Test Voges-Proskauer Čo je, nadácia, príprava, používa

On Test Voges-Proskauer Je to biochemický test, ktorý sa používa na pomoc pri identifikácii baktérií patriacich do rodiny Enterobacteriaceae rodiny. Najmä je užitočné na rozlíšenie kmeňov od Escherichia coli z Klebsiella a Enterobacter, okrem iného.

Test sa vykonáva v kvapalnom kultivačnom médiu nazývanom Red Metyl-Voges Proskauer, ktorý je známy s skratkou RM/VP. Toto médium sa skladá z pufrovaného polypeptónu, glukózy, fosforečnanu dipo -rekolublého a destilovanej vody.

Červená metil metilo-voges proskauer (RM/ VP)/ pozitívny a negatívny VP test. Zdroj: Fotografia, ktorú urobil autor MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.November [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0)], z Wikimedia Commons

Aktuálne médium RM/VP je modifikácia média Clark a Lubs, ktoré pôvodne obsahovalo menšiu koncentráciu peptónov a glukózy. Preto bolo menšie množstvo vodíkových iónov, ktoré sa vyžadovalo na pozitívnu reakciu Voges-Proskauer.

Test je založený na kapacite mikroorganizmu používania glukózy pomocou butylén-glykotickej cesty a tvorí neutrálny konečný produkt nazývaný acetoín, v prítomnosti kyslíka a alkalického pH.

V médiu RM/VP, okrem toho, že môžete odhaliť test Voges-Proskauer, môžete odhaliť aj test Metilian Red.

Základ

Nadácia testu Voges-Proskauer

Pluripeptóny prítomné uprostred poskytujú nevyhnutné výživové požiadavky na rast bakteriálneho rastu. Pokiaľ ide o svoju časť, hlavná zlúčenina je glukóza. Mnoho baktérií má schopnosť metabolizovať glukózu a tvoriť kyselinu pyruvovú.

Kyselina pyruvová je stredom metabolizmu glukózy a odtiaľ každý mikroorganizmus môže trvať rôzne cesty. Niektoré budú tvoriť zmiešané kyseliny, ako je kyselina mliečna, kyselina octová, kyselina mravčová a kyselina sukpinová, a iné budú tvoriť neutrálne produkty, ako je 2,3-butediol.

Môže vám slúžiť: Flora a fauna z Mexico City

Test Voges-Proskauer odhaľuje kapacitu mikroorganizmu formovania acetyl metyl karbinolu (acetoín), sprostredkovateľský produkt 2,3-butediolu v podmienkach aerobiózy.

Acetoín je redukovaný a tvar 2,3-butediolu, ale táto reakcia je reverzibilná, preto, ak je oxidovaný 2,3-butediol. Preto je kyslík nevyhnutný.

Fosforečnan dipotalizmu je pufer, ktorý tlmí zmes na pH 6,9 ± 0,2.

Nadácia pre rozvoj dôkazov a interpretácie

Na preukázanie reakcie sa musí zjavenie vykonávať pomocou dvoch reagencií (Barrit Reagents), známe ako Voges A a Voges B.

Voges A je roztok 5% a-nftol a Voges B je 40% prípravok hydroxidu draselného. Ak hydroxid draselný nie je k dispozícii, môže byť nahradený 40% hydroxidom sodným.

A-noftol je katalyzátor, ktorý zvýši intenzitu farby reakcie, čo vytvára najcitlivejší test. A-noftol sa musí vždy pridať ako prvé, miešanie trubice tak, aby médium vstúpilo do kontaktu s kyslíkom. Týmto spôsobom je súčasný acetoín oxidovaný na diacetyl a 2,3-butnediol je oxidovaný za vzniku acetoínu, čím sa odovzdáva do diacetyl.

Takto sa pripojí k diacetylu, ktorý sa zase pripojil k guanidínovému jadru prítomnému v aminínovej aminokyseline, druhý z viacnásobných.

