Budovanie EC, príprava a použitia

On ES vývar alebo vývar Escherichia coli Je to selektívne kvapalinové kultivačné médium. Toto médium sa odporúča štandardnými metódami pre počet celkových a fekálnych koliformov, najpravdepodobnejšou technikou čísla (NMP) vo vzorkách vody a potravín, kde hlavným činidlom je Escherichia coli.

Vývar EC je tvorený tripteínom, laktózou, žlčovými soľami, pipotazickým fosforečnanom, monopotazickým fosfátom, chloridom sodným a vodou. Jeho vzorec je strategicky navrhnutý tak, aby uprednostňoval rast celkových a fekálnych koliformov a zabránil rozvoju ďalších sprievodných mikroorganizmov.

Figuratívne znázornenie prípravy EC vývaru. Zdroj: Pixabay.com

Baktérie Escherichia coli Je to hlavný fekálny koliformný prítomný ako znečisťujúca látka vo vode a zdroji potravín, ktorá je príčinou dôležitých gastrointestinálnych účinkov.

Je potrebné poznamenať, že existuje veľa sérotypov Escherchia coli; Medzi nimi je Enterohemorágica (EHEC), enteroinvazívna (EIEC), enteopatogénna (EPEC), enterotoxigén (ETEC) a Enteroagregatívne (EAEC).

Toto médium má schopnosť umožniť rozvoj všetkých z nich, ale nedokáže ich odlíšiť od seba. Na tento účel sa musia vykonať ďalšie testy.

Mikrobiologická štúdia vody a potravín pre najpravdepodobnejšie číslo (NMP) na hľadanie celkových a fekálnych koliformných javov je protokolom, ktorý sa skladá z niekoľkých fáz; Presumptívna fáza, potvrdzovacia fáza a fáza dokončenia. EC vývar sa používa v potvrdzovacej fáze.

[TOC]

Základ

ES vývar

EC médium je založené na poskytovaní potrebných výživových prvkov pre optimálny vývoj celkových a fekálnych koliformov, kde sú baktérie zahrnuté Escherichia coli.

Tieto výživové prvky poskytujú Triptein, ktorý je vynikajúcim zdrojom peptidov a aminokyselín. Okrem toho obsahuje tiež laktózu, fermentovateľnú uhľohydrát, ktorý poskytuje energiu a umožňuje vám ukázať, či baktéria produkuje plyn.

Na druhej strane médium obsahuje žlčové soli, ktoré poskytujú selektívnu povahu, pretože inhibuje rast gramne pozitívnych mikroorganizmov, ktoré môžu byť prítomné vo vzorke.

Môže vám slúžiť: Flora a fauna z Nuevo León

Podobne aj dipotasy fosfat. Tento systém je potrebný, pretože laktóza obsiahnutá v bujóne má tendenciu okysliť médium, keď je fermentované mikroorganizmami, ale to je kompenzované fosfátovými soľami.

Preto sú tieto prvky nevyhnutné, pretože kyslosť bez kontroly môže ovplyvniť dobrý vývoj vyhľadávaných mikroorganizmov.

Chlorid sodný chlorid sodný stabilizuje prostredie, zatiaľ čo voda je rozpúšťadlom prítomných rozpustených látok a poskytuje životnému prostrediu kvapalnú konzistenciu.

EC bujón upravený Novobiocínom

Okrend a Rose vytvorili rôzne EC vývary, nazývané EC upravené EC bujón. Modifikácia spočívala v znížení koncentrácie žlčových solí a agregátu 20 mg/dl v Novobiocina.

Táto modifikácia uprednostňuje obnovenie kmeňov Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Tento bakteriálny sérotyp spôsobuje ťažkú ​​hemoragickú kolitídu, ktorá môže spôsobiť hemolytický uremický syndróm (SUH); ktoré zase môže generovať akútne zlyhanie obličiek s vysokou úmrtnosťou, ktorá môže dosiahnuť až 50% u starších ľudí.

Z dôvodu morbídne spôsobeného týmito baktériami na spotrebu kontaminovaných potravín, Ministerstvo poľnohospodárstva Spojených štátov (USDA) dôrazne odporúča použitie tohto média.

