Nadácia SIM, príprava a použitia

On SIM médium Je to polo -slažný a diferenciálny agar, špeciálne navrhnutý na pomoc pri identifikácii niektorých baktérií, najmä od rodiny Enterobacteriaceae. Skladá sa z tripteínu, peptónu, síranu železa, síranu amónneho, tiosíranu sodného a agaru.

Toto médium umožňuje vykonávanie troch dôležitých testov: výroba sulfidu vodíka (H₂S), Tvorba indolu a motility, odtiaľ prichádza skratka SIM. Vďaka svojej veľkej užitočnosti nemôže chýbať v bakteriologickom laboratóriu.

Do. Middle SIM Commercial B. SIM H2S (-), indol (-) a motilita (+) a SIM H2S (+), indol (-), testovacia (+) testovacia skúška. Zdroj: a. Fotografia, ktorú urobil autor MSC. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licencie/By-SA/3.0)]

Na rozdiel od iných médií to musí byť polotuhé na zistenie kapacity pohybu, ktorú majú niektoré baktérie. V tomto zmysle tento test funguje veľmi dobre pre enterobaktérie, ale nie v nepoderných negatívnych baciloch, kde sa uprednostňujú iné metódy, ako napríklad čakajúca kvapka.

SIM médium umožňuje rozlíšiť určité špecifické vlastnosti, ktoré charakterizujú niektoré baktérie vo vzťahu k iným. Napríklad Escherichia coli sa vyznačuje tým, že je h₂S (-), indol (+) a motilita (+), zatiaľ čo Proteus mirabilis Je to h₂S (+), indol (-), motilita (+).

[TOC]

Základ

Je to kultúra, ktorá sa považuje za diferenciálu, pretože jeho použitie dokáže rozlišovať medzi mikroorganizmami schopnými produkovať sulfid vodíka od tých, ktorí to neurobia; Zdôrazňuje tiež tie, ktoré tvoria indol z tryptofánu, od tých, ktorí sa nevytvárajú, a nakoniec odlišuje pohyblivé baktérie od imobilného.

Zdroj energie

Rovnako ako akékoľvek kultúrne prostriedky, má prvky, ktoré poskytujú potrebné živiny, aby sa mohli rozvíjať mikroorganizmy, ktoré sa nezodpovedajú. Tieto prvky predstavujú Peptones a Triptein.

Vývoj mikroorganizmu v životnom prostredí je nevyhnutný na pozorovanie prítomnosti alebo neprítomnosti charakteristík, ktoré to znamená hodnotiť.

Výroba sulfidu vodíka

Písmeno S skratkou SIM sa vzťahuje na výrobu sulfidu vodíka (H₂S). Baktérie schopné tvoriť sírovodík budú mať síran sodný.

Môže vám slúžiť: Intra -špecifická konkurencia: Charakteristiky, typy a príklady

Akonáhle sa H vytvorí₂S -Gas bezfarebná-, reaguje so železnou soľou prítomnou v strede, tvoriaca sulfid železo, jasne viditeľný (čierna zrazenina). Baktérie, ktoré sa netvoria h₂S, nechajte pôvodné farebné médium (béžová).

Prítomnosť čiernej zrazeniny môže brániť interpretácii pohyblivosti. Je však známe, že väčšina Enterrobactérií produkujúcich HT₂S sú pozitívna motilita, ako napríklad salmonela, proteus a citrobakter. Okrem toho čierna zrazenina, ktorá pokrýva takmer celé médium, naznačuje pozitívnu pohyblivosť.

Indolová tvorba

Druhé písmeno skratky SIM je „i“, ktorý predstavuje tvorbu indolu.

V tomto zmysle, Tripteine, okrem toho, že je zdrojom živín, plní ďalšiu základnú funkciu. Tento peptón je bohatý na aminokyselinu nazývanú tryptofán, preto môže vykazovať baktérie, ktoré produkujú triptofanúzu.

Tento enzým má na starosti klivár do aminokyseliny triptofánu, s následnou tvorbou indolu (bezfarebná látka), kyseliny pyruvovej a amoniak.

Preto je potrebné ukázať túto reakciu, je potrebné. Niektoré z týchto dvoch reaguje s indolom a na povrchu agaru tvoria kruh v tvare červenej fuksii. Ak sa zdá, že farebný kruh fuchsie sa indikácia interpretuje ako pozitívny.

Baktérie, ktoré tento enzým nemajú, nebudú tvoriť kruh a interpretujú sa ako negatívny indolový test.

Je dôležité poznamenať, že dôkaz indolu musí byť posledný, ktorý sa má interpretovať, pretože po pridaní činidla médium bráni vizualizácii pohyblivosti.

Pohyblivosť

Nakoniec písmeno „m“ slova sim znamená pohyblivosť. Na vyhodnotenie motility je toto médium strategicky polotuhé, pretože táto charakteristika je nevyhnutná na pozorovanie, či existuje alebo nie je bakteriálny pohyb alebo nie. Baktérie, ktoré majú bičíky, sú tie, ktoré poskytujú tento pozitívny test.

