Zafarbenie

Rôzne periférne krv Smess zafarbené farbením Wright. Do. Akútna leukémia B. Plazmodium vivax v erytrocyte. C. Plasmodium falciparum, makrogametocito. D. Lymfocyt

Čo je Wrightovo farbenie?

Ten Zafarbenie Je to zafarbovacia technika vytvorená americkým patológom Jamesom Homerom Wrightom v roku 1902 na základe Romanowského farbenia, aby sa lepšie rozlíšilo rôzne typy krviniek. 

Toto sfarbenie je polychromatické, čo znamená, že generuje niekoľko farieb v závislosti od štruktúry, ktorá absorbuje farbivo. Táto sfarbovacia technika sa široko používa na vykonávanie diferenciálnych bielych krviniek a na štúdium morfológie červených krviniek, krvných doštičiek a leukocytov v periférnej krvi a kostnej dreni.

Jeho aplikácia je veľmi dôležitá, pretože abnormality je možné pozorovať v rôznych bunkových líniách krvi, čo uľahčuje diagnostiku chorôb, ako je leukémia alebo bakteriálne alebo parazitné infekcie.

Možno to sú najbežnejšie aplikácie, v ktorých sa táto technika používa, nie sú však jediné. Je to tiež užitočné v iných vzorkách iných ako v krvi a kostnej dreni, ako sú napríklad vzorky nosnej sekrécie, fekálny hlien, spúta, koža.

Nadácia Wrightovho zafarbenia

Wrightovo farbenie sa narodilo z Romanowského škvrny.

Zmes farbív používaných pri farbení Wright spôsobuje účinok známy ako Romanowsky, to znamená, že poskytuje krásne fialové sfarbenie pre leukocyty jadier a neutrofilné granule, zatiaľ čo červené krvinky sú farbené ružovou farbou.

Komponenty zodpovedné za poskytnutie rozsahu typických farieb farbenia spoločnosti Wright sú modré B a eosina a. Pozorovaný účinok bude závisieť od spojenia farbív s chemickými štruktúrami a interakciami modrej B a eozín a.

Kyslé štruktúry, ako sú nukleové kyseliny, jadrové proteíny a nezrelá reaktívna cytoplazma niektorých typov buniek, nastavte modré B (základné sfarbenie).

Zatiaľ čo základné štruktúry, ako je hemoglobín, granule segmentovaných eozinofilov, okrem iných bunkových štruktúr, nastavujú eozín a (kyslé sfarbenie).

Výsledok farbenia môže byť ovplyvnený rôznymi faktormi, ako je pH farbiva Wright, tlmenie a premývanie, ako aj čas farbenia a upevňovania.

Preto je každý krok v príprave reagencií rozhodujúci a musí sa starať o každý detail.

Materiál

Farbenie. Pre 100 ml je to potrebné:

Vážiť 0.3 Gr of Wright Dye, opatrenie 97 ml metanolu a 3 ml glycerolu.

Príprava

Na mínom mieste silné množstvo farbiva Wright a postupne začleňuje glycerol, až kým sa prach úplne nerozpustí.

Následne sa pridá metanol, zmiešaný a naletý do jantárovej fľaše.

Pred použitím sa musí roztok s mäkkými pohybmi a filtrom miešať.

Môže vám slúžiť: Smerový výber: Čo je, definícia, príklady

Roztok vyrovnávacieho tlmivého roztoku

V liter destilovanej vody sa pridá 3,76 g hydrofosfátu disodia (Na₂HPO₄   2h₂0) plus 2,1 g gr Dihydrogénneho fosforečnanu draselného (KH₂Po₄).

Veľmi dobre premiešajte, až kým nerozpustíte všetky začlenené činidlá. Upravte pH na 7.2.  Nalejte do sklenenej nádoby a udržiavajte pri izbovej teplote.

Ďalšie materiály potrebné na vykonanie sfarbenia

Okrem toho sú potrebné ďalšie materiály na vykonávanie sfarbenia techniky, jedná sa o: porta objekty alebo kryty predmetov, zafarbovací most, pásky s vodou alebo nárazník na umývanie, stopky, ktoré si užívajú farebné časy a nejaký sušiaci materiál (absorpčný papier, gáza alebo bavlna. ).

Wright Farbing Components

Metanol

Alkohol (metanol) slúži ako fixér krvného náter na posúvač.

V podstate ide o redukčný reaktívny, dehydratátor a koagulantný fixačný prostriedok. Preto ich funkciou je koagulovať s proteínmi a robiť ich nerozpustné, ale bez toho, aby sa denaturovali.

