Polovica nadácie, príprava, použitia a obmedzenia

On Polovica alebo glukózová fermentácia je polotuhý agar špeciálne navrhnutý na štúdium oxidačného a fermentatívneho metabolizmu uhľohydrátov v dôležitej skupine mikroorganizmov odlišných od enterrobaktérií, nazývaných neoterénne negatívne bacily bacily.

Vytvorili ho Hugh a Leifson; Títo vedci si uvedomili, že konvenčné médiá na štúdium produkcie kyselín z sacharidov neboli vhodné pre túto špecifickú skupinu baktérií.

Do. Stred bazálnej reklamy. B. Trubice s polovicou vysiate. Zdroj: Fotografie A a B urobené autorom MSC. Marielsa Gil.

Je to preto, že negatívne negatívne bacily zvyčajne produkujú nízke množstvo kyselín, na rozdiel od enterobaktérií.

V tomto zmysle médium má špeciálne vlastnosti, ktoré dokážu zistiť malé množstvá tvorené kyselinou, a to tak oxidačnými aj fermentatívnymi. Tieto rozdiely súvisia s množstvom peptones, uhľohydrátov a agar.

Toto médium obsahuje menšie peptony a väčšiu koncentráciu uhľohydrátov, týmto spôsobom sú produkty, ktoré sú médium redukované v dôsledku metabolizmu proteínov a produkcia kyselín sa zvyšuje použitím uhľohydrátov.

Na druhej strane, zníženie množstva agaru uprednostňuje šírenie kyseliny produkovanej celým médiom, okrem pozorovania pohyblivosti.

Médium je zložené z peptónu, chloridu sodného, ​​bromotimolovej modrej, fosforečnanu dipotalizmu, agaru a uhľohydrátu. Najbežnejším uhľohydrátom je glukóza, ale iné sa môžu použiť podľa toho, čo chcete študovať, ako je laktóza, maltóza, xylóza,.

[TOC]

Základ

Rovnako ako akékoľvek kultúrne prostriedky, aj životné prostredie musí obsahovať výživové látky, ktoré zaručujú rast baktérií; Tieto látky sú peptóny.

Pokiaľ ide o svoju časť, uhľohydrát poskytuje energiu a zároveň slúži na štúdium správania mikroorganizmu proti nemu, to znamená, že umožňuje klasifikovať baktérie ako oxidačný, fermentatívny alebo ne -Sakrálny organizmus.

Médium obsahuje pomer peptónu a uhľohydrátov 1: 5 na rozdiel od konvenčných médií 2: 1. To zaručuje, že množstvo alkalických amínov vytvorených z degradácie peptones neutralizuje tvorbu slabých kyselín.

Môže vám slúžiť: Sfingomyeline: Čo je, štruktúra, funkcie, syntéza

Na druhej strane, médium obsahuje chlorid sodný a fosforečnan dipotalizmu. Tieto zlúčeniny stabilizujú osmoticky v strede a regulujú pH. Bromootimol Blue je indikátor pH, ktorý vytvára farbu žltej zelenej výrobou kyseliny.

Niektoré mikroorganizmy môžu používať uhľohydráty oxidačnou alebo fermentatívnou cestou, zatiaľ čo iné sa neberú.

Závisí to od charakteristiky každého mikroorganizmu. Napríklad niektoré prísne aeróbne mikroorganizmy môžu oxidovať určité uhľohydráty a voliteľné anaeróby môžu oxidovať a fermentovať v závislosti od prostredia, ktoré ich obklopuje, zatiaľ čo iné neoxidujú alebo kvasia uhľohydráty (askarolitiká).

Nakoniec existuje modifikácia média odporúčaného CDC, ktoré obsahuje špeciálny základ s červeným fenolom ako indikátor.

Oxidačný proces

Proces oxidácie glukózy nevyžaduje fosforyláciu glukózy, ako sa vyskytuje v procese fermentácie. V tomto prípade je skupina aldehydu oxidovaná do karboxylovej skupiny, čo vedie k kyseline glukónovej. To je zase oxidované na 2-Zo-glykonic.

Posledne menované alebo dve molekuly kyseliny pyruvovej akumulujú alebo degradujú. Tento systém potrebuje prítomnosť kyslíka alebo anorganickej zlúčeniny ako konečného akceptora elektrónov.

Produkcia kyselín touto cestou je slabšia ako produkcia získaná fermentatívnou cestou.

Fermentačný proces

Na výrobu fermentácie glukózy akoukoľvek z dostupných ciest musí byť najprv fosforylovaná a stať sa glukózou-6-fosfát.

Fermentácia glukózy môže trvať niekoľko ciest, hlavná je cesta Embden-Meyerhof-parna degradácie pentózy.

Zvolená cesta bude závisieť od enzymatického systému, ktorý má mikroorganizmus.

Via de Embden-Meyerhof-parna

Pri fermentácii glukózy pomocou Embden-Meyerhof-Parna. Odtiaľ pochádza sprostredkovateľská látka, ktorým je kyselina pyruvová.

Môže vám slúžiť: fotoperióda

Odtiaľ sa vytvoria rôzne typy zmiešaných kyselín, ktoré sa môžu meniť od jedného druhu k druhému.

