Sabouraud agar Čo je, nadácia, príprava, používa

On Agar, Je to tiež známy ako agar Sabouraud dextrózy, je to pevné kultivačné médium, najmä obohatené o izoláciu a vývoj húb, ako sú kvasinky, plesne a dermatofyty.

Preto toto médium nemôže chýbať v mikrobiologickom laboratóriu na skúmanie prítomnosti patogénnych alebo oportunistických húb, či už z klinických alebo neklinických vzoriek. Je tiež ideálny pre rast vláknitých baktérií, ako sú streptomices a nokardias. Jeho použitie je veľmi široké, pretože sa dá použiť v ľudskej, živočíšnej, zeleninovej a priemyselnej mykológii.

Do. Sabouraud agar bez prasnice. B. Sabouraud agar vysadený kvasinkami. Zdroj: Fotografie urobené autorom MSC. Marielsa Gil

Toto médium vytvorilo v roku 1896 vynikajúci dermatológ Raimond Sabouraud, ktorý sa stal špecializovaným na celom svete pri poruchách pokožky hlavy, najmä spôsobený dermatofytmi.

Jeho tvorba bola taká dôležitá, že sa odvtedy používa a je dodnes udržiavaná, hoci s určitými úpravami.

Aj keď je to špeciálne pre huby, v týchto stredných baktériách môžu rásť, preto je potrebné pre vzorky so zmiešanou flórou zahrnutie antibiotík do jeho prípravy, a preto inhibuje rast bakteriálnej flóry, ktorá môže byť prítomná.

Výber antibiotík sa musí vykonať opatrne a berúc do úvahy typ húb, ktoré sa majú obnoviť, pretože niektoré sú inhibované v prítomnosti určitých látok.

Základ

Sabouraud dextróza agar je prostriedok, že vo svojej pôvodnej formulácii je slabo selektívny kvôli jeho 5 kyselinovému pH.6 ± 0.2 Avšak baktérie sa môžu vyvinúť, hlavne v predĺžených inkubáciách.

Médium obsahuje pankreatický kazeín a digreatický tkanivový peptón živočíšneho tkaniva, ktorý poskytuje zdroj uhlíka a dusíka na vývoj mikroorganizmov.

Obsahuje tiež vysokú koncentráciu glukózy, ktorá pôsobí ako zdroj energie, ktorá uprednostňuje rast húb nad baktériami. To všetko sa zmieša s agar -agar, komponent, ktorý vám poskytuje primeranú konzistenciu.

Na druhej strane, Sabouraud dextróza agar môže byť selektívny, ak sa pridajú antibiotiká.

S antibiotikami je obzvlášť užitočný vo vzorkách rany, otvorených vredov alebo akejkoľvek vzorke, v ktorej je podozrivá veľká bakteriálna kontaminácia.

Najpoužívanejšie kombinácie Sabouraud dextrózy s antibiotikami

-Sabouraud agar s chloramfenikolom: Ideálne na obnovenie kvasiniek a vláknitých húb.

-Sabouraud agar s gentamycínom a chloramfenikolom: Takmer všetky vláknité huby a kvasinky rastú v tomto médiu a inhibuje veľké množstvo baktérií, vrátane enterobaktérií, pseudomónov a stafylococcusu.

-Sabouraud agar s cykloheximidom: Je to obzvlášť užitočné pre vzorky z kože alebo dýchacích ciest, pokiaľ je podozrenie na dimorfné huby.

Cykloheximid by sa mal používať opatrne; Aj keď sa používa na inhibíciu rastu nepatogénnych alebo environmentálnych húb a kvasiniek, ktoré môžu byť prítomné ako znečisťujúce látky vo vzorke, inhibuje tiež rast niektorých húb, ako je napríklad Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium SP a Ostatné oportunistické huby.

-Sabouraud agar s chloramfenicolom plus cykloheximid: používa sa hlavne na izoláciu dermatofytov a dimorfných húb. Má nepríjemnosti, ktoré brzdia niektoré druhy oportunistických húb, ako napríklad Candida no albicans, Aspergillus, Zigomicetos alebo C. Neoformácia.

-Sabouraud agar s chloramfenikolom, streptomycínom, penicilínom G a cykloheximidom: je ideálny pre extrémne kontaminované vzorky baktériami a hubami sapropytov Actinomyces a Nocardias, Okrem vyššie uvedených oportunistických húb.

Môže vám slúžiť: Hominizačný proces: Charakteristiky a fázy

Príprava

Ak majú samostatné ingrediencie, dá sa pripraviť takto:

Dextróza 

Vážiť:

- 40 Gr dextrózy

- 10 GR peptónu

- 15 g agar -agar

- Zmerajte 1 000 ml destilovanej vody

Všetky zložky sú zmiešané, pH je upravené na 5,6. Rozpoly sa rozpustia varením, 20 ml média je distribuovaných v trubiach 25 x 150 mm, bez toho, aby sa držalo a bavlnené veko, výhodne.

Skúmavky s bavlneným vekom. Zdroj: Fotografia, ktorú urobil autor MSC. Marielsa Gil

Podľa dostupnosti je možné použiť aj ďalšie miery trubice.

