Príprava kultúrnych médií

Príprava kultúrnych médií je metodológia na pestovanie mikroorganizmov, aby sa ich študovali

Aká je príprava kultúrnych médií?

Ten Príprava kultúrnych médií Je to rutinná metodika používaná v laboratóriách na rast požadovaných mikroorganizmov. Kultúrne médiá sú pevné, tekuté alebo polotuhé prípravky, ktoré majú všetky potrebné živiny na vývoj mikrobiálnej populácie.

Všeobecne platí, že prostriedky na kultiváciu mikroorganizmov sú bohaté na proteíny a aminokyseliny a zvyčajne obsahujú určitú zložku, ktorá okrem iného uprednostňuje rast organizmu, ktorý chcete študovať, ako sú vitamíny, krv, sérum.

Neexistujú prostriedky na všeobecnú alebo univerzálnu kultúru, pretože jej zloženie sa líši v závislosti od potrieb mikroorganizmu, ktorý je predmetom záujmu. Niektoré baktérie sa dajú rozvíjať v akomkoľvek kultivačnom médiu, ale iné majú špeciálne požiadavky.

Z čoho pozostáva?

Mikroorganizmy, ako sú huby a baktérie, nemožno študovať individuálne kvôli ich mikroskopickej veľkosti. Preto sa musia kultivovať v umelých médiách, ktoré umožňujú významné zvýšenie populácie.

Napríklad, ak chceme študovať baktérie, musíme im poskytnúť vhodné podmienky, aby sa mohli šíriť a tvoriť kolóniu (ktorú je možné pozorovať voľným okom).

Príprava kultúrnych médií sa veľmi líši v závislosti od typu mikroorganizmu, ktorý chcete pestovať. Pred prípravou je potrebné poznať základné výživové potreby pracovného organizmu.

Najbežnejšie komponenty používané v plodinových médiách budú opísané nižšie na všeobecnú predstavu o svojej príprave:

Agar

Používa sa v plodinách ako gelové činidlo a dodáva, keď sa vyhľadá pevné alebo polo -pevné médium. Prvým spevňovacím činidlom používaným v príprave médií bola želatína, ale v roku 1883 bol agar zavedený do sveta bakteriológie W. Hesse.

Agar bakteriologického typu má ako hlavnú zložku polysacharid komplexných dôsledkov, extrahovaný z rias. Táto zlúčenina sa používa ako zahusťovadlo bežných potravín, ako je zmrzlina a džemy.

Je to veľmi cenný prvok v mikrobiológii z niekoľkých dôvodov. Hlavne, pretože mikroorganizmy ho nemôžu degradovať, skvapalní sa pri teplote 100 ° C a zostáva v kvapalnom stave, až kým nedosiahne 45 ° C alebo menej.

V prípade, že chcete pripraviť pevné médium, koncentrácia agaru musí byť okolo 1,5%, zatiaľ čo polopriepustné polivy sa musia pripraviť od 0,3 do 0,5%.

Tekutiny

Pestovanie patogénnych organizmov potrebuje telesné tekutiny, aby sa mohli vyvíjať tak, ako by sa vo svojom prírodnom prostredí.

Môže vám slúžiť: protetická skupina

Z tohto dôvodu sa pridá úplná alebo defibrovaná krv. Kvapalina sa extrahuje zo zdravého a po sterilizovanom zvieraťa sa pridá do kultivačného média.

Výťažok

Získajú sa z rôznych živočíšnych častí (ako je mäso alebo pečeň) alebo zelenina (semená) a spracúvajú sa na získanie tuhého koncentrátu vo forme cestovín alebo prachu.

Najbežnejšie sú extrakty kvasiniek, sladu a mäsa.

Peptony

Tieto organické zlúčeniny sa získavajú enzymatickými alebo chémiou zvierat alebo rastlinných tkanív. Účelom je pridať bohatý obsah do aminokyselín, ktoré sú základnými jednotkami proteínov.

Tlmič nárazov

„Vyrovnávacie pamäte“ alebo systémy absorbujúce nárazy sa vyhýbajú náhlym zmenám pH a pomáhajú udržiavať optimálny rozsah, ktorý toleruje organizmus.

