Müeller Hinton Agar Čo je, nadácia, príprava, používa

On Müeller Hinton Agar Je to pevné, selektívne výživové médium, ktoré sa skladá z infúzie mäsa, kyseliny peptónu kazeínu, škrobu, uchopenia a destilovanej vody. Toto médium umožňuje vynikajúci mikrobiálny vývoj najrýchlejších rastových baktérií.

Pôvodne ho vytvorili John Howard Müeller a Jane Hinton, aby izolovali náročné baktérie z výživového hľadiska, ako napríklad Neisseria gonorrhoeae a Neisseria meningitidis. Avšak z dôvodu jeho charakteristík sa ukázalo, že je ideálny na štúdium náchylnosti na antibiotiká a poskytuje spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky.

Preto je Müeller Hinton Agar Kultúrne médium akceptované Inštitútom klinických a laboratórnych štandardov (CLSI) a Európskym výborom pre testovanie antimikrobiálnej citlivosti, na vykonanie antimikrobiálneho testu náchylnosti pomocou metódy šírenia Kirby a Bauer.

Základ

Pretože je to neselektívne výživové médium, je vynikajúce pre rast väčšiny patogénnych baktérií.

Na druhej strane, jeho jednoduché zloženie spôsobuje, že sa látky ľahko šíria, čo je nevyhnutnou charakteristikou testu náchylnosti metódou šírenia disku diskov.

Ďalšou z jeho charakteristík je to, že obsahuje nízky počet inhibítorov, ktoré umožňujú efektívne vyhodnotenie sulfonamidu, trimetoprimov a tetracyklínov efektívne vyhodnotenie.

Malo by sa však pamätať na to, že médium musí spĺňať určité podmienky, aby zaručilo jeho správne fungovanie vrátane:

Prispôsobenie pH, hĺbka agaru a správna koncentrácia Timina, Timidina, CA⁺⁺, Mg⁺⁺ a Zn⁺⁺.

Musíte tiež vedieť, že metodika je štandardizovaná, a preto všetky parametre, napríklad:

Koncentrácia inokula, koncentrácia a zachovanie antibiotických diskov, umiestnenie správneho počtu diskov na agar, vzdialenosť medzi jedným diskom a druhým, strategické umiestnenie určitých antibiotík, atmosféra, teplota a čas inkubácia.

Príprava

Vážte 37 g z médií Müeller Hinton dehydratovaný a rozpustený v 1 litri destilovanej vody. Zahrejte životné prostredie a zároveň miešajte, aby pomohlo vášmu rozpusteniu. Varte 1 minútu.

Prineste do autoklávu sterilizáciu pri 121 ° C počas 15 minút. Pri odstraňovaní z autoklávu musí byť fixola umiestnený do kúpeľne od María do 50 ° C, aby sa ochladil. Nalejte 25 až 30 ml do planiek s priemerom 10 cm Sterri Sterri.

Doštičky by sa mali ponechať s priemernou hrúbkou 4 mm (ideálne), pričom je povolený rozsah 3 až 5 mm.

Ak chcete pripraviť krv pomocou Müeller Hinton, 5% sterilná jahňacia krv sa naleje ako základňa.

Môže vám slúžiť: glyceraldehyd 3-fosfát (G3P): Štruktúra, funkcie

Konečné pH média musí byť medzi 7,2 až 7,4.

Investujte a ušetrite do chladničky, kým nepoužívajte. Nechajte dosku pred použitím užívať okolitú teplotu.

Farba pripraveného média je ľahká béžová.

Žiadosti

Používa sa na vykonanie antibiogramu alebo testu citlivosti na antibiotiká na najrýchlejšie rastové patogény.

Ak je agar doplnený krvou, slúži na vykonanie antibiogramu náročných mikroorganizmov, ako napríklad: Pneumónia streptococcus, Haemophilus SP, Neisseria meningitidis, medzi inými. Bol tiež použitý na izoláciu Légia pneumophila.