Pokiaľ ide o svoju časť, je zodpovedný draslík alebo hydroxid sodný za absorbovanie CO₂ A reagovať s pepónmi. Táto reakcia pochádza z tvorby ružovej farby, ktorá je jasne viditeľná po veľmi dobre premiešaním trubice.

Môže vám slúžiť: Tkanivová úroveň organizácie: Charakteristiky a príklady

Aby sa sfarbenie došlo okamžite. Ak sa tak nestane, trubica sa môže pred tlmočením odpočívať 15 minút.

Test je vo všeobecnosti pozitívny po 2 až 5 minútach, keď vidíte slabú ružovú farbu. Ak zostane v pokoji počas 30 minút po 1 hodine, intenzita farby bude maximálna (intenzívna červená).

Negatívny test sa preukáže, keď je vývar žltý. Po 1 hodine, ak je test negatívny, sa môže vytvoriť medený farebný produkt reakcie hydroxidu draselného na a-noftol.

Príprava

Stredný RM/VP

Vážiť 17 g gr dehydrovanej kultúry a rozpúšťať sa v liter destilovanej vody. Nechajte stáť 5 minút. Zohrejte sa do varu, aby ste sa úplne rozpustili. Podávajte 3 až 4 ml v skúmavkách a sterilizujte v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Dehydrované kultivačné médium je béžové a pripravené médium je ľahké jantárové.

Konečné pH média je 6,9 ​​± 0,2.

Voges Reagent a

Vážiť 5 GR a-naftolu a rozpúšťajte sa v 50 ml etylalkoholu (absolútne). Následne pridanie etylalkoholu dokonca Enrasar pri 100 ml.

Voges Reagent B

Vážte 40 g gr hydroxidu draselného a rozpustí sa v 50 ml destilovanej vody v kadičke. Sklo musí byť umiestnené do kúpeľa so studenou vodou na reguláciu teploty, pretože v čase rozpustenia prípravy prudko stúpa teplota.

Po studenom roztoku sa prenesie na nasekanú guľu a preplachuje sa pri 100 ml destilovanou vodou.

Môže vám slúžiť: krvný agar

Postup testovania Voges-Proskauer

Na vykonanie testu Voges-Proskauer je naočkovaný vývar RM/VP s mikroorganizmom, z čistého plodiny od 18 do 24 hodín.

Inokulum by nemal byť veľmi hustý. 35-37 ° C sú Inckuba počas 24 až 48 hodín, hoci inkubácia na niekoľko dní je niekedy potrebná. Cowan a oceľ sa domnievajú, že 5 dní je minimálny čas inkubácie potrebný na detekciu všetkých pozitívnych druhov Voges-Proskauer (VP) v rodine Enterobacteriae.

Test odhalil

Oddeľte alikvot 1 ml v trubici a vypracujte vývoj nasledovne: umiestnite 12 kvapiek (0,6 ml) voges a a 4 kvapiek (0,2 ml) Voges B. Zmiešajte do vzduchu a pred tlmočením nechajte stáť 5 - 10 minút. Ak je však test stále negatívny, nechajte trubicu stáť a sledujte trubicu po 30 minútach až 1 hodinu.

Vzhľad ružovo-červenej farby naznačuje, že reakcia Voges-Proskauer je pozitívna. Ak médium zostane žltá, reakcia je negatívna.

Pridanie odhalenia v poradí a uvádzanom množstve je nevyhnutné, aby sa predišlo falošným negatívom.

Využitie

Test Voges-Proskauer je užitočný na rozlíšenie medzi kmeňmi od A. coli ktoré sú negatívnymi VP, žánrov Klebsiella, Enterobacter, Serratia, ktoré sú pozitívne VP.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.

Qa

Na testovanie kvality pripraveného média môžete použiť ovládacie prvky vrátane Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium a Enterobacter kanalizácia ATCC 13047.

Očakávané výsledky sú pozitívne reakcie Voges-Proskauer iba pre Klimatizovať. pneumónia a A. Cloacae. Zvyšok poskytuje negatívne reakcie.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. Priemer MR-VP. K dispozícii na: www.Británion.com