Väčšina organizmov môže správne vyvinúť pH 7, hoci niektoré baktérie uprednostňujú alkalické médiá. Existujú však baktérie, ktoré odolávajú variáciám pH medzi hodnotami 6 a 9.

U druhov citlivých na pH sa poškodenie nevyrába nadmerným množstvom vodíka alebo hydroxylových iónov, ale zvýšením slabých kyselín alebo báz, ktoré môžu preniknúť do bunky.

Podobne sa pridávajú ukazovatele pH, aby sa mohli monitorovať a vyhnúť sa odchýlkam spôsobeným fermentáciou alebo inými procesmi.

Ciele

Hlavným cieľom pri príprave kultivačného média je pridať všetky potrebné komponenty, aby sa umožnil úspešný vývoj organizmu, ktorý si želá izolovať. Musí sa identifikovať kombinácia účinnejších komponentov a živín na dosiahnutie požadovaných prostriedkov.

Príprava aj stredné skladovanie sú rozhodujúce pre zabezpečenie úspešného rastu, pretože tieto kroky závisia od zloženia životného prostredia a dostupnosti živín.

Malo by sa brať do úvahy, že kultivácia mikroorganizmov je úlohou, ktorá je ovplyvnená niekoľkými faktormi vonkajším v kultúrnom prostredí, ako je intenzita prijatého svetla, teplota a úroveň kyslosti alebo alkality média.

Preto sa musí brať do úvahy každá z týchto premenných a dôkladne monitorovať.

Typy médií

Na základe jeho zloženia

Na základe jeho zloženia existujú tri hlavné typy plodín: prírodné alebo empirické, semi-syntetické a syntetické alebo chemické prostriedky.

Prírodné prostredie

V prírodných médiách nie je známa presná zloženie. Patria sem prísady, ako je mlieko, zriedená krv, rastlinné šťavy, extrakty a infúzie mäsa a peptones.

Z ekonomických dôvodov sa zvyčajne pridávajú komponenty s nízkymi nákladmi, ako je sójový extrakt, sérum, melasa atď.

Môže vám slúžiť: Podpora: Charakteristiky, funkcie a príklady

Semi-syntetické médiá

Nazýva sa to semi-syntetické, ak je zloženie čiastočne známe. Akékoľvek médium obsahujúce agar je semi-syntetické médium.

Medzi nimi máme okrem iného dextrózový zemiak, agar Czapek-Dox, ovsené vločky, priľnavosť na peptón mäsa.

Syntetické alebo chemické definované médium

V tomto prípade je zloženie média - ako pre množstvo uhlíka, dusíka, síry, fosforu a akéhokoľvek iného rastového faktora, je úplne známe - je úplne známe - úplne známe.

Je veľmi užitočné, ak chcete získať reprodukovateľné výsledky pre ostatných výskumných pracovníkov.

Pre So -založené „mikroorganizmy so špeciálnymi požiadavkami na rast“ musíte pridať potrebné komponenty. Príkladom tohto typu je Laktobacillus.

Na základe typu mikroorganizmu

Rovnakým spôsobom existuje ďalšia klasifikácia pre kultúrne médiá založená na type mikroorganizmu, ktorý v ňom môže rásť.

Podľa tejto zásady máme nasledujúce: Všeobecné prostriedky, obohatenie, selektívne a diferenciály. Každý je opísaný nižšie:

Všeobecné prostriedky

Tieto pripúšťajú rozvoj širokej škály mikroorganizmov. Ak nejaký organizmus potrebuje pre svoj rast osobitných podmienok, nebude schopný sa v tomto type plodín úspešne rozvíjať.

Obohatenie

Obohatenie znamená uprednostňovať rast určitého typu mikroorganizmu, ale nebola pridaná žiadna látka, ktorá by zabránila rastu iných druhov mikróbov.

Selektívne prostriedky

Hľadajú špecifický rast mikroorganizmu, okrem iného nazývajú huby, baktérie, protozoa. Aby to dosiahlo, brzdia rozvoj ostatných.