Berú autokláve na 10 minút do atmosféry tlaku (121 ° C). Nemalo by byť prekročené v autoklávovanom čase. Pri odchode z autoklávu sú trubice naklonené pomocou podpory, až kým si neukončia na vrchole flauty.

Ďalším spôsobom je rozpustenie ingrediencií zahrievaním, až kým sa nevarí. V rovnakom autoklavickom felole po dobu 10 minút a potom distribuujte 20 ml na Petriho taniere.

Ak je k dispozícii médium Sabouraud Dextrose, ktoré už obsahuje všetky zložky, je špecifikovaná suma špecifikovaná komerčným domom pre liter vody. Zvyšok krokov sa rovná krokom opísaným vyššie.

Sabouraud Dextrose Agar (Modifikácia Emmons)

Vážiť:

-  20 Gr dextrózy

- 10 GR peptónu

-  17 Gr of Agar -agar

-  Zmerajte 1 000 ml destilovanej vody

Všetky zložky sú zmiešané, pH je upravené na 6.9. Postupujte rovnakým spôsobom v predchádzajúcom prípade.

Existujú komerčné domy, ktoré ponúkajú médium so všetkými prísadami. V tomto prípade zvážte a pripravte spôsob, akým ju vložka popisuje.

Sabouraud dextróza agar (modifikácia Emmons) s chloramfenikolom

Chloranfenicol Matka roztok

- Vážiť 500 mg bázy chloramfenikolu

- Zmerajte 100 ml 95% etanolu

- Miešať sa

Médium Sabouraud Dextrose (EMMON) je pripravené, ako je opísané a dodatočne pre každý liter pridania 10 ml chloranfenikolového roztoku matky pred autoklavic.

Sabouraud Emmons s cykloheximidom dextrózou

Cykloheximidový roztok

- Vážiť 5 g cykloheximidu

- Zmerajte 100 ml acetónu

- Miešať sa

Apoure Sabouraud Dextrose.

Sabouraud dextróza agar (EMMON) s chloramfenikolom a cykloheximidom

Médium dextrózy Saburaud (EMMON) je pripravené, ako je opísané a navyše pre každý liter pridania 10 ml chloranfenikolového roztoku matky a 10 ml roztoku matky cykloheximidu pred autoklátom.

Môže vám slúžiť: Vedenia, ktoré súvisia s biológiou

Ďalšie antibiotiká, ktoré je možné pridať

dvadsať.000 až 60.000 jednotiek penicilínu na liter média.

30 mg streptomycínu na liter média.

Obe musia byť začlenené po médiu, mierne ochladené (50-55 ° C).

0,04 g neomycínu na liter média.

0.04 g gentamicínu na liter média.

Osobitné úvahy

Bezpečnosť je uprednostňovaná pred zasiatím agar dextrózy v klinoch (naklonených do vrcholu flauty) ako na Petriho taniere, aby sa predišlo disperzii a vdýchnutiu spór.

Je dôležité, aby trubice so sabouraudovým vekom boli pokryté bavlnou a nie vekom závitu, pretože sa ukázalo, že polo -aeróbne podmienky inhibujú tvorbu spopesty v niektorých kmeňoch, napríklad z Kokcidioidy immitis. Väčšina húb je navyše aerobes.

V prípade použitia veka vlákna, nie pevne zatvorené.

Qa

Pripravené médiá by sa mali stať kontrolou kvality, aby sa overilo svoje správne fungovanie. Z tohto dôvodu sú zasiahnuté určité kmene.

Pre Sabouraud Dextrose Candida albicans, ktorý musí mať vynikajúci rast. Ďalšia doska je naočkovaná kmeňmi z Escherichia coli, Musí byť úplne inhibovaný.

Planik bez naočkovania sa tiež inkubuje, pri ktorej by nemal rásť žiadny mikroorganizmus.

Pre agar Sabouraud dextrózy s chloramfenikolom a cykloheximidom  Trichophyton mentagrofyty, Musí sa rozvíjať dobre. Ďalšia doska je naočkovaná napätím Aspergillus flavus, v ktorom musí existovať vzácny rast alebo non -rast. Okrem toho sa inkubuje nekonečný plak, aby sa preukázala jeho sterilita.

Pre Sabouraud dextrózu s cykloheximidom, kmene z Candida albicans, Trichophyton rubrum  ani Canis microSporum, čo musí preukázať dobrý rast.

Podobne aj napätie Aspergillus flavus, demonštrovanie vzácneho rastu alebo ne -rastu. Nakoniec inkubujte doštičku bez naočkovania na reguláciu sterility.

Žiadosti

Primárna kultivácia

Classic Sabouraud Dextrose Agar obsahuje 4 Gr dextrózy a je vynikajúci ako primárny prostriedok izolácie, pretože ukazuje charakteristickú morfológiu každej húby.

Je tiež vynikajúci na demonštráciu výroby pigmentov. Nie je to však najvhodnejší prostriedok na pozorovanie sporulácie.

