Nadácia biuretov, reagencie, postup, použitie

On Biuret Je to činidlo používané na stanovenie proteínov s dlhým reťazcom a krátkym reťazcom. Používa sa najmä v oblasti analytickej chémie a uroanalýzy na skúmanie koncentrácie celkového séra, plazmy a močových proteínov.

Hodnoty proteínov môžu byť v určitých patológiách zvýšené alebo znížené. Obrázky hipoproteinémie sú zvyčajne prezentované u pacientov s ochorením obličiek, u podvyživených a u pacientov s chronickými infekciami.

Chemická štruktúra komplexu vytvoreného pri testovaní biuretov pozitívne. Zdroj: Yikrazuul [verejná doména]/Flickr

Zatiaľ čo hyperproteinémia sa pozoruje v patológiách, ako je napríklad mnohopočetný myelóm, systémový lupus erythematosus, bakteriálna endokarditída, bakteriálna meningitída, makroglobulinémia Waldenstrom.

Na druhej strane prítomnosť proteínov v moči je spôsobená filtráciou albumínu obličky. Toto je patologické správanie, ktoré sa musí študovať.

V tomto zmysle je biuret veľmi užitočný, pretože umožňuje kvantifikáciu prítomnosti sérových proteínov, plazmy, moču, medzi mnohými ďalšími vzorkami.

Dokonca aj biuret sa môže použiť na skúmanie prítomnosti a koncentrácie proteínov v neznámych alebo neznáme zložení vzoriek. Preto sa široko používa v oblasti výskumu.

Test biuretov je založený na detekcii peptidových väzieb. Test je uvedený v alkalickom médiu. Vzorka musí obsahovať najmenej dve peptidové odkazy, aby sa mohol vytvoriť farebný komplex fialovej energie. Komplex je tvorený spojením odkazov a ión medi.

[TOC]

Základ

Činidlo biuretov je tvorené hydroxidom draselným, sulfátom a sodným a draselným tartrato. Hydroxid sodný sa používa na alkalizáciu prostredia, pretože tento stav je nevyhnutný na to, aby sa vyskytla reakcia.

Látky, ktoré reagujú s proteínmi, sú sulfát s obsahom sodný, zatiaľ čo tartrato sodný má funkciu neumožňovania tvorby medi hydroxidu, ktorý má tendenciu zrážať sa a interferovať s reakciou.

Môže vám slúžiť: fermentácia: História, proces, typy, príklady

Ak vo vzorke existujú látky, ktoré majú peptidové väzby (polypeptidy alebo proteíny), test poskytne pozitívny.

Reakcia sa interpretuje ako pozitívna, keď sa riešenie stane fialovou. Farba sa vytvára tvorbou komplexu medzi najmenej dvoma peptidovými väzbami, ktoré majú skupinu CO-NH a súčasné podložky.

Fialový komplex sa môže tvoriť dvoma spôsobmi: jeden je spôsobený stratou protónov uprostred skupín, ktoré sa viažu na kov (drsný) a druhý spojením kyslíka a dusíka, ktoré sú voľné a viažu sa s meďou.

Táto reakcia sa môže líšiť v intenzite a farbe v závislosti od typu proteínu.

Test sa môže vykonať kvalitatívne alebo kvantitatívne. V kvalitatívnej podobe sa uvádza ako pozitívny alebo negatívny. Zatiaľ čo v kvantitatívnej forme sa koncentrácia môže merať spektrofotometrickou metódou.

Reakcia sa nachádza medzi 540-560 nm. Intenzita farieb je priamo úmerná koncentrácii peptidových väzieb vo vzorke.

Činidlá

-Hydroxid sodný (NaOH) pri 20%

-1% pentahydrátový sulfát (CUO₄. 5H₂Buď)

-Zmiešaný sodík a tetrahydráty tartrato draselný (KNAC₄H₄Ani₆4H₂Buď)

Stabilita činidla BIURET

-Musí sa udržiavať v chladení.

Postup

Technika

-Umiestnite 100 ul vzorky alebo vzoru, ktorý sa má analyzovať v skúmavke.

-Pridajte 2 ml hydroxidu sodného.

-Veľmi dobre premiešajte.

-Pridajte 5 ml činidla Biuret.

-Zmiešajte a nechajte 25 minút pri teplote miestnosti, prikryte a chráňte pred svetlom.

-Pozorujte formáciu alebo nie farby a zmerajte sa spektofotometricky.

Kalibračná krivka

Ak chcete vykonať kalibračnú krivku, môžete použiť albumín v sére ako vzor. Z toho sa pripravuje niekoľko koncentrácií. Napríklad 25, 50, 75, 100, 125 a 150%.

Reakcia je namontovaná so všetkými týmito známymi koncentráciami a absorbancia sa odčítava na vlnovú dĺžku 540 nm. S údajmi o známych koncentráciách a absorbujúcich odčítaniach sa vykonáva kalibračná krivka.

