Polovica mojich, čo je, nadácia, príprava, používa

On Moja polovica Je to biochemický test, ktorý sa používa na pomoc pri identifikácii druhov baktérií patriacich do rodiny Enterobacteriace. Je dosť výživná a je zložená z glukózy, kvasinkového extraktu, peptónu, tripteínu, hydrochloridu L -Nornitínu, bromokres a agar fialovej.

Význam jeho skratky (baňa) opisuje každý z parametrov, ktoré je možné pozorovať v tomto médiu; Pohyblivosť, indol a ornitín. Motilita je schopnosť mikroorganizmu pohybovať sa okolo prítomnosti bičíkov. Aby bola táto vlastnosť pozorovaná, konzistentnosť média musí byť polo -slama, takže príprava nesie menšie množstvo agaru.

Schéma interpretácie výsledkov v strednej bani. Zdroj: Pripravil autor MSC. Marielsa Gil

Produkcia indolu dokazuje prítomnosť enzýmu triptofanasa, ktorá pôsobí na tryptofánovú aminokyselinu, ktorá je potrebná na použitie odhaľujúceho činidla na zviditeľnenie produkcie indolu.

Nakoniec ornitine určuje, či sú baktérie schopné dekarboxily.

Základ

Peptón, kvasinkový extrakt a tripteín

Tieto prvky prispievajú k výživovej sile tohto média. Slúžia ako zdroj základných živín a aminokyselín pre bakteriálny vývoj.

Okrem toho je Triptein zdrojom tryptofánu, ktorý demonštruje prítomnosť enzýmu Triptofanasa, ktorý degraduje tryptofán Due.

Indol je bezfarebný, preto je jeho prítomnosť odhalená pridaním piatich kvapiek činidla Ehrlich alebo Kovacs, obidve s p-dimetylaminobenzaldehydom.

Skupina aldehydu tejto zlúčeniny reaguje s indolom a vytvára produkt s červeným tvare Fuchsia na povrchu agaru.

Akákoľvek farba farieb by sa mala považovať za pozitívny test. Test sa musí prečítať okamžite, pretože sa farba zhoršuje.

Na druhej strane, tento test sa musí odhaliť po tom, čo si všimol výsledky pohyblivosti a dekarboxylácie ornitínu.

Môže vám slúžiť: Kompaktná kosť: Charakteristiky, štruktúra, funkcie

Interpretácia

Pozitívny test: Tvorba červeného kruhu Fuchsia pri pridávaní kova Kovacs Reagent.

Negatívny test: Neexistuje žiadna formácia krúžkov.

Pohyblivosť

Baktériová kapacita sťahovania bude dôkazom.

Negatívny test motility bude preukázaný pozorovaním tenkej línie rastu a všetko okolo bude bez rastu.

Je dôležité, aby sa pred odhalením prečítala motilita.

V mobilných baktériách, ale pomalého rastu je ťažké preukázať svoju pohyblivosť s týmto médiom. V takom prípade sa odporúča používať iné testy alebo metódy, ako napríklad stredná pohyblivosť alebo metóda čakajúcej kvapky.

Glukóza

Glukóza je fermentovateľná sacharidy, ktoré okrem poskytovania energie okyslí médium, čo je nevyhnutná podmienka, aby sa mohla vyskytnúť dekarboxylácia ornitínovej aminokyseliny.

Fermentácia glukózy by sa mala vždy vyskytnúť na základe zásady, že všetky baktérie patriace k rodinnému fermentu Enterobacteriaceae Ferment the glukóza.

L -ornitín

V prípade, že baktérie produkujú enzým ornitín dekarboxylázu, môže pôsobiť po okyslení média fermentáciou glukózy.

Enzým ornitín dekarboxyláza pôsobí na karboxylovú skupinu aminokyselín, ktorá produkuje amín nazývanú putresina, ktorá médium opäť alkheies.

Tento test by sa mal prečítať po 24 hodinách inkubácie, pretože ak sa pokúsite prečítať skôr, ako môžete test nepochopiť s falošnou negatívou.

Pamätajte, že prvou reakciou, ktorá sa vyskytne, je fermentácia glukózy, takže médium je v počiatočnej fáze žlté (prvých 10 až 12 hodín). Ak dôjde k dekarboxylácii ornitínu neskôr, médium sa zmení na fialovú.

Pred odhalením indolu je dôležité interpretovať test dekarboxylácie ornitínu, pretože agregát činidla Kovacs modifikuje farbu média.