Príprava

ES vývar

Vážiť 37,4 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v 1 litri destilovanej vody. Zmes musí byť povolená po dobu 5 minút. Následne v zdroji tepla končí častým rozpustením mávaním.

Po rozpustení je distribuovaný v testovacích skúmavkách, ktoré boli predtým podmienené durhamovou trubicou vo vnútri. Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 minút.

Môže vám slúžiť: Sfingomyeline: Čo je, štruktúra, funkcie, syntéza

Médiové pH musí byť 6,9 ± 0,2.  Farba dehydratovaného média je béžová a pripravená je jasná jantárová.

Vývary sú uložené v chladničke až do použitia. V čase použitia musia byť vývary pri izbovej teplote.

Na druhej strane, EC vývar môže byť tiež pripravený v dvojitej koncentrácii.

EC bujón upravený Novobiocínom

Vážiť 36,7 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v 1 litri vody. Zvyšok prípravy sa rovná prípravu opísanej vyššie.

Využitie

Celková a fekálna koliformná analýza

EC vývar je ideálny pre potvrdzujúcu fázu štúdie koliformného metódy NMP, a to vo vzorkách vody, ako vo farmaceutických a potravinárskych výrobkoch.

Pevnejšie vývary výroby plynu, ktoré sa získajú v predpokladanej fáze.

Pre celkové koliformné bujóny sa inkubujú pri aerobióze 24 až 48 hodín pri 37 ° C a pre fekálne koliformné fliformy sú inkubované v aerobióze 24 až 48 hodín pri 44 ° C.

V obidvoch prípadoch sa interpretuje takto: kalné trubice s výrobou plynu sa považujú za pozitívne. Ak za 24 hodín nedochádza k výrobe plynu, pokračuje v inkubácii až 48 hodín.

Pozitívne vývary EC prechádzajú do úplnej potvrdzujúcej fázy, ktorá pozostáva z odmeňovania vo selektívnych médiách, ako sú Mac Conkey, EMB alebo endo endo agar.

Ak je použitý vývar modifikovaný novobiocínom, odporúčajú sa pozitívne trubice podobať sa v agar MAC Conkey so sorbitolom.

Qa

Kontrola kvality sa musí vykonávať z každej pripravenej strednej dávky. V prvom rade musí sterilita životného prostredia. V tomto zmysle sú inkubované jeden alebo dva vývary bez naočkovania aerobiózy počas 24 hodín pri 37 ° C. Očakávaným výsledkom je priehľadný vývar, bez zákalu alebo zmeny farieb.

Môže vám slúžiť: Interšpeciafická kompetencia: Charakteristiky a príklady

Po druhé, musí sa vyhodnotiť rast známych kmeňov, pretože môžete použiť tieto baktérie: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Vo všetkých prípadoch sa očakáva uspokojivý mikrobiálny vývoj, ktorý pozoruje zamračený vývar s výrobou plynu pre plyn A. coli a bez plynu pre salmonellu.

Ďalšie kmene, ktoré môžu byť zahrnuté do kontroly, sú: Stafylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Tieto kmene musia byť úplne inhibované.

odporúčania

-Umiestnenie trubíc Durham je nevyhnutné na štúdium koliformných.

-Distribuujte médium v ​​testovacích skúmavkách pred sterilizáciou, nikdy potom.

-Nepoužívajte, ak má médium pripravené viac ako 3 mesiace.

-Nepoužívajte, ak sa pozoruje akákoľvek zmena obvyklých charakteristík média.

Odkazy

1. Británske laboratóriá. Stredný EC. 2015. Dostupné na: BritánAlab.com
2. A. coli Enterohemoragický. Centrum pre potravinovú bezpečnosť a verejné zdravie. 2010. K dispozícii na: CFSPH.iast.Edu
3. Korporácia neogény. Médium EC. K dispozícii na: Potravinová bezpečnosť.Neogén.com
4. Neogén. Sprostredkované EC modifikované Novobiocina. K dispozícii na: Potravinová bezpečnosť.Neogén.com
5. Jure M, Condorrí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detekcia, izolácia a charakterizácia Escherichia coli Výrobca toxínov shigy z čerstvého mletého mäsa z mäsiarov z Concepción, provincie Tucumán. Rev Arg of Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  K dispozícii na: www.Scilo.orgán.