Sa neodporúča kultivovať Blastomyces dermatitidis, čo je inhibované vysokou koncentráciou súčasnej glukózy.

Na druhej strane, niektoré úvahy sa musia pamätať na.

Niektoré huby sa vyvíjajú lepšie pri izbovej teplote, ako sú formy, iné sa vyvíjajú úspešne pri 37 ° C, ako sú napríklad niektoré kvasinky a iné sa môžu vyvinúť pri oboch teplotách (dimorfné huby).

Preto je to niekedy potrebné.

Napríklad, Sporothrix Schenckii Je zasiate na dvoch doskách; Jeden je inkuba pri teplote miestnosti, aby sa získala fáza formy a druhá sa inkubuje pri 37 ° C, aby sa získala fáza zvýšenia vzostupu, ale v druhej je potrebné do prostredia pridať 5% krv.

Môže vám slúžiť: oxidázová glukóza: charakteristiky, štruktúra, funkcie

V iných prípadoch, rovnako ako vo vzorkách Mythom, sú zasiahnuté dve platne Sabouraud agar, jedna s chloramfenikolom a druhá s cykloheximidom. Prvý umožní rast kauzálnych činidiel mýtómu mýtického pôvodu (eumicetóm) a druhých príčinných látok micetómov bakteriálneho pôvodu, ako sú aktinomicetómy.

Neporulácia

Sabouraud dextróza agar modifikovaný spoločnosťou Emmons obsahuje 2 GR dextrózy a nielenže slúži na izoláciu, ale aj pre sporuláciu a ochranu húb.

V tomto médiu, ak dokážete obnoviť kmene z Blastomyces dermatitidis.

Ochrana

Na ochranu hubových plodín môžu byť uložené v chladničke (2-8 ° C). Čas ochrany sa môže meniť medzi 2 až 8 týždňami. Po tomto čase musia byť subjektívne na opakovanie procesu.

Niektoré huby zostávajú lepšie pri izbovej teplote, ako napríklad Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T, T. Violáka a MicroSporum Audounii.

Udržiavanie napätia sa môže rozšíriť, aby sa zabránilo pleomorfizmu, ak je dextróza agaru úplne eliminovaná a ak sa zníži množstvo agaru do prostredia, aby sa predišlo suchosti.

Mikrokultúry

Na identifikáciu niektorých vláknitých húb je potrebné vykonávať mikrokultúry pomocou Sabouraudového agaru alebo iných špeciálnych prostriedkov na pozorovanie sexuálnych a asexuálnych reprodukčných štruktúr.

V ľudskej mykológii

Používa sa hlavne na diagnostiku plesňových chorôb, najmä tých, ktoré ovplyvňujú pokožku a jej prílohy (vlasy a nechty).

Vzorky môžu byť sekréty, exsudáty, pokožka, chĺpky, nechty, spúta, LC alebo moč. Bežne izolované patogény sú dermatofyty, huby spôsobujúce subkutánnu a systémovú mykózu.

Mykológia zvierat

Zvieratá sú často postihnuté plesňovými infekciami, preto je Sabouraud agar rovnako užitočný v mykológii zvierat ako u človeka.

Napríklad dermatofyty môžu ovplyvniť zvieratá. To je prípad Canis var skreslenie mikropór, To často infikuje psy, mačky, kone, ošípané a opice. Navyše, Mikropodnikové cighseum infikuje psy, mačky a hovädzí dobytok.

Vtáky, ako sú kurčatá, kohúty a kurčatá Microsporum gallinae.

Ďalšie huby, napríklad Zymonema farciminosum, Sú tiež príčinou choroby u zvierat, najmä u koní, muly a somáre, ktoré produkujú dôležitý zápal v lymfatických nádobách.

Sporothrix Schenkii a histoplazma kapsulatum Ovplyvňujú domáce a ľudské zvieratá.

Environmentálna mykológia

Mnoho patogénnych alebo oportunistických húb sa môže sústrediť v danom čase v danom prostredí, najmä v operačných sálach a jednotkách intenzívnej starostlivosti (ICU) kliník a nemocníc. Preto je potrebné ovládať to isté.

Ďalšími zraniteľnými priestormi sú staré knižnice a budovy, ktoré môžu byť ovplyvnené koncentráciou environmentálnych húb.

V environmentálnych štúdiách sa používa izolácia húb Sabouraud dextrose na izoláciu húb.

Priemyselná mykológia

Sabouraud Dextrose Agar nemôže chýbať pri štúdiu znečisťujúcich húb pri výrobe kozmetiky, jedla, nápojov, kože, textilu, textilu,.

Mykológia rastlín

Rastliny trpia aj hubami, ktoré ovplyvňujú rôzne časti rastliny, ktoré môžu dokonca ukončiť úrodu, čo spôsobuje veľké straty v poľnohospodárstve.

Odkazy

1. Laboratórium Valtek. (2009). Sabouraud dextróza agar s cykloheximida. K dispozícii na: Andinamedica.com.
2. Navarro alebo. (2013). Veterinárna mykológia. Národná agrárna univerzita. Nikaragua.