Môže vám slúžiť: Kráľovstvá prírody a jeho vlastnosti

Interpretácia

Negatívny test: žltý alebo žltý médium.

Pozitívny test: Úplne fialová polovica.

Indikátor pH

V tomto prípade sa používa bromokresol fialová; osoba zodpovedná za odhalenie, kedy dôjde k zmene pH v strede. Okyslením indikátora so žlto.

Vysiate a odhalená technika

Na zasievanie môjho média sa používa priama alebo ihla a časť kolónie na štúdium sa zhromažďuje s ním.

Hlboká vpich sa vyrába v mojom stredu v priamej línii. Nie je to vhodné.

Inkubujte 24 až 48 hodín pri 37 ° C pri aerobióze. Pozorujte výsledky v tomto poradí: pohyblivosť, dekarboxylácia ornitínu a nakoniec odhaliť indolu.

Je vhodné vziať 2 ml do média, preniesť ho do sterilnej trubice a vykonať tam indolový test, takže ak dáva negatívny, zvyšok pôvodnej trubice sa môže inkubovať o 24 hodín viac, aby sa indol znova odhalil.

Vývoj indolu sa vykonáva nasledovne: 3 až 5 kvapiek činidla Kovacs sa pridajú do môjho prostredia a silne sa premiešajú. Pozoruje sa, či sa objaví červený krúžok Fuchsia.

Príprava

Moja polovica

Vážiť 31 g z môjho prostredia a rozpúšťajte sa v liter destilovanej vody.

Zohrejte, kým sa zmes na chvíľu nevarí, často miešajte, až kým agar úplne nerozpustíte. Distribuujte 4 ml média v 13/100 testovacích skúmavkách s bavlneným vekom.

Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút. Odstráňte z autoklávu a nechajte sa postaviť rovno v šoku, takže sa vytvorí polo -slama Taco.

Uložte do chladničky s rozlohou 2-8 ° C. Pred siatom bakteriálny kmeň nechajte temperament.

Farba dehydratovaného média je béžová a farba média pripravená fialová mierne opalestvá.

Môže vám slúžiť: Divergent Evolution: Príčiny a príklady

Konečné pH pripraveného média je 6,5 ± 0.2

Médium je žlté s kyslým pH a je fialové až alkalické pH.

Kovacs Reactive (Developer Test Developer)

Toto činidlo je pripravené nasledovne:

Meria sa 150 ml amylovej, izoamylovej alebo bulalkoholu (ktorýkoľvek z týchto troch). 10 gr of p-dimetylaminobenzaldehyd sa v ňom rozpustí. Následne sa pomaly pridáva 50 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej.

Pripravené činidlo je bezfarebné alebo čisté žlté. Musí sa uložiť do jantárovej fľaše a zachovať sa v chladničke. Tmavo hnedá farba ukazuje jej zhoršenie.

Kovacsové činidlo môže byť tiež nahradené činidlom Ehrlich. Posledne menované, pretože je citlivejšie, je uprednostňované, aby odhalil indol v baktériách, ktoré ho produkujú v minimálnych množstvách, ako v niektorých negatívnych negatívnych baciloch a určitých anaeróbách.

Využitie

Toto médium je test, ktorý dopĺňa batériu biochemických testov na identifikáciu baktérií patriacich do rodiny Enterobacteriace.

Dáta dekarboxylácie ornithínu slúžia na rozlíšenie Shigella Sonnei, to dáva pozitívne, z Shigella Boydii, Shigella Flexneri a S. Dysenterieae, Dávajú negatívne.

Tiež diferencuje rod Klebsiella, ktorý dáva negatívny, rod Enterobacter, kde väčšina jeho druhov dáva pozitívny.

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.

Qa

Zakaždým, keď je pripravená polovica bane, je možné vykonať kontrolný test. Z tohto.

Kmene, ktoré sa môžu použiť Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes a Proteus mirabilis.

Očakávané výsledky sú A. coli a m. Morganii. Dan M: +, I: + a O: +.

Klebsiella pneumoniae Dajte všetko negatívne (m:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis a Enterobacter Aerogenes Dan M:+ I:- a O: +.

Odkazy

1. Mac Faddin J. (2003). Biochemické testy na identifikáciu baktérií klinického významu. 3. vydanie. PAN -AMERICAN. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld a. (2009). Mikrobiologická diagnostika Bailey a Scott. 12 ed. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.