Môže vám slúžiť: Čínska flóra a fauna: Reprezentatívne druhy

Pri každom určovaní alebo množstve spracovaných vzoriek je to vhodné. Ako kalibračný vzor môžete použiť sérové ​​hovädzí albumín 0,1-2 mg/ml.

Merania sa vykonávajú v 540 nm spektrofotometre.

Linearita je splnená až do koncentrácie 12 g/dl.

Zasahovanie

Látky, ktoré zasahujú do testu biuretov

Aj keď to nie je príliš časté, treba poznamenať, že počas vykonávania tohto testu môžu niektoré látky zasahovať. Napríklad prítomnosť amónia môže inhibovať tvorbu farieb.

Podobne by iné látky mohli absorbovať rovnakú vlnovú dĺžku, napríklad určité pigmenty.

Na druhej strane, interferencia sa môže generovať, keď iná látka iná ako peptidová väzba tvorí komplex s kovovou soľou. Príklad: Niektoré uhľohydráty a určité lipidy.

V prípade, že ukazuje, že analyzuje určitý typ zrazeniny, musí sa filtrovať alebo odstrediť pred nastavením testu.

Látky, ktoré nezasahujú do testu biuretov

Test nie je ovplyvnený prítomnosťou:

-Bilirubín až do koncentrácie 20 mg/dl.

-Hemoglobín na koncentráciu 750 mg/dl.

-Dextran na koncentráciu 30 g/l.

-Triglyceridy až do koncentrácie 4000 mg/dl.

Výhody

-Je to jednoduchý spôsob vykonávania.

-Je to ekonomický test.

-Má vysokú proteínovú špecificitu.

-Málo rušenia.

Nevýhody

Má malú citlivosť na detekciu nízkych množstiev proteínov. Práca, ktorú vykonali Fuentes a spolupracovníci, potvrdzuje, že metóda testovania biuretov má detekčný limit proteínu 1 mg/ml a kvantifikačný limit 3 mg/ml.

Ďalší výskum, ktorý sa uskutočnil na University of Amazon, však uvádza oveľa nižšie hodnoty. Detekčný limit, ktorý uvádza štúdia, je 0,020 mg/ml a kvantifikačný limit 1.33 mg/ml.

Žiadosti

Činidlo alebo test biuretov sa používa na stanovenie proteínov v klinických a neklinických vzorkách v rutinných a výskumných laboratóriách.

Môže vám slúžiť: Charakteristiky živých bytostí

Patológie, ktoré študujú alebo sa znížili Bielkovina

V mnohých patológiách je dôležité určiť koncentráciu celkových proteínov v klinických vzorkách, ktorá je schopná byť vysoká alebo znížená.

Sú povýšené v:

-Viacnásobný myelóm,

-Systémový erythematosus,

-Bakteriálna endokarditída,

-Bakteriálna meningitída,

Waldestrom makroglobulinémia, okrem iného.

Zníži sa v:

-Obličková nedostatočnosť,

-Ľudia s ťažkou podvýživou,

-Pacienti s chronickými infekciami, okrem iného.

Klinické vzorky

Najbežnejšími klinickými vzorkami sú sérum, plazma a moč. Normálna hodnota sérových alebo plazmatických proteínov je 6.0-8.8 gr/dl.

Koncentrácia proteínov u dospelých u dospelých nepresahuje hodnotu 150 mg/24 -hodinu.

Normálna hodnota indexu proteínov moču/kreatinínu v moči

Dojčatá: < a 0,50 mg

Deti 2 roky a staršie: Index: 0,20 mg

Dospelí: < 0,2 mg

Neklinické vzorky

Reakcia biuretov môže byť použitá pre mnoho typov neklinických vzoriek, ako sú mliečne výrobky, antiofidové séra alebo akúkoľvek neznáme látky, na ktorú sa chce prítomnosť proteínov preskúmať.

Odkazy

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez a. (2014). Fyzikálno-chemická charakterizácia a obsah bielkovín v extraktoch tekutín z mangrovového ostricu (Crassostrearizophorae). Kubánsky denník chémie, 26 (1), 66-74. Získané 26. júna 2019, z http: // scelo.SLD
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funkčná charakterizácia manga semien (Mangifera označuje l.) Časopis rozvoja vedy. 2015; 6 (1): 67-75
3. „Biuret.„ Wikipedia, encyklopédia zadarmo. 19. júna 2019, 16:37 UTC. 26. júna 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Štandardizácia biuretov na kvantifikáciu celkového proteínu vo viacprávnom antibotropnom sére vyrobenom v Národnom centre biologických výrobkov. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  K dispozícii na: úložisko.Zjazd.Škriatok.pešo
5. Vinársky laboratórium. Celkové proteíny. Kolorimetrická metóda na stanovenie celkových sérových a plazmatických proteínov. K dispozícii na: Wiener-Lab.com.ar