Na dosiahnutie tohto cieľa sa môžu pridať smrteľné chemické zlúčeniny pre širokú skupinu mikroorganizmov a neškodné pre záujmový počet alebo pridanie zdrojov energie, ktoré sú asimilovateľné v vyhľadávaní mikróbov.

Selektívne médiá sa používajú, keď sa odoberia lekárske vzorky na kultiváciu niektorých patogénnych mikroorganizmov. Tu je potrebné uprednostňovať rast patogénu a inhibovať vývoj normálnej mikrobiálnej flóry od pacienta.

Napríklad sulfitový agar bizmutu neumožňuje rast gramovo pozitívnych baktérií a veľkého počtu baktérií nachádzajúcich sa v gastrointestinálnej dutine.

Preto sa používa na kultiváciu gramnegatívnych baktérií, ktoré spôsobujú tyfusovú horúčku, Salmonella Typhi, Vo vzorkách stolice.

Diferenciálne prostriedky

Tento typ používa určitú diagnostickú charakteristiku záujmu organizmu (napríklad v jeho metabolizme), aby ich dokázal identifikovať proti inému druhu, ktorý rastie v rovnakom médiu.

Môže vám slúžiť: transfázy: čo sú, funkcie, nomenklatúra, podtriedy

Diferenciálne médiá aj selektívne prostriedky sú veľmi užitočné v oblasti klinickej mikrobiológie a verejného zdravia, pretože tieto disciplíny musia zistiť prítomnosť špecifických mikroorganizmov súvisiacich s patológiami alebo zlými podmienkami hygieny.

V plodine môžete pridať indikátorové látky, ktoré poskytujú výraznej vlastnosti vyhľadávanej kolónie. Napríklad k strednemu agar-eozínovému pravidlu metylénu (skrátená EMB) a agar-macconkey sú pridané laktóza a indikátor pH pH a pH indikátor.

Keď sa teda v týchto médiách vyvíja kolónia so schopnosťou fermentovať laktózu a produkovať aldehydy, možno ich pozorovať v špeciálnej farbe.

Kroky na prípravu kultúrnych médií

V súčasnosti je možné kultiváciu kúpiť lyofilizovaným spôsobom. Preto je príprava uľahčená a zostáva iba produkt.

Obsah musí byť ťažký (berúc do úvahy konečnú sumu, ktorú chcete pripraviť) a rozpustené v destilovanej vode po všetkých indikáciách produktu.

Obsah tekutých médií sa musí rozdeliť na požadované nádoby (Petriho dosky, trubice atď.) Na následnú sterilizáciu.

Na distribúciu tuhého média je potrebné ho roztaviť pomocou mikrovlnnej rúry alebo predložiť materiál do vodného kúpeľa. Médiové pH musí byť upravené.

Zvyčajne sa agar používa v skúmavkách alebo na Petriho tanieroch. Ak agar stuhne v naklonenej polohe, s primeraným uhlom, ktorý bude diagonálny, je známy ako flauta alebo naklonené trubice PICO.

Keď agar stuhne v úplne zvislej polohe, je uvedený názov „hlbokého“.

Po sterilizácii médií - pomocou autoklávu - nechajú ich vychladnúť. Musia sa manipulovať v prostredí bez mikroorganizmov, najbežnejším je pracovať s ľahším zapaľovaním, ktoré zaisťuje aseptické prostredie v jeho okolí.

Odkazy

1. Celis, J. A. (2006). Bunková biológia: laboratórna príručka (Zv. 2). Elsevier.
2. Finegold, s. M., Bailey, W. R., Barón, e. J., Fineglod, s. M., & Scott a. G. (1991). Bailey Scott: Mikrobiologická diagnostika. Pan -American Medical.
3. Olivas, e. (2004). Príručka mikrobiológie a II a parazitologických praktík. Autonómna univerzita v Ciudad Juarez.
4. Schlegel, h. G., & Zaborosch, C. (1993). Mikrobiológia. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, b. R., & Case, c. L. (2007). Úvod do mikrobiológie. Edimatizovať. Pan -American Medical.