Antibigramová technika

Pred vykonaním antibiogramu sa musí pripraviť bakteriálny roztok, ktorý je rovnajúci sa 1,5 x 10⁸ Bunky.

Za týmto účelom sa odoberú 3 až 4 kolónie čistých plodín a zavesené v trojptych sójovom bujóne alebo v Müeller Hinton Bort, inkubuje 2 až 6 hodín a koncentrácia so sterilným soľným roztokom sa upraví, pričom ho porovnáva so vzorom MAC Farland. 0,5%.

Ak požadujú mikroorganizmy, kolónie môžu byť suspendované priamo do koncentrácie 0,5% MAC Farland. Následne sa doska Müeller Hinton zasiela s tampónom impregnovaným bakteriálnym roztokom pripraveným roztokom.

Za týmto účelom je tampón ponorený do roztoku a potom sa prebytočná tekutina odstráni tlakom na stenách trubice. Ihneď po tom, ako tampón prechádza celým povrchom, bez odchodu bez dotyku, potom sa tanier mierne otočí a znova zase. Operácia sa opakuje 2 -krát viac.

Nechajte stáť 10 minút a potom položte antibiotické disky so sterilnou svorkou, pričom medzi jedným a druhým ponechajte priestor 24 mm. Po umiestnení každého albumu na agar stlačte každý z nich svorkou, aby ste sa uistili, že sú dobre pripojené.

Po tomto procese sa doštička investuje a 35-37 ° C sa inkubuje v aerobióze 16 až 18 hodín. Ak ide o náročný mikroorganizmus, môže si zaslúžiť mikroaerofíliu a ak antibigram obsahuje oxacilínové disky, mal by sa načítať po 24 hodinách.

Na meranie priemeru každého halo sa používa pravidlo. Výsledky musia byť zaznamenané v mm. Následne sú hodnoty získané s tabuľkami rezných bodov uverejnených v súčasnej príručke CLSI korelované.

Správa ako citlivé (S), stredne pokročilé (I) alebo rezistentné (R), ako to môže byť.

Antibiotiká sú vybrané podľa izolovaného mikroorganizmu a typu infekcie, ktorá sa produkuje.

Môže vám slúžiť: úrovne organizácie živých bytostí

Niekedy sa musí pamätať na strategické umiestnenie antibiotík, aby sa ukázalo vzory fenotypovej rezistencie.

Strategické umiestnenie diskov na agar Müeller Hinton

V prípade enterobaktérií musí byť disk kyseliny klavulanovej umiestnený pred cefalosporíny 3. a 4. generácie. Rozšírenie vajíčko naznačuje, že napätím je producentom predĺžených spektra beta -laktamáz (Blee). To znamená, že pacientovi by sa nemalo liečiť žiadnym cefalosporínom.

V Staphylococcus je to dôležité.

Halo rezistentný v erytromycíne a rovinnosť v clindamycínovom halo naznačuje, že kmeň má indukovateľnú rezistenciu na clindamycín, kmeň (RIC). To znamená, že liečba klindamycínom nebude účinná.

Na hľadanie kmeňov AMP C indukovateľné v enterrobaktériách a niektorých negatívnych gramových negatívnych bacili, ceftazidime, cefoxitíne alebo piperacilínovom disku.

Halo hnedá na jednom z diskov, ktoré sú otočené imipenemom, naznačuje prítomnosť indukovateľného zosilňovača C.

Na hľadanie konštitutívneho zosilňovača C, kanalizácia 500 µg s diskom Cloxacilin. Uzdravená šírka v jednom z cefalosporínov naznačuje pozitivitu.

Môžete tiež nahradiť disk cloxacilínu 9 mm filtračného papiera Whatmana č. Interpretuje sa rovnajúca sa predchádzajúcemu.