Metanol je najpoužívanejším činidlom na opravu náter vo všetkých laboratóriách, pretože poskytuje lepšie výsledky ako výsledky získané s etanolom. Ideálna koncentrácia je 99%.

Šokový tlmič

Zásah nárazu (roztok pufrovaného) má funkciu nastavenia alebo údržby.

Priechod fixovania s bunkami dehydraty metanolu a tlmič nárazu ich pomáha rehydratovať.

Eosina (y)

Eosina má afinitu k základným komponentom, pretože je to kyslé farbivo. Dva typy eozínu sú navzájom známe veľmi podobné, natoľko, že sa dajú použiť buď, a získajú rovnaký výsledok.

Jeden sa nazýva eozín a žltý eozín alebo tetrabromofluoresceín a druhý, eozín B, modrý e eritrozín alebo dibromodyitrofluoresceincein. Eozín a je však ten, ktorý sa používa najčastejšie.

Najdôležitejšou vlastnosťou tohto farbiva je jeho negatívna polarita, vďaka čomu je priťahovaná bunkovými štruktúrami s pozitívnym zaťažením.

Metólska modrá

Je základné farbivo. Jeho hlavnou vlastnosťou je metacromia, to znamená, že nie všetky štruktúry budú farbené z rovnakej farby, bude závisieť od chemického zloženia štruktúr, ktoré sa vyfarbujú.

Niektoré sa stanú ľahkými alebo tmavo modrou farbou a iné z tmavo fialovej alebo bledej lila.

Technika

1. Vytvorte rozšírenú vzorku tak, aby bol tenký film, či už na snímke alebo krytoch.
2. Nechajte vzduch zaschnúť približne 2 hodiny.
3. Položte suchú vôňu na sfarbenie alebo sfarbenie vedra s predĺženou vzorkou nahor.
4. Zakryte plachtu wrightovou kvapkou od Goty, aby ste zakryli celý povrch. Nechajte akt 5-8 minút.
5. Farbivo musí úplne zakryť posúvač, bez toho, aby sa rozlial cez hrany. Ak sa v čase sfarbenia začne odparovať, musia sa umiestniť ďalšie kvapky.
6. Následne pridajte rovnaké množstvo tlmiča nárazov, trochu fúkajte, až kým sa neobjaví charakteristický kovový jas. Krotk 10 až 15 minút.
7. Umyte vodou z vodovodu a umiestnite mäkký prúd, až kým plachta nevyzerá ružovo.
8. S gázou impregnovaným alkoholom eliminoval sfarbenie na zadnej strane posúvača.
9. Pred umiestnením ponorného oleja nechajte rozmazávať suchý.

Môže vám slúžiť: taxonomické úrovne

Použitie/aplikácie farbenia Wright

Hematológia

Je ideálny na zafarbenie periférnej krvnej trenia.

Kvôli chemickým vlastnostiam tejto kombinácie farbív je možné ľahko rozpoznať bunkové štruktúry, ktoré sú schopné rozlíšiť rôzne typy prítomných buniek.

Výtok

Táto technika je veľmi užitočná na identifikáciu nazálnych sekrécií (epitelové bunky, segmentované eozinofily, polymorfonukleárne) pri diagnostike alergickej rinitídy.

parazitológia

V tomto zmysle to bolo užitočné pre štúdium Leishmania SP V histiocytoch subkutánneho bunkového tkaniva v kožných vredoch. Používa sa tiež na identifikáciu leukocytov vo vzorke stolice (fekálny leukogram).

V tomto prípade je pre lekára zaujímavé vedieť, či leukocytóza prítomná vo výkaloch je polymorfonukleárny alebo mononukleárny. Toto zistenie vo fekálnom leukograme bude usmerňovať, či ide o bakteriálnu alebo vírusovú infekciu.

Na druhej strane, parazity, ktoré cirkulujú v krvi. Hľadané paraziti sú Plasmodium spp, trypanosoma cruzii a filarie a vo veterinárnom stave je užitočné pri hľadaní Theilery a Babesia Caballi, Kauzálne agenti dieťaťa, najmä u koní.

Zafarbenie Wright a tiež zafarbenie Giemsa umožňuje diferencovať hemoparazity od normálnych bunkových zložiek. Na tento účel je možné použiť dva typy rozšírených::

Jemný

Krv sa rozširuje ako tenký film na snímke. Wright Farbining, odhaľujúce charakteristiky jadra a cytoplazmy.

Kvapka

Táto metodika sa používa na skúmanie prítomnosti parazitov vo väčšom množstve krvi.