Môže vám slúžiť: T lymfocyty: štruktúra, funkcie, typy, dozrievanie

Po pozorovaní zákalu bude preukázaný pozitívny test. Zatiaľ čo baktérie non -mobile sa vyvíjajú iba na počiatočnej ceste inokula.

Príprava

SIM médium

Vážiť 30 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody. Zmes sa ponechá v pokoji po dobu 5 minút a potom sa zahrieva až do varu, často miešanie až do úplného rozpustenia.

Distribuujte zmes v testovacích skúmavkách vatovým vekom a autoklavácia pri 121 ° C počas 15 minút. Odstráňte stojan na automobilové trubice a nechajte tuhosť vo zvislej polohe, takže médium je vo forme taco.

Pre svoju ochranu je uložená v chladničke až do jej použitia. Pripravené médium musí mať konečné pH 7,3 ± 0,2.

Pri naočkovaní média musí byť pri teplote miestnosti. Farba média je béžová.

Kovacovo činidlo

Zmerajte 150 ml amylu alebo izoamylového alebo butylalkoholu. (Použite jeden z troch uvedených).

Rozpustite 10 g gr z p-dimetylaminobenzaldehydu. Potom pomaly pridajte 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Činidlo pripravené na použitie je bezfarebné alebo čisté žlté. Musí sa uchovávať v jantárovej fľaši a uložiť sa do chladničky. Nepoužívajte, ak máte tmavohnedú farbu; To naznačuje, že je poškodený. Toto činidlo je uprednostňované, pokiaľ ide o Enterobacteria.

Erlich Reagent

Vážiť 2 g gr of p-dimetylaminobenzaldehyd a rozpúšťať sa v 190 ml absolútneho etylalkoholu a pomaly sa miešajte so 40 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Udržujte Kovacovo činidlo rovnakým spôsobom. Ehrlichovo činidlo sa používa viac na nefermentovanie a anaeróbne baktérie.

Žiadosti

SIM médium sa vysoko používa v bakteriologických laboratóriách. Má výhodu, že pri identifikácii enterobaktérií je možné pozorovať tri základné charakteristiky.

Môže vám slúžiť: acetické fermentácia: charakteristiky, aplikácie, príklady

Vysiať

Správny spôsob, ako zasiať toto médium, je použitie ihly, s ktorou sa vezme a vloží časť čistej kolónie na štúdium a vložená do stredu média vertikálne. Musí sa urobiť jediný výpad. Punkcia by sa nemala dostať na spodok trubice, správne je pokryť iba dve tretie strany.

Nie je vhodné opakovať inokulum, pretože to môže mať falošné interpretácie pozitívnej pohyblivosti. Naočkované médium sa inkubuje pri aerobióze pri 37 ° C počas 24 hodín.

Po skončení času sa zistilo, či došlo k produkcii H₂S a prečítajte si motilitu. Nakoniec sa odhaľuje indol a pridá 3 až 4 kvapky Ehrlicha alebo Kovacovho činidla, jemne zmiešaný a interpretovaný.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.

Qa

Ako regulácia sterility sa inkubuje jedna alebo dve trubice bez naočkovania za 37 ° C na 24 hodín. Očakáva sa, že po tejto dobe nedochádza k zmene rastu ani farby.

Ako kontrola kvality môžete použiť certifikované známe kmene, napríklad: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Očakávané výsledky sú: Escherichia coli H₂S negatívnym, indolom a pozitívnou pohyblivosťou, Enterobacter Aerogenes Iba pozitívna pohyblivosť, Salmonella typhimurium H₂S a pozitívna pohyblivosť, s negatívnou indolom. Proteus vulgaris Všetko pozitívne, pokiaľ Klebsiella pneumoniae a Shigella Sonnei Všetko negatívne.

Obmedzenia

-Niektoré kmene Morganella Morganii, Medzi iné kmene môžu v tomto médiu produkovať hnedastý pigment v dôsledku produkcie melanínu, nemalo by sa to zamieňať s zrazeninou sulfidu železného sulfidu. U neskúsených odborníkov môže táto situácia vygenerovať falošné pozitíva pri interpretácii testu H₂Siež.

-Prísne aeróbne baktérie budú rásť iba na povrchu trubice, čo brzdí interpretáciu pohyblivosti.

Odkazy

1. BD Laboratories. Bbl sim medum. 2008. K dispozícii na: BD.com
2. Neogen laboratórium. Sim Medum. K dispozícii na: Potravinová bezpečnosť
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Sim Medum. 2009. K dispozícii na: http: // f-soria.je
4. Laboratórium Brizuela-Lab.  Priemerný SIM. Dostupné v: .Brizuela-lab.com
5. Británske laboratóriá. Priemerný SIM. 2015. K dispozícii na: Studyres.Je/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.