Nakoniec na preskúmanie výroby metalobetalactamáz, najmä v Pseudomonas aeruginosa, Používa sa disk impregnovaný 10 ul kyseliny etylendiamiteracetovej (EDTA 750 ug) a kyselinou tioglykolovou (SMA 300 µg), ktorý čelí diskom imipenemu a meropeneM, vo vzdialenosti 15 mm.

Test je pozitívny, ak dochádza k rozširovaniu imipenem alebo meropenem halos smerom k albumu EDTA/SMA. Tento výsledok musí byť potvrdený modifikovaným testom Hodge.

Táto metóda spočíva v naočkovaní napätia Escherichia coli ATCC 25922 na tanieri Müeller Hinton. Imipenemový disk v strede dosky je umiestnený a potom sa na perifér P. aeruginosa podozrivý. Môžete vyskúšať až 4 kmene na tanier.

Test bude pozitívny, ak existuje zóna skreslenia imipenem halo okolo stroha.

Môže vám slúžiť: neolamarckismo: pozadie a vlastnosti

Príčiny chybných výsledkov

-Zle konzervované antibiotické disky môžu spôsobiť falošnú rezistenciu. Napríklad disk oxacilínu je veľmi zraniteľný voči zmenám teploty.

-PH média pod indikovaným (kyselinou) produkuje menšie halos v aminoglykozidoch a makrolidoch (riziko falošnej rezistencie) a väčšie halos v penicilíne, tetracyklíne a novobiocíne (riziko falošnej citlivosti).

-Ak je pH nad uvedeným (alkalickým), účinky opísané vyššie sa investujú.

-Médiá s vysokými koncentráciami tymínu a tymidínu ovplyvňujú významne znižujúc sulfonamid a inhibíciu inhibície trimetoprim.

-Vysoké koncentrácie vápnika a horčíka spôsobujú falošnú odolnosť aminoglykozidov, polymixínu B a tetracyklínov pred kmeňmi Pseudomonas aeruginosa.

-Nízke koncentrácie vápnika a horčíka spôsobujú falošné citlivosti aminoglykozidov, polyxínu B a tetracyklínov pred kmeňmi Pseudomonas aeruginosa.

-Prítomnosť zinku ovplyvňuje výsledky diskov karbapenémov (imipenem, meropenem a ertapenem).

-Hrúbka média pod 3 mm vedie k výsledkom falošnej citlivosti, zatiaľ čo hrúbka nad 5 bude spôsobiť falošný odpor.

-Mobilizácia diskov v antibiograme poskytne deformované halos, pretože vypúšťanie antibiotík je okamžité.

- Veľmi slabé inokulárne ovplyvňujú výsledky, pretože v agaru nebude existovať rovnomerný rast, čo je nevyhnutná podmienka na meranie inhibície halos, okrem halosov môže byť väčší ako normálne, ako normálne.

-Príliš naložené inokulos môžu poskytnúť menšie ako normálne hals.

-Nerešpektujte vzdialenosť medzi diskami spôsobuje, že sa jeden halo prekrýva s druhým a nemožno ho správne čítať.

-Inkubovať s CO₂ Zvyšuje halos diskov tetracyklínu a meticilínu.

-Inkubujte pri teplotách pod 35 ° C, produkuje väčšie halos.

-Krvný agregát znižuje veľkosť sulfamidového halo.

Obmedzenie

Citlivosť antibiotika demonštrovaná v antibiograme proti mikroorganizmu (In vitro) Nie je to záruka, že to bude fungovať In vivo.

Qa

Aby som vedel, či médium obsahuje správne množstvo timiny, musí sa zasiať napätie Enterococcus faecalis ATCC 29212 A dokázať náchylnosť na trimetoprimsulfametoxazol (SXT), musí dať rovnaké halo alebo> 20 mm, aby bol uspokojivý.

Odkazy

1. Cona e. Podmienky pre dobrú štúdiu náchylnosti pomocou testu šírenia. Infikovať Rev Chil, 2002; 19 (2): 77-81
2. Británske laboratóriá. Müeller Hinton Agar. Dostupné na: BritánAlab.com