Za to sa na sklíčko umiestni veľká kvapka krvi. Akonáhle tam musíte defibrínu, čím sa zväčšujú väčšie a väčšie kruhy zo stredu von, pomocou okraja iného snímky.

Nakoniec, aby sa pozorovali parazity v hustej vôni, erytrocyty musia byť uvedené s vodou.

Dýchacie infekcie

Na úrovni dýchacích ciest je táto technika tiež užitočná, pretože bunky prítomné vo vzorkách spúta, bronchiálne alebo bronchalveolárne premytie sú dôležité na stanovenie diagnózy.

Tu môžete rozlíšiť polymorfonukleárne bunky a mononukleárne bunky.

Bakteriológia

Použitie tejto techniky v bakteriológii je obmedzené, pretože nie je dobré farbiť baktérie. Preto sa na ich zafarbenie používajú ďalšie špecializované sfarbenie techník.

Používa sa však na prehľadávanie epitelových buniek so zaradenými telami Chlamydia trachomatis V nátere močovej močovej alebo endocervikálnej sliznice, hoci je potrebné uznať, že to nie je najlepšia metóda.

Môže vám slúžiť: hemocianíny

Je tiež možné pozorovať medzi červenými krvinkami, špirálové baktérie, ako napríklad Borrelia burgdorferi U infikovaných pacientov, ako aj moruly alebo telieska zahrnutia Ehrlichia SP V cytoplazme lymfocytov, monocytov alebo neutrofilov v krvi.

Mykológia

On Histoplazmatické kapsulatum Je to často diagnostikovaná patogénna huba mikroskopickým pozorovaním rôznych vzoriek tkanív, farbenie s farbením Wright.

Ako sa pozorujú štruktúry vzorky krvi pri farbení Wright?

Odporúčania pre Tincion sanguineous Srols na čítanie hemogramu. Zdroj: Retamales E, Mazo V. Inštitút verejného zdravia, vláda Čile

Odporúčania na dobré zafarbenie

- Rozšírenia vzoriek krvi musia spontánne vyschnúť. Rozkvaly by mali byť čo najtenšie, aby sa dosiahla lepšia fixácia farbiva a vyhýba sa prekrývaniu.

- Pre vysoko kvalitné farbenie je vhodné. Na druhej strane ideálna vzorka je kapilárna krv bez antikoagulancie.

- Ak sa však používa žilová krv, mala by sa používať ako antikoagulant EDTA a non -heparínu, pretože táto môže deformovať bunkové štruktúry.

- Aby sa predišlo zhoršeniu pripraveného farbiva, musí sa skladovať na suchých miestach.

- Počas procesu premytia sa odporúča použitie vody upravenej na neutrálne pH.

- Je vhodné otestovať metódy farbenia používaných v laboratóriu z času na čas.

Toto sa robí sfarbenie vzoriek alebo rozšírené vzory, ako kontrola kvality. Tento krok je dôležitý, pretože je zabezpečené, že zafarbenie je správne pripravené a časy sfarbenia sú dobre štandardizované.

Ak je listový list zle zafarbený, potom existujú problémy, ktoré sa musia vyriešiť.

Bežné chyby vo Wrightovom sfarbení

Veľmi bledé farbenie

Veľmi bledé nátery sú zvyčajne spôsobené veľmi krátkym časom zafarbenia alebo veľmi prehnaným umývaním. Koriguje sa predĺžením kontaktného času s farbivom alebo klesajúcim časom premytia.

Zvončeky

Prítomnosť sfarbenia precipitátov vo vôni môže mať niekoľko príčin. Najčastejšie sú: Použitie farbiva s nefiltrovaným, farbivo na nerovných sfarbenia.

Trenie s extrémne červenkasto alebo modrým sfarbením

Za tlmič nárazu je zodpovedný za pH farbiva. Farby s pH pod uvedeným (kyselinou) budú mať za následok získanie veľmi červenkastých vôní.

Ak je pH farbiva nad (zásadité), získa extrémne modro náter.

Úložný režim

Činidlo sa musí skladovať pri izbovej teplote.

Odkazy

1. López-Jácome, L., Hernández-durán, m., Colín-Castro, C., Ortega-peña, s., Cerón-González, G., Franco-Cendyjas, f. (2014). Základné zafarbenie v mikrobiologickom laboratóriu. Výskum.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara, alebo. (2013). Frekvencia Babesia SPP. V koni Montería, Córdoba (Kolumbia). Otáčať sa. Udcaactual Disculg. vedec. 
3. Retamales, e., Mazo, v. Čile Inštitút verejného zdravia. Odporúčania pre Tincion sanguineous Srols na čítanie hemogramu.