých plodín. Táto technika používa na jej vykonanie nigrosín alebo čínsky atrament, preto je to veľmi jednoduchá a ekonomická metodika, ktorá poskytuje informácie o skvelej diagnostickej hodnote v krátkom čase.

V tomto zmysle je každé laboratórium schopné vykonávať toto sfarbenie. Laboratórium musí, samozrejme, musí mať kompetentného personálu, ktorý je schopný rozpoznať kvasinky Cryptococcus neoformans izolované alebo v gemácii a odlišujú ich od leukocytov a artefaktov, ktoré môže vzorka prezentovať.

Základ

Nigrosín a čínsky atrament konajú podobne, takže buď môžu byť použité určité látky.

Táto technika sa nazýva negatívne zafarbenie, pretože pôsobí v rozpore so zvyškom sfarbenia techník. V tomto je to, čo bez farbenia je štruktúra, ktorá sa hľadá alebo ktorú chcete vidieť, to znamená mikroorganizmy.

Preto je sfarbenie založené na farbení spodnej časti náteru v tmavej farbe. V tomto scenári sa kapsulované štruktúry zvýraznia svetlo alebo bezfarebné.

Zvyčajne sa pozorujú kvasinky, obklopené čírom halo, ktorý zodpovedá kapsule. K tomu dochádza, pretože čínsky atrament a nigrosín sú látky, ktoré nie sú schopné preniknúť do polysacharidu, ktorý tvorí kapsulu živých mikroorganizmov.

Môže vám slúžiť: butyrická fermentácia

Je potrebné poznamenať, že aj iné štruktúry, ktoré môžu byť prítomné v priamej vzorke, ako sú leukocyty alebo červené krvinky.

Ak sú mikroorganizmy mŕtve, tinktúra do nich môže preniknúť, takže toto farbenie je užitočné aj na hodnotenie životaschopnosti mikroorganizmov.

Technika

Materiál

Nigrosín

Nigrosín dlhuje svoj názov čiernej farbe, ktorú má. Je to syntetická látka, ktorá sa získava z zahrievania zmesi organických zlúčenín -napríklad ako nitrobenzeín, anilín a anilínový hydrochlorit -, pričom pri tejto reakcii v tejto reakcii A katalyzátor (železo alebo meď).

Čínsky atrament

Čínsky atrament je látka, ktorú používajú hlavne Ázijci na písanie, vypracovanie umeleckých diel a monochromatickej maľby. Je veľmi populárna v čínskej kultúre.

Získava sa z chobotnice zmiešaného s práškovým uhlím, produkt pálenia malých živicových stromov.

Je tiež možné ho pripraviť zo sadzí spaľovania uhľovodíkov (rastlinné oleje), spolu s proteínovou želé, ktorá mu dáva primeranú konzistenciu, aby sa zabránilo zrážaniu častíc uhlia.

Špecifikácie pre odber vzoriek

• Nevyžaduje sa pôst.
• Vzorka vzorky, spúta alebo sterilná kvapalina musí obsahovať najmenej 1 ml objemu a musí sa preniesť do laboratória pri teplote miestnosti.
• Vzorky CSF a sterilné tekutiny by mali odobrať špecializovaný lekár.
• Môže to byť tiež čistá plodina podozrivého napätia spojeného s vyššie uvedenými patogénmi.

Vykonávanie techniky s priamymi vzorkami

• Vzorky sa musia centrifugovať, potom sa supernatant vyradí a odoberie sa sediment.
• Kvapka odstredeného materiálu (sediment) a kvapka čínskeho alebo nigrosínového atramentu je umiestnená.
• Musí sa dobre premiešať a prikryte krytom krytu, aby sa kvapka rozširovala ako jemný film bez prekročenia hrán.
• Následne je namontovaný prípravok mikroskopu.
• Ak je príprava veľmi tmavá, môže sa zriediť vodou.

Môže vám slúžiť: chemotropizmus

Vykonávanie techniky s kmeňmi z kultivácie

• Veľmi malá časť mladej plodiny sa odoberie s zasiatou ihlou a rozpúšťa sa v kvapke čínskeho atramentu, ktorý bol predtým umiestnený na čistom posúvaní.
• Na vrch je umiestnený kryt.
• Pozoruje sa v 10x mikroskope a potom pri 40x.

Môžete tiež rozpustiť časť kolónie v destilovanej vode a odtiaľto sa kvapká a premiešajte s čínskym atramentom. Týmto spôsobom nebude príprava taká hrubá, čo umožní pozorovanie štruktúr izolovane. Ak dôjde k aglomeráciám, nebude sa dobre pozorovať.

Ďalšia metodika je nasledovná:

• Vložte kvapku do zavesenia na jednom konci snímky.
• Umiestnite kvapku nigrosínu na rovnaký koniec a premiešajte.
• Pomocou iného šmýkačky rozšírite vzorku, akoby vyrábala hematologické nátery.
• Nechajte v mikroskope zaschnúť a pozorovať.

Pozorovanie mikroskopu

Najprv musí byť zameraný na 10 -násobný cieľ, aby mal širokú víziu poľa. Následne musíte hľadať, či existujú jasné priestory. Ak existujú, zamerajte sa so 40x a pozrite si podrobnosti.

Výhody

• Je ľahké vykonať.
• Je to ekonomická technika.
• Táto metóda nevyžaduje, aby sa náter fixoval na zahrievanie alebo chemikália, a preto sa mikroorganizmy pozorujú bez skreslenia.
• Príprava fresky nemusí byť suchý, takže sa dá okamžite pozorovať a rýchlo generuje výsledky.

Znevýhodnenie

• Po namontovaní sa musia okamžite pozorovať čerstvé prípravky. Ak sa nechajú sušiť, už nie je možné ich pozorovať a nové.

Môže vám slúžiť: samostatne

Pocínovanie tkanív s čínskym atramentom

Ďalšou funkciou, ktorá môže splniť čínsky atrament, je v patologických laboratóriách. Toto sa aplikuje vo vzorkách chirurgicky extrahovaných s cieľom označiť marže resekcie nádoru.

Označené tkanivo je postriekané kyselinou octovou. Pôsobí ako mordant a bráni atramentu dostať sa von, keď je tkanivo vystavené rutinnému spracovaniu na prípravu biopsie.

Postup pozostáva z kúpania sa tkaniny v alkoholu a xyléne a potom vložením do parafínového vosku. Toto označenie vedie patológa pri pozorovaní tkaniva, čo naznačuje, kde je okraj chirurgickej resekcie alebo iným záujmovým bodom.

Odkazy

1. Nigrosín. Zotavené z es.Wikipedia.orgán.
2. Forbes, b., SAHM, D., Weissfeld, a. Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do.