Malonát, príprava a použitia

On Bujón Je to médium na kvapalinové kultivácie používané na diagnostický test (Malonato Test), ktorý sa používa na rozlíšenie niektorých žánrov rodiny Enterobacteriace rodiny. Bol vytvorený Leifson v 1.933 a následne modifikované ewingom, ktorý do pôvodného vzorca pridal malé množstvo dextrózy a kvasinkového extraktu.

Médium je v súčasnosti zložené z kvasinkového extraktu, síranu amónneho, fosforečnanu dipotalizmu, monopotonického fosforečnanu, chloridu sodného, ​​malonátu sodného, ​​dextrózy a bromotimolovej modrej farby. Tento test je všeobecne zahrnutý v biochemickej identifikácii batérie pre enterobaktérie, ktorá pomáha rozlíšiť určité rody a druhy.

Grafické znázornenie testu Malonato. Do. Negatívny test, b. (Okyslenie) negatívny test, c. (Stredná alcalinizácia) pozitívny test. Zdroj: Public DomainpiCures Farebné trubice.slepo

Test Malonato je založený hlavne na schopnosti niektorých mikroorganizmov používať malonato sodný ako jediný zdroj uhlíka a ako zdroj dusíka na síran amónny.

Test Malonato zvyčajne poskytuje pozitívne u niektorých druhov žánrov Enterobacter, Klebsiella a Citrobacter. Zatiaľ čo väčšina druhov žánrov Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus a Providencia, dáva negatívnu reakciu.

[TOC]

Základ

Test malonátu spočíva v dôkazoch.

Väčšina enterobaktérií, ktoré nepoužívajú Malonato, je schopná rásť v tomto médiu, pričom ako živiny berú extrakt z dextrózy a kvasiniek.

V tomto prípade bude akýkoľvek pokus o alkalizáciu v dôsledku použitia peptonov pôsobiť výrobou kyselín generovaných fermentáciou dextrózy. Podobne aj dipotasím a monopotasické fosfáty pôsobia ako tlmivý roztok, ktorý udržiava pH pri 6,7.

Môže vám slúžiť: okolo Donaxu

Preto, keď je test negatívny, vývar je rovnaká originálna farba (zelená). Zriedkavo by sa médium mohlo okysliť kvôli fermentácii dextrózy; Bez použitia peptonov a indikátor pH by zmenil farbu od média na žltú farbu. Z tohto dôvodu musí pH klesnúť na 6.

Teraz, keď je tento test pozitívny, že mikroorganizmus používal malonato a sulfát amónneho ako zdroje uhlíka a dusíka, bez použitia ostatných komponentov.

V tomto prípade je médium alkalizované v dôsledku oslobodenia sodíka a následnej tvorby NaOH. V tomto zmysle indikátor pH (bromotimol modrá) zmení farbu stredu zelenej na modrú, keď sa pH rovná alebo väčšie ako 7,6. Modrá môže byť jasná alebo intenzívna (Pruska modrá).

Nakoniec chlorid sodný udržiava osmolaritu média a voda je riedením všetkých komponentov.

Interpretácia

Vývar rovnakej farby (zelený): negatívny test

Žltý vývar: negatívny test

Jasný alebo intenzívny modrý vývar: pozitívny test

Existuje variant nazývaný Malonato fenylalanínový vývar, ktorý sa tiež nazýva Shaw a Clarke Stredne. V tomto prípade je možné analyzovať dva testy, použitie malonato ako zdroja uhlíka a produkcia kyseliny pyruvovej z fenylalanínu.

Príprava

Bujón

Množstvo gramov špecifikovaných vložkou zvoleného komerčného domu je váženie (môže sa líšiť od jedného do druhého). Ťažké gramy sú zavesené v liter destilovanej vody. Mierne zahrievajte až do úplného rozpustenia. Distribuujte 3 ml média v 13/100 testovacích trubiciach s bavlneným vekom.

Sterilizovať v autokláve pri 121 ° C počas 15 alebo 20 minút.

Ochladiť. Ak sa nebudú používať okamžite, s výnimkou chladničky až do použitia. Pred inokulovaním pri ich inokulácii pri teplote miestnosti.

Môže vám slúžiť: Giptodon

Médiové pH musí byť 6,7 ± 0,2. Farba pripraveného média je fľaša zelená.