Tento systém sa vyskytuje v neprítomnosti kyslíka a potrebuje organickú zlúčeninu ako konečný akceptor elektrónov.

Trasa Encoudoroff

Pri fermentácii glukózy intner-doucoroff trasou je glukóza 6-fosfát na glukón-ᵼ-laktón-6-fosfát a odtiaľ je oxidovaný na 6-fosfogluvát a 2-zo-3-Dedexi-6 fosfoglukonát, fosfoglukonát. Konečne tvoriť kyselinu pyruvovú. To potrebuje kyslík, aby došlo k glykolýze.

Cesta na degradáciu monofosfátu pentózy alebo warburg-dikenov

Táto trasa je hybridom z predchádzajúcich 2. Začína sa podobne ako Entner-Doudoroff dráha, ale následne sa glyceraldehyd-3-fosfát tvorí ako prekurzor kyseliny pyruvovej, ako je to v prípade cesty Emden-Meyerhof-parna.

Príprava

Vážiť:

2 GR peptónu

5 g chloridu sodného

10 Gr of d-glucosa (alebo uhľohydrát, ktorý sa pripraví)

0,03 g bromotimolovej modrej

3 gar agar

0,30 Gr dipotazického fosfátu

1 liter destilovanej vody.

Zmiešajte všetky zlúčeniny okrem uhľohydrátov a rozpúšťajú sa v 1 litri destilovanej vody. Zahriate sa a miešajte, až kým sa nespustí v celom rozsahu.

Pri ochladení pri 50 ° C sa 100 ml glukózy pridáva k 10% (filtrované).

Asepticky distribuuje 5 ml média v testovacích trubiciach s bavlneným vekom a autoklavate pri 121 ° C, 15 libier tlaku po dobu 15 minút.

Nechajte vo vertikálnej polohe.

Médium pH musí byť 7, 1. Farba pripraveného média je zelená.

Držte v chladničke.

Žiadosti

Médium je špeciálny prostriedok na určenie metabolického správania mikroorganizmu proti uhľohydráte. Najmä pre tých, ktorí tvoria kyseliny vzácnej, slabej alebo nulovej cesty.

Vysiať

Pre každý mikroorganizmus sú potrebné 2 trubice, obe musia byť naočkované mikroorganizmom, aby sa mohli študovať. Kolónia sa berie s priamou rukoväťou a punkcia sa vyrába v strede trubice bez toho, aby sa dosiahla dno; Môžete urobiť niekoľko punkcií, pokiaľ nemáte záujem pozorovať pohyblivosť.

Môže vám slúžiť: alanín: Charakteristiky, štruktúra, funkcie, biosyntéza

K jednej z trubíc sa pridá vrstva sterilnej tekutej vazelíny alebo sterilného roztaveného parafínu (približne 1 až 2 ml) a je označená písmenom „F“. Druhá trubica je opustená originálna a označená písmenom „O“. Obe trubice sa inkubujú pri 35 ° C a sú pozorované denne až 3 až 4 dni.

Interpretácia

Metabolizmus a výroba plynu

Tabuľka: Klasifikácia mikroorganizmov podľa ich správania v otvorených (oxidačných) a uzavretých (fermentatívnych) skúmavkách (fermentatívne)

Zdroj: vyrobený autorom MSC. Marielsa Gil

Plyn sa pozoruje s tvorbou bublín alebo vytesnením agaru.

Je potrebné poznamenať, že organizmus, ktorý iba oxiduje glukózu, ale nie fermente, nemôže fermentovať iné sacharidy, v žiadnom prípade ho oxiduje iba. Preto v tejto situácii bude utesnená trubica vynechaná na štúdium iných uhľohydrátov.

Pohyblivosť

Okrem toho je možné vidieť uprostred pohyblivosti.

Pozitívna pohyblivosť: Rast, ktorý sa neobmedzuje iba na očkovaciu zónu. Rast smerom k stranám trubice.

Negatívna pohyblivosť: Rast iba v počiatočnom inokule.

Qa

Ako ovládacie prvky kvality môžete použiť nasledujúce kmene: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa a Moraxella sp. Očakávané výsledky sú:

1. coli: Glukózový fermenter (žlté aj plynové trubice).
2. aeruginosa: Oxidátor glukózy (žltá otvorená trubica a zelená alebo modrá tesnenie).
3. Moraxella sp: NEPREMOVAL (zelená alebo modrá otvorená trubica, zelená tesniaca trubica).

Obmedzenia

-Niektoré mikroorganizmy nemôžu rásť v prostredí. V týchto prípadoch sa test opakuje, ale do média 2% séra alebo 0,1% kvasinkového extraktu.

-Oxidačné reakcie sa často pozorujú blízko povrchu a zvyšok média môže byť zelený, rovnako ako pozitívny.

Odkazy

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
3. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. PAN -AMERICAN. Buenos Aires. Argentína.
4. Laboratóriá Francisco Soria Melguizo. 2009. Glukózového média. K dispozícii na: http: // f-soria.je
5. Laboratóriá Conda pronadisa. Stred glukózy. K dispozícii na: Condalab.com
6. BD Laboratories. 2007. Bazálneho média. K dispozícii na: BD.com