Fenylalanínový vývar

Vážiť 11 g dehydratovaného média a rozpúšťajte sa v 1 litri destilovanej vody. Zvyšok prípravy rovnajúce sa prípravke opísanej vyššie.

Môže sa tiež pripraviť pridaním 2 GR/l fenylalanínu do média bujónu Malonato skôr, ako je sterilizovaný.

Využitie

Používa sa ako súčasť biochemickej testovacej batérie, ktorá je namontovaná na identifikáciu baktérií rodiny Enterobacteriaceae rodiny.

Pomôžte rozlišovať medzi:

-Rod Klebsiella a Enterobacter (+) rodu Escherichia a Serratia (-).

-Druh SSP Arizonae Entrtrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica ssp diarizonae (+), druh Salmonella Enterica SSP Enterica (-).

-Rodu Klebsiella všeobecne (+) rodu Actinobacillus (-).

-Niekedy to môže pomôcť diferenciácii žánrov a druhov baktérií nepatria do rodiny Enterobacteriaceae, ako medzi negatívnymi gramovými negatívnymi bacilmi Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter SP (-).

Zdroj: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.

Postup

Pri zapaľovači sa odoberie časť čistej kolónie pomocou správne sterilizovanej a ochladenej platinovej rukoväte. Vzorka odobrala (svetlo inokulum) sa rozpustí v malonato bujóne. Inkubuje sa s lenivým vekom v aerobióze pri 35 ° C ± 0,2 počas 24 až 48 hodín.

Môžete tiež naočkovať vývar Malonato z úrody 18 - 24 hodín v triptyse sójovom vývaru. V tomto prípade sa odoberie 0,01 ml so sterilnou pipetou a naočkuje sa bujón Malonato. Inkubuje sa s lenivým vekom v aerobióze pri 35 ° C ± 0,2 počas 24 až 48 hodín.

Môže vám slúžiť: sekundárne spotrebitelia

Dokončený čas, keď sa výsledky interpretujú. Akákoľvek pozostatok modrej farby dokončeného 48 hodín inkubácie by sa mala považovať za pozitívnu. Test by sa nemal interpretovať ako negatívny, kým sa nesplní 48 -hodinový inkubačný čas.

V prípade použitia variantu fenylalanunového vývaru malonato sa malonato najskôr interpretuje a potom sa pridá 5 kvapiek HCl 1N a 3-5 kvapiek 8% chloridu železitého. Tmavo zelená farba sa interpretuje ako pozitívny test na fenylalanín. Ak sa naopak médium stáva bledou modrou, test je negatívny na fenylalanín.

Qa

Na vykonanie kontroly sterility média sa musí jeden alebo dva vývary inkubovať pri 35 ° C ± 0,2 počas 24 hodín inkubácie. Po tomto čase by nemala dôjsť k zákalu alebo zmene farby.

Pre kontrolu kvality môžete použiť známe alebo certifikované kmene, napríklad: Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrtrico Salsonella SSP ATCC 13314 a Escherichia coli ATCC 25922.

Očakávané výsledky sú:

• Enterobacter Aerogenes, Klebsiella pneumoniae a SSP Arizonae Entrtrico Salsonella SSP Dávajú pozitívnu reakciu (polovičná modrá).
• Pre Escherichia coli Výsledok musí mať negatívny, to znamená, že sa očakáva, že nedochádza k zmene farby (zelená) alebo že v dôsledku fermentácie glukózy zažltne.

Obmedzenia

Nepoužívajte vývar, ktorý vykazuje zákal, precipitáty, zmenu farieb alebo akékoľvek známky zhoršenia.

Odkazy

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologická izolácia Salmonella spp. a molekulárne nástroje na detekciu. Neinorte zdravie. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. K dispozícii na: SCIELO.orgán.co
2. BBL. Malonate bujón, modifikovaný Ewing. 2007. K dispozícii na: BD.com
3. Senna Laboratories. Bujón. K dispozícii na: Scientific.com
4. Renylab. Bujón. 2013. K dispozícii na: toto.Renylab.indiánsky.Br
5. Diagnostika mbiológie. Bujón. K dispozícii na: mbiológia.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologická diagnostika. 5. vydanie. PAN -AMERICKÁ REDICIAL S.Do. Argentína.
7. Laboratóriá Conda pronadisa. Fenylalanínový vývar. K dispozícii na: Condalab.com